Eight 2-day-old SPF Chickens were each inoculated Orally With 3 Sing1e dose Of 5 × 105 oocysts of Cryptosporinium boilevi. and immunoglobulin G (IgG) antibody responses were chronologically measured by indirect immunofluorescent antibody (IFA) assay. Anti-C. bcileyi IgG antibody levels remained high (1 : 106.67 to 1:512.00) for at least 4 months with 330 days of a detectable period. Ten days after the negative conversion, each chicken was re-challenged with 1 × 107 oocysts of the same species. Subsequent infection in 340-day-old individuals caused sudden elevated IgG antibody levels and the titer peaked on day 28 postchallenge inoculation (PCI), at 1:1.024 with a 65 days of detection period. Chickens in primary infection showed oocyst shedding profiles. but did not exhibit any oocyst shedding before or after experimental reinfection.
Cryptosporidium parvum oocysts were isolated from a child suffering from acute gastroenteritis and successfully passaged in a calf and mice (designated hereafter SNU-H1) in the Republic of Korea; its molecular genotype has been analyzed. The GAG microsatellite region was amplified by a polymerase chain reaction (PCR), with a 238 base pair product, which is commonly displayed in C. parvum. The isolate was shown to be a mixture of the genotypes 1 (anthroponotic) and 2 (zoonotic). To study its infectivity in animals, 2 calves and 3 strains of mice were infected with the SNU-H1; in these animals, the propagation of both genotypes was successful. In immunosup-pressed (ImSP) BALB/c and C57BU6 mice the number of oocysts decreased after day 10 post-infection (PI); but in ImSP ICR mice, they remained constant until day 27 PI. The results show that both the C. parvum genotypes 1 and 2 can be propagated in calves and ImSP mice.
Cryptosporidium is an important pathogen causing gastrointestinal disease in snakes and is distributed worldwide. The main objectives of this study were to detect and identify Cryptosporidium species in captive snakes from exotic pet shops and snake farms in Thailand. In total, 165 fecal samples were examined from 8 snake species, boa constrictor (Boa constrictor constrictor), corn snake (Elaphe guttata), ball python (Python regius), milk snake (Lampropeltis triangulum), king snake (Lampropeltis getula), rock python (Python sebae), rainbow boa (Epicrates cenchria), and carpet python (Morelia spilota). Cryptosporidium oocysts were examined using the dimethyl sulfoxide (DMSO)-modified acid-fast staining and a molecular method based on nested-PCR, PCR-RFLP analysis, and sequencing amplification of the SSU rRNA gene. DMSO-modified acid-fast staining revealed the presence of Cryptosporidium oocysts in 12 out of 165 (7.3%) samples, whereas PCR produced positive results in 40 (24.2%) samples. Molecular characterization indicated the presence of Cryptosporidium parvum (mouse genotype) as the most common species in 24 samples (60%) from 5 species of snake followed by Cryptosporidium serpentis in 9 samples (22.5%) from 2 species of snake and Cryptosporidium muris in 3 samples (7.5%) from P. regius.
Fecal samples were collected from 257 dogs in four areas in Korea during the period of .january 1996 to November 1997 and examined by immunofluorescence assay for Crwptosporinium oocysts using a commercial diagnostic kit (Meridian Diagnostics, Cincinnati, Ohio) . Of the 257 samples, 25 (9.7%) were positive for Crvptosporiniun. Differences were noted in the prevalence of canine cryptosporidiosis in both areas and dog types. The results provide a further evidence of environmental contamination and widespread distribution of the parasite in Korea.
The outbreak cases of Cryptosporidium or Giardia from drinking water in abroad have drawn attentions on the public health. It is well known that Cryptosporidium is the most resistant organism against chlorine disinfection. To guesstimate the levels of Cryptosporidium and Giardia in Korean surface water, 1~2 samples from 22 drinking water sources in four Korean major rivers of Han, Keum, Nakdong, and Youngsan were monitored. In addition, two sites in Kyunganchon, a contaminated river were monitored for comparison. In source waters, detection rates of Cryptosporidium and Giardia were 15% (6/39) and 21% (5/24) with the range of 1~3 oocysts/10 L and 1~6 cysts/10 L, respectively. In Kyunganchon, they were 60% (6/10) and 70% (7/10) in the range of 1~9 oocysts/10 L and 10~72 cysts/10 L, respectively. When one of the source waters in Han river was monitored monthly, Cryptosporidium were found mostly in cold season. Matrix of the samples gave influence on the recoveries of the spiked protozoa. The recoveries of both Cryptosporidium and Giardia increased in the samples of Kyunganchon, known as contaminated area. However, protozoan recovery did not show significant relation with turbidity, the index of matrix contamination, which implies that there are additional unveiled features of matrix affecting the recoveries of the protozoa. The protozoan distribution in Kyunganchon showed significant relations with Cl. perfringens, anaerobic and spore forming indicator bacteria of fecal contamination by regression analysis, but not with turbidity, the general indicator of water quality.
PARK Jae-Hwan;GUK Sang-Mee;HAN Eun-Taek;SHIN Eun-Hee;KIM Jae-Lip;CHAI Jong-Yil
Parasites, Hosts and Diseases
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v.44
no.1
s.137
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pp.27-33
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2006
Two species of Cryptosporidium are known to infect man; C. hominis which shows anthroponotic transmission between humans, and C. parvum which shows zoonotic transmission between animals or between animals and man. In this study, we focused on identifying genotypes of Cryptosporidium prevalent among inhabitants and domestic animals (cattle and goats), to elucidate transmittal routes in a known endemic area in Hwasun-gun, Jeollanam-do, Republic of Korea. The existence of Cryptosporidium oocysts was confirmed using a modified ZiehlNeelsen stain. Human infections were found in 7 $(25.9\%)$ of 27 people examined. Cattle cryptosporidiosis cases constituted 7 $(41.2\%)$ of 17 examined, and goat cases 3 $(42.9\%)$ of 7 examined. Species characterizations were performed on the small subunit of the rRNA gene using both PCR-RFLP and sequence analysis. Most of the human isolates were mixtures of C. hominis and C. parvum genotypes and similar PCR-RFLP patterns were observed in cattle and goat isolates. However, sequence analyses identified only C. hominis in all isolates examined. The natural infection of cattle and goats with C. hominis is a new and unique finding in the present study. It is suggested that human cryptosporidiosis in the studied area is caused by mixtures of C. hominis and C. parvum oocysts originating from both inhabitants and domestic animals.
Bilal Bakir;Mehmet Tanyuksel;Fatma Saylam;Sultan Tanriverdi;R. engin Araz;Hacim, Ali-Kasim;Metin Hasde
Journal of Microbiology
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v.41
no.2
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pp.148-151
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2003
Waterborne parasite infections are considered a reemerging threat. Most studies on the epidemiology of human cryptosporidiosis, giardiasis, and amebiasis have been carried out in developed countries, and there is little data on the occurrence of these infections in other areas. The objective of this study was to investigate the presence of waterborne parasites such as Cryptosporidium parvum, Giardia lamblia and Entamoeba histolytica in various water samples in Ankara, turkey. A total of 85 samples were examined, 43 from the municipal water supply, 34 from wells, 6 from the Ankara River, and 2 from two untreated dams; by conventional microscopy, immunologically and by polymerase chain reaction (PCR). Oocysts of C. parvum and cysts of G. lamblia were detected by using an indirect fluorescence (antigen) assay, whereas an enzyme linked immunosorbent assay was used to detect the cysts of E. histolytica and E. dispar. In addition, PCR was used for E. histolytica, E. dispar, C. parvum and G. lamblia detection. G. lamblia was found in 2 of the 34 well water samples, and parasites were found in 3 of the 6 Ankara River samples. The 1$\^$st/ contained E. histolytica cysts and Strongyloides stercoralis larvae. the 2$\^$nd/ E. histolytica cysts, and Trichuris trichiura eggs, and the 3$\^$rd/ C. parvum oocysts only. No parasite was observed in the municipal water samples and untreated dam water samples. These results extend our knowledge on waterborne parasites, such occurrence information on waterborne pathogens assists the management and treatment of municipal water.
Objectives: Cryptosporidium, a protozoan parasite, has been recognized as a frequent cause of waterborne disease due to its extremely strong resistance against chlorine disinfection. Although there has as yet been no report of a Cryptosporidium outbreak through drinking water in Korea, it is important to estimate the health risk of Cryptosporidium in water supply systems because of the various infection cases in human and domestic animals and frequent detection reports on their oocysts in water environments. Methods: This study evaluated the annual infection risk of Cryptosporidium in tap water using the quantitative microbial risk assessment technique. Exposure assessment was performed upon the results of a national survey on Cryptosporidium on the water sources of 97 large-scale water purification plants in Korea, water treatment efficacy, and daily unboiled tap water consumption. The estimates of the US Environmental Protection Agency on the mean likelihood of infection from ingesting one oocyst were applied for effect assessment. Results: Using probabilistic methods, mean annual infection risk of Cryptosporidiosis by the intake of tap water was estimated to fall within the range of $2.3{\times}10^{-4}$ to $1.0{\times}10^{-3}$ (median $5.7{\times}10^{-4}$). The risk in using river sources was predicted to be four times higher than with lake sources. With 0.5-log higher removal efficacy, the risk was estimated to be $1.8{\times}10^{-4}$, and could then be lowered by one-third. Conclusions: These estimations can be compared with acceptable risk and then used to determine the adequacy and priority of various drinking water quality strategies such as the establishment of new treatment technology.
Fecal samples of cats purchased in Seoul were examined for helminth ova or protozoan oocysts from December 1987 to March 1988. Out of the 41 samples,31 (75.6%) were positive and 60 (146.3%) were cumulative positive for parasites. The followings were identified In the samples: Eggs of Toxocarn cacti. Clonorchis sinensis, Metoeonimn sp., Phnrvngostomum cordntum, Spirometra erinocei, Tcenia toenicejormis and oocysts of Isosporn sp. From nine autopsied cats, larvae of Anisakis simplex, adults of C. sinensis, M. yokogawai. P cordatum, S. erinacei and T. tqeniaejormis were identified. This is the first report on the detection of Anisakis larvae from cats In Korea. The possible role of cats as a source of human infection with each parasite was discussed. Key words: Cat, intestinal parasite, Anisckis simplex, Toxoccra cati, Clonorchis sinensis, Metagonimus yokogawai. Spirometro erinccei, Taenic tonniaelormis, Isospora Sp .
Various constituents in clinical specimens, particularly feces, can inhibit the PCR assay and lead to false-negative results. To ensure that negative results of a diagnostic PCR assay are true, it should be properly monitored by an inhibition control. In this study, a cloning vector harboring a modified target DNA sequence (${\approx}375bp$) was constructed to be used as a competitive internal amplification control (IAC) for a conventional PCR assay that detects ${\approx}550bp$ of the Cryptosporidium oocyst wall protein (COWP) gene sequence in human feces. Modification of the native PCR target was carried out using a new approach comprising inverse PCR and restriction digestion techniques. IAC was included in the assay, with the estimated optimum concentration of 1 fg per reaction, as duplex PCR. When applied on fecal samples spiked with variable oocysts counts, ${\approx}2$ oocysts were theoretically enough for detection. When applied on 25 Cryptosporidium-positive fecal samples of various infection intensities, both targets were clearly detected with minimal competition noticed in 2-3 samples. Importantly, both the analytical and the diagnostic sensitivities of the PCR assay were not altered with integration of IAC into the reactions. When tried on 180 randomly collected fecal samples, 159 were Cryptosporidium-negatives. Although the native target DNA was absent, the IAC amplicon was obviously detected on gel of all the Cryptosporidium-negative samples. These results imply that running of the diagnostic PCR, inspired with the previously developed DNA extraction protocol and the constructed IAC, represents a useful tool for Cryptosporidium detection in human feces.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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