Salmoenella를 포함한 그람 음성 세균의 외막 단백질들은 외부 환경 조건에 따라 그 발현에 변화가 생기는 경우가 많으며, 이렇게 발현된 외막 단백질들은 수송에 관여하는 통로, 외부 물질의 인지, 병원체의 부착인자 등 다양한 기능을 가진다. 본 연구에서는 이러한 외막 단백질 중 소수성 porin으로 알려진 OmpW 단백질에 주목하였다. ompW 유전자가 결손된 돌연변이주를 구축하여 CK10으로 명명하였으며, 야생주와 그 표현형적 특징을 비교한 결과 SDS에 대한 내성이 다소 증가함을 확인할 수 있었다. OmpW 특이적인 다클론성 항체를 조제하여 OmpW 단백질의 발현연구에 사용하였다. NaCl의 농도가 높아질수록 OmpW 단백질의 발현이 감소하였으며, OmpW의 발현이 최대인 조건은 NaCl이 배지에 첨가되지 않았을 경우이다. 따라서 OmpW는 Salmonella 균이 삼투환경에 대응하는데 관여할 것으로 예상되어 일차적으로 균의 생육을 조사한 결과, 다양한 삼투환경 하에서 Salmonella의 생육에는 OmpW 단백질의 결손이 큰 영향을 미치지는 않는 것을 확인하였다. 삼투환경 변화에 따른 OmpW 발현의 변화가 지니는 생물학적 의미는 앞으로 연구해야 할 숙제로 남는다.
Vibrio harveyi is a pathogenic marine bacterium causing systemic symptoms resulting in mass mortalities in fishes and shrimps in aquaculture. Outer membrane proteins(OMPs) are related to the pathogenicity and thus good targets for diagnosis and vaccination for Gram negative bacteria. Recently vaccination strategies using the OMPs have been suggested to control vibriosis in several fish species. In this study, we have isolated V. harveyi from diseased marine fishes from different regions of Korea and investigated genetic variations of four OMP genes including OmpK, OmpU, OmpV and OmpW. Consequently, OmpK and U genes could be divided into 3 subgroups of type I, II, III and type A, B, C, respectively, without any correlation with geographical regions and species while OmpV and W were highly homologous. OmpW gene of V. harveyi FP4138 was fully sequenced and predicted the deduced amino acid sequence to form ${\beta}-barrel$ with hydrophobic channel. Indeed, the immunogenicity of recombinant OmpW produced in Escherichia coli was assessed by vaccinating flounder. As a result, the high antibody response with antibody titer of $4.2{\pm}0.7$ and protection with relative percent survival of 60% against artificial infection of V. harveyi were demonstrated. This result indicates that OmpW is a virulence related factor and it can be a vaccine candidate to prevent a high mortality caused by V. harveyi infection in olive flounder, Paralichthys olivaceus.
We have developed a constitutive display system of the Pseudomonas fluorescens SIK W1 TliA lipase on the cell surface of Escherichia coli using E. coli outer membrane protein C (OmpC) as an anchoring motif, which is an economical compared to induced system. For the constitutive expression of truncated OmpC-TliA fusion proteins, gntT104 promoter was employed. Cell growth was not affected by over expression of fusion protein during entire culture time, suggesting cell lysis was not a problem. The localization of truncated OmpC-TliA fusion protein on the cell surface was confirmed by immunofluorescence microscopy and measuring whole cell lipase activity. Constitutively displayed lipase was very stable, retaining activity enantioselectivity throughout the five repeated reactions. These results suggest that OmpC from E. coli be a useful anchoring motif for displaying enzymes on the cell surface without any inducers, and this stable surface display system can be employed for a broad range of biotechnological applications.
Cho, Youngjae;Park, Soyeon;Barate, Abhijit Kashinath;Truong, Quang Lam;Han, Jang Hyuck;Jung, Cheong-Hwan;Yoon, Jang Won;Cho, Seongbeom;Hahn, Tae-Wook
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권2호
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pp.288-295
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2015
Salmonella enterica serovar Enteritidis is the predominant agent causing salmonellosis in chickens and other domestic animals. In an attempt to identify antigenic S. Enteritidis outer membrane proteins (OMPs) that may be useful for subunit vaccine development, we established a proteomic map and database of antigenic S. Enteritidis OMPs. In total, 351 and 301 spots respectively from S. Enteritidis strain 270 and strain 350 were detected by two-dimensional gel electrophoresis. Fifty-one antigen-reactive spots were detected by antisera on two-dimensional immunoblots and identified as 12 specific proteins by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. OmpA and DNA starvation/stationary phase protection protein (Dps) were the most abundant proteins among the identified OMPs, comprising 22 and 12 protein species, respectively. Interestingly, we found that the Dps of S. Enteritidis is also antigenic. OmpW was also verified to have high antigenicity. These results show that OmpA, Dps, and possibly OmpW are antigenic proteins. This study provides new insights into our understanding of the immunogenic characteristics of S. Enteritidis OMPs.
녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 대장균(Escherichia coli) 및 포도알균(Staphylococcus aureus)은 기회감염균이다. 또한 이들 세균은 다제내성(Multiple-Drug Resistance, MDR) 세균의 성질을 가지는 것으로 알려져 있다. 녹농균, 대장균, 포도알균에 대한 다양한 효능을 지닌 6가지 발효액의 항균활성을 분석하였다. 발효액을 섭취했을 때 대장균에서 유전적 발현 변화가 일어나는지 알아보기 위해 annealing control primer를 사용하여 유전자발현 분석을 수행하였다. 디스크확산법을 통해 무화과식초와 대봉감식초가 다른 발효액에 비해 억제대의 크기가 가장 크게 나타났고, 토종약초발효소는 항균효과가 없었다. 대장균에 5% 무화과식초를 처리하여 21일간 매일 계대배양하여 Escherichia coli O157:H7 OmpW gene for outer membrane protein W 유전자 발현이 감소하며, Synthetic construct Lao1 gene for L-amino acid oxidase, complete cds 유전자가 발현이 증가함을 확인하였다. 발효액 중에서 특히 무화과식초를 섭취하는 것은 우리 주변에 항상 존재하는 대장균에 대해 방어능력을 더욱 단단하게 가질 수 있음을 의미하며, 나아가 다제내성균에 대한 천연치료제로 유용하게 쓰일 수 있기를 기대한다.
실 개구(real-aperture)를 사용하는 스캐닝 레이다(scanning radar)는 지상을 감시하거나 재난 구조를 하는 등 폭 넓게 이용 가능하다. 그러나 스캐닝 레이다의 특성상 거리 방향의 분해능은 송신하는 신호의 대역폭에 의해 제한되며, 거리방향에 수직한 방향의 분해능은 빔 폭에 의해 결정된다. 본 논문에서는 초해상도(super-resolution) 레이다 영상 기법을 제안한다. 산란체가 스캔 영역에 드문드문 존재한다면 반사율의 분포를 sparse 신호로 간주할 수 있게 되고, '압축 감지(compressive sensing)' 문제로 수식화하는 것이 가능하다. 본 논문에서는 '재가중치 ${\ell}_1$-최소화'를 통해 2차원 레이다 이미지를 얻는다. 모의실험 결과에서는 제안하는 기법으로 얻은 이미지와 더불어 기존에 널리 쓰이는 Orthogonal Matching Pursuit(OMP), 합성 개구 레이다(Synthetic Aperture Radar : SAR)의 결과와 비교하였다.
Jang, Jin-Ho;Kim, Young-Min;Jeong, Yong-Kyun;Nam, Young Sik
한국염색가공학회지
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제19권5호
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pp.1-7
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2007
A new UV-curable coating was carried out to impart the flame-retardant property to cotton fabric using Bis[2-(methacryloyloxy)ehtyl]phosphate(DMEP) and 2-hydroxy-2-methyl-1-phenyl-propan-l-one(HMPP) as a UV-curable monomer and a photoinitiator, respectively. The cotton fabrics were applied with various amounts of DMEP and HMPP via padding and UV irradiation, and the optimal concentrations of DMEP and HMPP in the formulation were 40%(w/w) and 7%omp respectively. A limiteed oxygen index(LOI) up to 28.9 was obtained for the UV-cured fabric, which may occur through a condensed phase mechanism as verified by the increased residue number with increased application level. The characterization of the UV-cured coating was made by IR analysis, thermo-gravimetric analysis, LOI test, and scanning electron microscopy.
Kim, Jong-Soo;Kim, Ji-Hyun;Ryu, Eun-Kyeong;Kim, Jin-Kyoo;Kim, Chi-Kyung;Hwang, In-Gyu;Lee, Kyoung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권2호
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pp.302-311
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2004
Comamonas testosteroni (formerly Pseudomonas sp.) NCIMB 10643 can grow on biphenyl and alkylbenzenes $(C_2-C_7)$ via 3-substituted catechols. Thus, to identify the genes encoding the degradation, transposon-mutagenesis was carried out using pAG408, a promoter-probe mini-transposon with a green fluorescent protein (GFP), as a reporter. A mutant, NT-1, which was unable to grow on alkylbenzenes and biphenyl, accumulated catechols and exhibited an enhanced expression of GFP upon exposure to these substrates, indicating that the gfp had been inserted in a gene encoding a broad substrate range catechol 2,3-dioxygenase. The genes (2,826 bp) flanking the gfp cloned from an SphI-digested fragment contained three complete open reading frames that were designated bphCDorfl. The deduced amino acid sequences of bphCDorfl were identical to 2,3-dihydroxybiphenyl 1,2-dioxygenase (BphC), 2-hydroxy-6-oxo-6-phenylhexa-2,4-dienoate hydrolase (BphD), and OrfI, respectively, that are all involved in the degradation of biphenyl/4-chlorobiphenyl (bph) by Ralstonia oxalatica A5. The deduced amino acid sequence of the orfl revealed a similarity to those of outer membrane proteins belonging to the OmpW family. The introduction of the bphCDorfl genes enabled the NT-l mutant to grow on aromatic hydrocarbons. In addition, PCR analysis indicated that the DNA sequence and gene organization of the bph operon were closely related to those in the bph operon from Tn4371 identified in strain A5. Furthermore, strain A5 was also able to grow on a similar set of alkylbenzenes as strain NCIMB 10643, demonstrating that, among the identified aromatic hydrocarbon degradation pathways, the bph degradation pathway related to Tn4371 was the most versatile in catabolizing a variety of aromatic hydrocarbons of mono- and bicyclic benzenes.
우리나라 유통상토에 대한 물리적 표준분석법을 설정하기 위한 연구를 실시하였다. 국내 시중에 유통되고 있는 53개의 원예용 상토와 9개의 수도용 상토를 대상으로 설정된 분석법을적용하여 실험하였다. 수분함량은 $105^{\circ}C$ 건조기에서 16시간 건조하여 수도용상토는 (건조전 무게-건조 후 무게) / (건조 후 무게) ${\times}100$으로, 원예용상토는 (건조 전 무게 - 건조 후 무게 ) / (건조전 무게) ${\times}100$ 으로 하였다. 보수력은 주로 저 압용으로서 Eijkelkamp사의 Sandbox법을 사용하여 0.5, 1, 3, 5, 7, 10 kPa의 수분장력 상태의 수분함량을 조사하였다. 포화수리전도도는 직경 5cm${\times}$높이 20cm인 아크릴 원통을 이용하여 정수위별에 의한 포화수리전도도를 측정하였다. 신분석법에 의한 유통상토의 수분함량은 원예용이 평균 46.34%, 수도용이 평균 16.89%이었고 원에용 상토의 EAW는 28.4%, WBC 7.01%, OMP는 5.60 kPa로 나타났으며, 육묘를 위한 적정 수분함량은 44.41% 이었고 포화수리전도도는 $1.71cm\;min^{-1}$이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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