A perfusion culture of transgenic Nicotiana tabacum cell suspensions, transformed to express recombinant glucuronidase (GUS), was successfully performed in a 5-1 stirred tank bioreactor. With 0.1 $day^{-1}$ of perfusion rate, the maximum dry cell weight (DCW) reached to 29.5 g/l in 16 days, which was 2.1-fold higher than the obtained in batch culture (14.3 g/l). In terms of the production of GUS, the volumetric activity could be increased up to 12.8 U/ml by using perfusion, compared with 4.9 U/ml in batch culture. The specific GUS activities in both perfusion and batch cultures were maintained at similar levels, 200-400 U/g DCW. Consequently, a perfusion culture could be a good strategy for the enhanced production of recombinant proteins in a plant cell culture system.
Six flue-cured cultivars of Nicotiana tabacum L., 15 possible $F_1$ hybrids and 15 $F_2$ populations among them, and 15 haploid populations of $F_1$ hybrids and 6 haploid from parents, were evaluated. The variances of general combining ability were predominant for all characters studied in $F_1$ hybrid and $F_2$ population, and in haploid populations of $F_1$ hybrids except leaf width, value and reducing sugar. There were significant correlations between generations in variances and ranks of parental GCA effects estimated from general combining ability analysis of $F_1,\;F_2$ and haploid generation of $F_1$ hybrids for yield, stem height, days to flower. leaves per plant, value and total alkaloids.
This study was carried out to obtain the basic information about the sucker producing characteristics of certain burley tobacco varieties(Nicotiana tabacum L. var. burley) at Suwon and Chonju Experiment Station, Korea Ginseng & Tobacco Research Institute in 1999. The number and weight of suckers for 12 varieties or breeding lines were investigated three times, 45 days after transplanting for ground sucker, 10 days after topping, and 10 days after maleic hydrazide(MH) applying for upstalk sucker. KB 103 and KB 9416-1 produced less ground suckers and upstalk suckers than other entries did. KB 9210-8 produced less ground suckers and (Male sterile TC 612 x KB 108)F$_1$ also produced less upstalk suckers than other entries did. There was no differences among entries in sucker production at 10 days after MH treatment. Between the weight of total sucker and days to flower revealed the negative correlation, but not significant. The low sucker producing entries described above could be used as a parental line in the breeding program for the low sucker producing variety.
담배(Nicotiana tabacum)와 까마중(Solanum migrum)의 솩간 원형질체 융합으로 유도된 켈러스를 재료로하여 캘러스의 전체 단백젤과 틸라코이드막 단백질의 양태변화를 중심으로 식물생장 조절물질과 단색광의 생리적 상호효과를 조사하였다. 여러 단색 광선을 캘러스에 조사하였을때, 적색 및 청색광이 캘러스의 전체 단백질과 킬라코이드막 단백질의 합성을 촉진하였으며 , NAA+$ extrm{GA}_3$ 와 NAA+BA의 조합구에서 캘러스의 전체 단백질과 틸라코이드막 댄백질의 축척이 활발히 일어났으며, NAA+$ extrm{GA}_3$처리구에서 더욱 효과적 이였다. NAA+$ extrm{GA}_3$ 처리구에 청색광, 적색광 및 근적외광을 제각각 처리하였을때 캘러스의 전체 단백질과 킬라코이드막 단백질의 합성은 적색광에 의하여 가장 촉진되었다. 따라서 적색광과 NAA+$ extrm{GA}_3$구의 동시처리가 캘러스의 전체 단백질 및 킬라코이드막 단백질의 합성을 상승적으로 촉진함을 보였다.
Production of therapeutic proteins by transgenic plant cell suspension cultures is an attractive system alternative to the other expression system. However, plant cell cultures have shown low expression level of foreign proteins and decreased cell viability by the changes of culture conditions. Therefore, it is necessary to enhance cell viability during the culture period. In this study, a quantitative analysis technique was designed to measure relative cell viability for plant suspension cells which have cell wall and aggregates. It was found that the programmed cell death of plant cells by apoptosis was essentially linked with the apoptotic pathway of animal cells. Therefore, effects of nicotinamide, 3-aminobenzamide and antioxidants on cell viability and apoptosis were examined in transgenic Nicotiana tabacum cells producing hGM-CSF. With those additives, cell viability could be maintained and apoptosis could be redued. In the result, the extracellular production of hGM-CSF could be enhanced 2.5 fold. It was also found that the supplementation of glutathione and ascorbic acid suppressed both the cold stress-induced decrease in cell viability and the increase of total genomic DNA fragmentation.
This study was conducted to identify useful germ plasm sources of resistance to black shank, Phytophthora. parasitica, in Nicotiana tabacum and to characterize the interaction between host plant resistance to black shank and pathogen variability. The six internationally represen-tative set of black shank resistant and susceptible tobacco genotypes and four Korean lines were tested for black shank on the field infested with P. parasitica at Chonju Experiment Station, Korea Ginseng & Tobacco Research Institute during the 1992~1997 growing season. Almost 100% of the plants of the most susceptible genotype, Ky 14, did not survive. Complete survival of (MS Ky 14 x L8)F$_1$, which is resistant to reee 0 and ausceptible to reace 1, suggests that Race 0 is the only race of the P. parasitica in this bield. Coker 371 Gold and Beinhart 1000-1 having excellent resistance to black shank could be recommended as the parental cultivars for improving black shank resistance in Korea. Data of the diseased plants showed that KB 101 and KB 110 were medium high resistant and KB 103 and KB 108 being low resistant to black shank.
After topping, axillary buds of haploid plants derived from cultured anthers were treated with 0.4% aqueous solution of colchicine. Due to the high temperature and dry air at the time of treatment, most of the buds perished. A few months after the colchicine application, however, several shoots arose from the places where the dead buds were originally located. These shoots were mostly diploid. Induction of adventive shoots from the colchicine-treatedaxils was supposed to be rather effective method of obtaining diploid shoots from haploid plants. The diploid plants had larger floral organs than the haploid plants, and had good pollen fertility and seed setting. 24 bivalent chromosomes were observed at MI of the PMC's.
식물세포배양을 위한 bioreactor의 운전조건 최적화를 위해 Nicotiana tabacum 현탁세포를 model system으로 bioreator의 종류, 교반기의 형태, 그리고 통기량에 따른 세포생장을 관찰하였다. Bioreactor로는 stirred tank bioreactor과 airlift bioreactor를 사용하였으며 두가지 배양기 모두 flask에서의 생장보다 낮은 생장을 보였으며 stirred tank bioreactor보다는 airlift bioreator에서 높은 세포농도를 얻을 수 있었다. 교반기의 종류에 따른 세포의 생장은 큰 차이가 없었으나 hollowed paddle impeller를 사용하였을 경우에는 배양기간 동안 세포의 크기가 작게 유지되었다. 통기량을 0.30 vvm으로 유지하는 경우에 가장 좋은 세포생장을 관찰할 수 있었으며 1.0 vvm이상의 통기량에서는 과도한 foam의 형성과 세포의 갈색화 현상을 보이며 세포의 생장도 저해되었다. 또한 통기량이 증가할수록 세포크기지수가 감소하는 결과를 보였다.
식물세포의 기내배양에 의한 ubiquinone 10의 생산연구의 일환으로 Nicotiana tabacum cv Xanthi 품종으로부터 ubiquinone 10의 생성여부을 확인하고, 식물호르몬의 종류와 농도의 조건에 따른 ubiquinone 10의 생산증대를 조사하고자 본 실험을 수행하였다. Xanthi 캘러스 생장은 NAA 및 2,4-D와 혼합처리시 생장이 양호하였으며 NAA 단독처리구에서도 생장량이 증가되었고 암배양보다는 광배양상태에서 더 양호하였다. 또한 HPLC에 의해서 ubiquinone 10의 생성 여부를 조사한 결과 어느 조건에서도 모두 ubiquinone 10이 검출되었다. 식물호르몬에 의한 ubiquinone 10의 함량은 2,4-D와 NAA 혼합처리구에서보다 NAA 0.5 mg/L 단독처리구에서 ubiquinone 10의 함량이 증가되었으며, 특히 IBA 1mg/L와 NAA 0.5 mg/L 혼합처리구에서 더 양호한 경향을 보였고 단위 플라스크당 ubiquinone 10의 생산량도 더 높았다. 그러나 2,4-D 0.5 mg/L와 kinetin 0.5 mg/L 혼합한 처리구에서는 캘러스의 생장량은 비록 적었지만 ubiquinone 10의 함량이 가장 높아 단위 플라스크당 생산량은 제일 높은 경향을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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