• 한국어병학회지
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• 제8권1호
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• pp.37-46
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• 1995

H. cunea nuclear polyhedrosis virus (HcNPV) 의 polyhedrin 아미노산 및 polyhedrin gene 의 염기서열을 분석하였다. Polyhedrin 은 SDS-PAGE 상에서 3개의 polypeptide band 가 나타났고 주요 polypeptide 는 약 25 Kd 의 분자량을 갖고 있었다. 또한 polyhedrin 은 17 개의 다른 아미노산으로 구성되어 있었다. HcNPV DNA를 EcoRI 효소로 절단하여 $\alpha^{32}P$로 labelling 된 Autographa californica (AcNPV) polyhedrin gene cDNA 의 probe DNA를 이용하여 hybridization 한 결과 polyhedrin gene은 EcoRI 절편들중 H 절편에 양성반응을 나타냈다. 또한 polyhedrin gene 을 포함하고 있는 EcoRI-H 절편을 pUC8 벡터에 cloning한 다음 이를 hPE-H라고 이름하였다. HcNPV genome DNA 의 promoter 부위를 sequence한 결과 TATA box의 염기배열은 polyhedrin gene 전사 개시위치로부터 위쪽으로 -79 bp 의 5' flanking 부위에서 발견되었다. polyhedrin gene 내 CAAT box는 TATA box 측면 염기 배열에서 나타나지 않았고, 4개의 tandem repeat 5'-CTAATAT-3' 와 5'-TAAATAA-3'의 염기는 polyhedrin gene내 전이 개시 위치로 부터 위쪽으로 -141 과 -108 bp 또는 -83 bp 부위에 존재하였으며, 다른 하나는 전이 개시위치로 부터 아래쪽으로 -52 bp 부위에서 발견되었다. 그리고 polyhedrin gene 내 전이 개시위치로 부터 위쪽으로 -141 bp 부위는 다량의 AT (78%) 염기가 존재하였다. 또한 polyhedrin 의 개시 coding region 은 ATG 였고 종결 coding region은 TAA 였다.

• BMB Reports
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• 제35권6호
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• pp.562-567
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• 2002

In order to find the cellular interaction factors of the Heliothis armigera nuclear polyhedrosis virus capsid protein VP39, a Heliothis armigera cell cDNA library was constructed. Then VP39 was used as bait. The host actin gene was isolated from the cDNA library with the yeast two-hybrid system. This demonstrated that VP39 could interact with its host actin in yeast. In order to corroborate this interaction in vivo, the vp39 gene was fused with the green fluorescent protein gene in plasmid pEGFP39. The fusion protein was expressed in the Hz-AM1 cells under the control of the Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus immediate early gene promoter. The host actin was labeled specifically by the red fluorescence substance, tetramethy rhodamine isothicyanete-phalloidin. Observation under a fluorescence microscopy showed that VP39, which was indicated by green fluorescence, began to appear in the cells 6 h after being transfected with pEGFP39. Red actin cables were also formed in the cytoplasm at the same time. Actin was aggregated in the nucleus 9 h after the transfection. The green and red fluorescence always appeared in the same location of the cells, which demonstrated that VP39 could combine with the host actin. Such a combination would result in the actin skeleton rearrangement.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제32권2호
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• pp.105-109
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• 1990

포르말린에 과망간산카리(KMnO4)를 넣어 화학적 반응에 의하여 발생되는 포름알데히드 가스로 누에고름병 바이러스의 불활화와 흰굳음병균에 대한 소독시험을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 누에고름병 바이러스(Nuclear polyhedrosis virus)의 불활화는 잠실면적 3.3$m^2$당 포르말린 25$m\ell$에 과망간산카리 10g을 혼합하여 하룻방 동안 훈연소독을 실시하였을 때 상당한 수준의 소독효과가 있었고 같은 잠실단위 면적에 포르말린 75$m\ell$와 과망간산카리 30g을 혼합하여 하룻밤 동안 훈연상태를 유지하였을 때는 거의 완전한 불활화가 이루어졌다. 2. 노란굳음병균에 대한 살균효과는 잠실면적 3.3$m^2$당 포르말린 50$m\ell$에 과망간산카리 20g을 반응시켜 훈연소독을 실시하였을 때는 처리받은 균의 자람이 상당한 수준 억제되었고 같은 단위면적에 포르말린 75$m\ell$와 과망간산카리 30g을 혼합시켰을 때는 완전한 살균이 이루어졌다. 3. 포르말린 훈연소독에 의한 누에에 미치는 영향은 4령 1일째와 5령 1일째 2회와 4령 1일째, 5령 1,3일째 각 1회씩 3회를 처리하였을 때(훈연소독은 저녁급상후에 실시하고 다음날 아침 급상때까지 유지시킴) 전견종, 견층중, 견층비율, 유충기간(4-5령) 등에서는 무처리와 차이가 없었으나 3회 처리시에는 실품림새율은 무처리에 비하여 약간 떨어졌다.

• BMB Reports
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• 제38권1호
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• pp.41-48
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• 2005

In this study we developed the transposon-mediated shuttle vector 'Hanpvid', which composed of HaNPV (Heliothis armigera nuclear polyhedrosis virus) genomic DNA and a transposon cassette from Bacmid of Bac-to-Bac system. Hanpvid replicates in E. coli in the same way as Bacmid and retains infective function in cotton bollworm cells (Hz-AM1). Using Hanpvid we constructed a recombinant virus, which could infect Hz-AM1 cells and generate recombinant HaNPV (rHa-Bar) containing the barnase gene, a ribonuclease gene from Bacillus amyloliquefaciens. Since the expression vector carrying barnase gene cannot replicate in the absence of barstar, a specific inhibitor of barnase, we constructed a new cotton bollworm cell line (AM1-NB) using the marker rescue method. In AM1-NB barstar was integrated into the cellular chromosome to sustain the replication of rHa-Bar. To screen out recombinant HaNPV for potential use as biopesticide, Hz-AM1 and AM1-NB cell lines were infected with rHa-Bar, respectively. The results obtained indicate that Viral progenies in AM1-NB were 23 and 160 times greater than those in Hz-AM1 48 h and 72 h after infection, respectively. With additional insertion of the polyhedron gene from AcNPV (Autographa californica nuclear polyhedrosis virus) into the Hanpvid genome, rHa-Bar regained the polyhedron phenotype and its pest-killing rate greatly improved. Toxic analysis showed that the lethal dosages ($LD_{50}$) and the lethal time(s) ($LT_{50}$) of rHa-Bar were reduced by 20% and 30%, respectively, compared to wt-HaNPV in the third instar larvae of cotton bollworm. This study shows that in AM1-NB barnase can be effectively produced and used as pest-killing agent for the biological control of cotton pests.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제18권2호
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• pp.79-81
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• 1976

Neo-PPS의 누에 바이러스병에 대한 약효에 관한 시험을 통해 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 핵다각체 바이러스에 대한 약효는 무처리에 비해 2, 4 및 6시간 처리는 월등히 좋은 효과를 나타냈다. 2. 세포질다각체 바이러스에 대한 약효는 핵다각체 바이러스에서와 동일했다.

• 한국응용곤충학회지
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• 제28권3호
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• pp.105-112
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• 1989

누에(Bombyx mori)와 흰불나방(Hyphantria cunea)으로 부터 분리된 핵다각체병바이러스(nuclear polyhedrosis virus: NPV)를 동정하기 위하여 전자현미경 관찰한 결과, BmNPV 다각체의 크기는 $3 \mu\textrm{m}$ 정도의 18면체로 외형이 균일하였으나, HcNPV는 1.5-$2 \mu\textrm{m}$ 정도이며 부정형이었다. Alkaline protease를 부활화시킨 후 SDS-PAGE한 다각체 단백질의 分子물은 BmNPV가 30 KD, HcNPV는 31 KD인 major band와 이들의 중합체(polymer)로 생각되는 57 KD, 112 KD의 minor band들이 관찰되었다. 또한 virion 단백질을 SDS-PAGE한 후 은염색한 결과, BmNPV는 분자량 9.6~112 KD인 47개의 band, HcNPV 경우는 분자량 9.4~l11 KD인 48개는 band가 관찰되었다. BmNPV와 HcNPV DNA의 제한효소 처이에 의한 전기영동 패턴을 관찰했으며, 각각의 genome 크기는 BmNPV가 약 116.4 Kb, HcNPV의 약 114.6 Kb였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제9권3호
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• pp.361-364
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• 1999

The binding characteristics of Anagrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus (AtNPV) to Spodoptera frugiperda 21 (Sf21) cells were investigated. The cells displayed an affinity of 4.7×10/sup 10/M/sup -1/ with about 3,300 binding sites per cell. The biochemical nature of the AfNPV-binding sites on the cell surface was also partially identified. Our findings suggest that the binding-site moiety has a glycoprotein component, but that the direct involvement of oligosacccharides containing N-acetylglucosamine or sialic acid residues in binding is unlikely, and that AfNPV entry into Sf21 cells may be via receptor-mediated endocytosis.

• Applied Biological Chemistry
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• 제38권5호
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• pp.435-439
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• 1995

바이러스 살충제의 개발을 위한 기초 자료로서 Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus(HcNPV)의 일부 특성과 병원성을 조사하였다. HcNPV는 Spodoptera frugiperda (Sf)세포의 핵에서 복제 되었으며, 바이러스를 감염 시켰을 경우 감염 24시간 후에 prepolyhedra 형성이 관찰 되었고, 감염 48시간 후에는 성숙된 많은 polyhedra가 전체세포에서 관찰 되었으며, 감염 72시간 후에는 polyhedra가 세포밖으로 방출 되었다. 또한 세포는 부유 배양에서 잘 성장 하였으며, 바이러스에 감염되기 전의 세포 배양액은 pH가 6.35이었으나 이주 점차 증가하여 감염 120시간 후에는 pH가 6.77이었다. Polyhedra inclusion body(PIB)를 설탕 밀도구배 원심 분리한 결과 $50{\sim}55%$ 부근에서 벤드가 형성 되었고, polyhedra는 도립 현미경과 전자 현미경하에서 관찰한 결과 대부분 4변형의 6면체(tetragonal hexahedron) 이었고, PIB의 크기는 평균 $2.5{\mu}m$이었다. 또한 감염 48시간 후에 polyhedra 속에는 다발을 형성한 비리온이 봉입 되어 있었다. 흰불나방 유충에대한 병원성 시험에서는 4령에서 보다는 2령과 3령의 유충에서 치사율이 높았고, $1.5{\times}10^{9}{\sim}l.5{\times}10^{7}PIB/ml$로 섭식시킨 구룹에서는 2령과 3령 유충에서 90% 이상의 치사율을 나타 내었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제33권1호
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• pp.21-26
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• 1991

Bm 배양세포주(BmN4)에서 BmNPV의 다각체 단백질 합성과 DNA복제에 대한 실험결과는 다음과 같다. 1. BmNPV는 insect Grace's medium에서 배양되고 있는 BmN4 세포에서 NOV나 DNA로 감염시킨 경우 모두 잘 증식되었으며, 도립현미경 관찰 결과 접종 후 48시간이 경과하면서 다각체가 형성되기 시작하였다. 2. 또한 전자현미경으로 핵내 형성된 다각체와 협성중인 nucleocapsid 다발을 관찰하였으며, 바이러스 입자는 SNPV로 존재하였다. 3. Western blot분속에 의한 다각체 단백질의 합성은 접종 후 18시간부터 관찰되었으며, 다각체 단백질의 분자량은 30kd이었다. 4. Wild type BmNPV DNA와 Bm 세포(BmN4)에서 NOV 및 DNA 감염에 의해 형성된 바이러스 DNA간의 제한효소 패턴은 차이가 없었다.

• Journal of Microbiology
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• 제34권1호
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• pp.7-14
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• 1996

Teh baculovirus gp64 glycoprotein is a major component of the envelope of budded virus (BV) and has been shown that it plays an essential role in the infection process, especially virus-cell membrane fusion. We have cloned Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus (AcNPV) gp64 protein were examined for membrane fusion activity by using a synchtium formation assay under various conditions. The optimal conditions required for inducing membrane fusion are 1) form pH 4.0 to 4.8 2) 15 min exposure of cells to acidic pH 3) at least 1 .mu.g of gp64 cloned plasmid DNA per 3 * 10$^{6}$ cells 4) and an exposure of cells to acidic pH at 72 h post-transfection. In order to investigate the role of hydrophobicity of the gp64 glycoprotein for the membrane fusion, the two leucine residues (amino acid position at 229 and 230) within hydrophobic region I were substituted to alanine by PCR-derived site-directed mutagenisis and the membrane fusion activity of the mutant was anlaysed. The gp64 glycoprotein carrying double alamine substitution mutation showed no significant difference in fusion activity. This result suggested that minor changes in hydrophobicity at the amino acid position 229 and 230 does not affect the acid-induced membrane fusion activity of the gp64 glycoprotein.