Micromanipulation and fusion are essential to generate nuclear transfer embryos. In this process cytoplasmic damage is unavoidable. This study investigated the hypothesis that higher osmolarity than normal culture medium could help oocytes recover from cytoplasmic damage from micromanipulation and electric pulse. Oocytes derived from a local slaughter house were matured for 42 ∼ 44 h and enucleated. (omitted)
The maximum width of HAZ of SA508치.3 steel produced by overlay RPV cladding was approximately 10 mm and it was composed of variety of microstructures with various grain size and precipitates. In addition, along the weld fusion line there formed a heavy carbide precipitation zone in the width of $20{\sim}30\;{\mu}m$. 2. As the specimen sampling position approached to the weld fusion line, the increase in yield and tensile strength was approximately 90 and 40 MPa, respectively. Meanwhile, the plastic fracture strain reduced from 14 to 8 percent. 3. The lowest SP energy and the highest ductile to brittle transition temperature in the HAZ were observed at the coarse- and fine-grained HAZ.
Gilbert, Mark R.;Fleming, Michael;Sublet, Jean-Christophe
Nuclear Engineering and Technology
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제49권6호
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pp.1346-1353
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2017
The FISPACT-II inventory simulation platform is a modern computational tool with advanced and unique capabilities. It is sufficiently flexible and efficient to make it an ideal basis around which to perform extensive simulation studies to scope a variety of responses of many materials (elements) to several different neutron irradiation scenarios. This paper briefly presents the typical outputs from these scoping studies, which have been used to compile a suite of nuclear physics materials handbooks, providing a useful and vital resource for material selection and design studies. Several different global responses are extracted from these reports, allowing for comparisons between materials and between different irradiation conditions. A new graphical output format has been developed for the FISPACT-II platform to display these "global summaries"; results for different elements are shown in a periodic table layout, allowing side-by-side comparisons. Several examples of such plots are presented and discussed.
Despite of importance of integrated events of nucleus and microtubule remodeling in nuclear transferred embryos with somatic cells, little information is available on this subject. In this study we configured chromatin and microtubule organization following somatic cell nuclear transfer in pre- and non-activated bovine oocytes in order to clearify nuclear remodeling process and to demonstrate centrosome inheritance during nuclear transfer. The cumulus-oocyte complexes were collected from slaughterhouse and were matured in vitro for 20 h in TCM 199 supplemented hormone. Matured bovine oocytes were enucleated by aspirating the frist polar body and metaphase chromatin using a beveled pipette. Bovine fibroblast cells were fused into enucleated oocyte by electrical stimulation. Reconstructed oocytes were activated with ionomycine and 6-dimethylaminopurin, and then cultured in CRlaa medium. The organization of nuclear and microtubules were observed using laser-scanning confocal microscopy. At 1 hour after fusion, microtubule aster was seen near the transferred nucleus in most oocytes regardless activation condition. While most of fibroblast nuclei remodeled to premature chromosome condensation (PCC) and to the two masses of chromosome in non-activated oocytes, a few number of fibloblasts went to PCC and multiple pronuclear like structures in activated oocytes. Microtubular spindle was seen around condensed chromosome. Gamma-tubulin was detected in the vicinity of condensed chromosome, suggesting this is a transient spindle. The spindle seperated nucleus into two masses of chromatin which developed to the pronuclear like structures. Two pronuclear like structures were than apposed by microtubular aster and formed one syngamy like nuclear structure at 15 h following nuclear transfer. At 17 to 18 h after fusion, two centrosomes were seen near the nucleus, which nucleates micrtubules for two cell cleavage. While 31% of reconstructed oocytes in non-activated condition developed to morulae and blastocysts, a few reconstructed oocytes in pre-activated condition developed to the blastocyst. These results suggested introduction of foreign centrosome during nuclear transfer, which appeared to give an important role for somatic cell nuclear reprogramming.
Human foamy virus (HFV) integrase mediates integration of viral c-DNA into cellular DNA. In this process, HFV prointegration complex (PIC) in which integrase is a key component moves to nuclei of the infected cells and leads to integration of viral DNA to the cellular genome, which is essential in viral life cycle. In general nuclear localization signals (NLS) have been suggested to be involved in localizing retroviral PIC to nuclei, but the mechanisms for nuclear localization of the HFV PIC remains unclear. To functionally identify the NLS of HFV integrase, various subdomains of the protein were expressed as GFP fusions and their subcellular locations were analyzed with confocal laser scanning microscopy. Wild type HFV integrase was karyophilic by targeting the fusion protein to nuclei of the COS-1 and 293T cells. Our results showed that strong NLS of HFV integrase was mapped to the C-terminal regions. In addition the karyophilic properties of N-terminal and central regions are not individually strong enough to direct localization of the fusion proteins to nuclei, but their cooperative activity for nuclear import was confirmed.
Carbon and carbon-based materials are used in nuclear reactors and there has recently been growing interest to develop graphite and carbon based materials for high temperature nuclear and fusion reactors. Efforts are underway to develop high density carbon materials as well as amorphous isotropic carbon for the application in thermal reactors. There has been research on coated nuclear fuel for high temperature reactor and research and development on coated fuels are now focused on fuel particles with high endurance during normal lifetime of the reactor. Since graphite as a moderator as well as structural material in high temperature reactors is one of the most favored choices, it is now felt to develop high density isotropic graphite with suitable coating for safe application of carbon based materials even in oxidizing or water vapor environment. Carboncarbon composite materials compared to conventional graphite materials are now being looked into as the promising materials for the fusion reactor due their ability to have high thermal conductivity and high thermal shock resistance. This paper deals with the application of carbon materials on various nuclear reactors related issues and addresses the current need for focused research on novel carbon materials for future new generation nuclear reactors.
복제수정란 생산에 있어서 수핵란 내 체세포 주입 후 전기적인 융합은 필수과정인데, 이 과정을 거치는 동안 많은 수의 체세포 주입 난자가 융합에 실패하거나 lysis가 일어나게 된다. 본 실험에서는 한우 체세포를 이용하여 핵이식을 실시한 후 수핵세포질과 응합을 시도할 때 전기융합 방법에 따른 융합율과 배발달율을 검토하고자 실시하였다. 공여세포는 한우 귀 세포조직을 채취하여 0.05% trypsin과 EDTA가 첨가된 D-PBS로 세포를 분리한 후 DMEM 배양액으로 계대배양을 실시하여 사용하였다. 핵이식을 위하여 체외성숙시킨 난자를 탈핵용 micro pipette을 이용하여 투명대를 절개하고 수핵 난자의 극체 와 핵을 제거한 후 공여세포를 주입하였으며, 핵이식 수정란은 직접, 간접적인 전기적 자극으로 융합을 실시한 후 calcium iono-phore와 6-DMAP를 이용하여 활성화를 유도하였다. 활성화된 수정란은 38.5$^{\circ}C$, 90% $N_2$, 5% $CO_2$로 조정된 배양기에서 처음 3일은 0.3% BSA가 첨가된 CR1-aa 배양액에서, 배양 4일째부터는 10% FBS가 첨가된 CR1-aa 배양액에서 배양을 실시하였다. 본 연구결과를 요약하면 다음과 같다. 전기자극 융합방법에 따른 수핵난자의 융합율과 lysis율은 electric chamber를 이용하여 간접융합을 실시하였을 경우 51.6%와 10.7%를 보였고, needle을 이용하여 직접 융합을 실시하였을 경우 68.9%의 융합율과 11.5%의 lysis율을 보임으로써 needle을 이용한 직접융합 방법이 유의적으로 높은 융합율을 보였다(P<0.05). 융합 후 체외 발달과정을 살펴보면 난할율에 있어서 needle을 이용했을 시 80.3%로 chamber를 이용했을 시 73.2%보다 유의적으로 높은 난할율을 보였다. 초기배 발달단계인 2∼4세포기의 발달율 역시 needle을 사용한 구가 61.1%로 chamber를 사용한 구 54.1%보다 유의적으로 높은 차이를 보였다. 상실배 단계는 chamber를 사용한 구가 6.7%로 needle을 사용한 구 6.2%보다 약간 높았지만 유의적인 차이는 없었다. 하지만 이식 가능한 단계인 배반포배 발달율에 있어서는 needle을 사용하여 융합을 시도한 구가 26.3%로 chamber를 사용한 구 18.4%보다 유의적으로 높은 발달율을 보였다(P<0.05). electric chamber를 이용하여 전기융합을 시도시전류가 흐르는 wire와 주입된 체세포가 직각을 이루도록 정렬을 시키느라 많은 시간이 소요되고, 주입한 체세포가 세포질과 떨어진 난자는 전기자극을 주어도 융합이 일어날 수 없으며, 높은 전압을 사용하기 때문에 융합된 복제란의 lysis가 많이 발생하는게 가장 큰 단점으로 꼽을 수 있다. 하지만 미세조작기와 needle 방법을 이용하면 낮은 전압을 이용하여 융합을 시도하기 때문에 복제란의 lysis를 줄일 수 있고, 전극과 체세포 주입란을 정렬시키는 과정이 생략되어 시간이 절약되며, 결정적으로 주입된 체세포가 세포질과 떨어져 있더라도 미세조작기로 약간의 압력을 가하여 전기자극을 가할 수 있어서 보다 높은 융합율과 배반포배 발달율을 얻을 수 있기 때문에 needle을 이용한 직접적인 전기융합 방법이 체세포 복제수정란 생산에 효과적이라고 사료된다.
Ultrathin sections of intact mycelia, released protoplast and fused protoplast of Micromonospora rosaria were observed by electron microscopy Intact mycelia showed a typical gram-positive bacterial cell wall structure and mesosomes. Released protoplasts had no cell wall components and fibrous nuclear region was distinguished from cytoplsmic region clearly. Protoplasts which treated with sucrose supplemented buffer were stable. But those treated with buffer without sucrose were extensively damaged, forming mom braneous vesicles. It was surmised that those vesicles originated from the damaged cytoplasmic membrane. High frequency of fusion was achieved by 50%(w/v). polyethylene-glycol 1,000 Fusion bodies in different stage of fusion were observed. Cell membrane barrier was stepwise relieved.
This study was conducted to develop a method for production of nuclear transplant bovine embryos using in vitro-matured (IVM) oocytes and to examine the effect of different conditions of electrofusion on fusion rate and developmental capacity of donor nucleus transplanted to enucleated oocytes. Eight- to sixteen-cell embryos derived from oocytes matured and fertilized in vitro used as donor blastomeres and IVM oocytes were used as recipient oocytes. Oocytes were enucleated immediately after 23-24 h IVM and then reconstituted with a donor blastomere in two different micromanipulation media. Fusion rate and subsequent development of the reconstituted oocytes was compared under the different electric stimuli and recipient oocyte ages. Success rate of enucleation was significantly higher in TCM-199 medium containing FCS than in DPBS. The high fusion rate(75-94%) and development (6.4-14.8%) to morulae and blastocyst (M + B) were obtained from 0.6-0.75 kV/cm DC voltage, although total cleavage was not different among the electric pulses. Most optimal condition of electric stimulation for fusion and development was 1 DC voltage of 0.75 kV/cm, in which 80.5% of oocytes were fused, 80.0% and 31.7% of which was cleaved and developed to M + B, respectively. No M + B was obtained from 1.2 kV/cm DC voltage regardless of pulse frequency. Recipint oocyte age at electrofusion greatly affected the cleavage and subsequent development to M + B, showing high rate at 40-41 h oocyte maturation. These results suggest that a suitable condition of electrofusion for donor nuclei derived from IVF may be 1-2 DC pulses of 0.7 kV/cm for $70{\mu}sec$ and that processing of a transplanted nucleus in IVM oocytes may be affected by maturation age of recipient oocytes.
In D-T fusion reaction, $D_2$ (duterium) and $T_2$(tritium) are used as fuel gas. The exhaust gas of nuclear fusion includes hydrogen isotopes $Q_2$ (Q means H, D or T), tritiated components ($CQ_4$ and $Q_2O$), CO, $CO_2$, etc. All of hydrogen isotopes should be recovered before released to the atmosphere. This study focused on the recovery of hydrogen isotopes from $CQ_4$ and $Q_2O$. Two kinds of experiments were conducted to investigate the catalytic reaction characteristics of SMR (Steam Methane Reforming) and WGS (Water Gas Shift) reactions using Pt catalyst. First test was performed to convert $CH_4$ into $H_2$ using 6% $CH_4$, 6% CO/Ar feed gas. In the other test, 100% CO gas was used to convert $H_2O$ into $H_2$ at various reaction conditions (reaction temperature, S/C ratio, GHSV). As a result of the first test, $CH_4$ and CO conversion were 41.6%, 57.8% respectively at $600^{\circ}C$, S/C ratio 3, GHSV $2000hr^{-1}$. And CO conversion was 72% at $400^{\circ}C$, S/C ratio 0.95, GHSV $333hr^{-1}$ in the second test.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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