• Journal of Plant Biotechnology
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• 제2권2호
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• pp.79-82
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• 2000

We have isolated a cDNA encoding a calcium-dependent protein kinase (CDPK) in Nicotiana tabacum, which was designated NtCDPK1. Accumulation of the NtCDPK1 mRNA was stimulated by various stimuli, including phytohormones, CaCl$_2$ wounding, fungal elicitors, chitin and methyl jasmonate. The NtCDPK1 gene encodes a functional Ser/Thr protein kinase of which phosphorylation activity is strongly induced by calcium. By analyzing expression of the NtCDPK1-GFP fusion protein and by immunoblotting with antibody which reacts with NtCDPK1, we found that NtCDPK1 is localized in membrane and nucleus in plant cells. Silencing expression of the NtCDPK1 transgene resulted in marked decrease of lateral root development in the transgenic tobacco plants. Yeast two hybrid screening using NtCDPK1 as a bait identified a tobacco homologue of proteasome regulatory subunit 21D7, designated Nt21D7. The 21D7 mRNA has been shown to be predominantly expressed in proliferating tissues in the cell cycledependent manner in carrot. The recombinant NtCDPK1 protein associated with Nt21D7 in vitro, and could phosphorylate the Nt21D7 protein in vitro in the presence of calcium, suggesting that Nt21D7 protein is a natural substrate of NtCDPK1 in tobacco. These results suggest that NtCDPK1 may regulate tell proliferation processes, such as lateral root formation, by regulating specificity and/or activity of proteasome-mediated protein degradation pathway.

• Applied Biological Chemistry
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• 제37권1호
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• pp.56-63
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• 1994

오이모자이크 바이러스(CMV)의 외피단백질 유전자의 일정한 염기서열을 보유하는 부분과 CMV RNA에 대항한 헤머헤드(hammerhead) 구조의 ribozyme을 만드는 올리고뉴클 레오타이드(oligonucleotide, nt)를 DNA 합성기를 이용하여 제조하였다. 올리고뉴클레오타이드의 양쪽가닥을 서로 합친 후 제한효소 BamHl과 SacI으로 처리하여 플라스미드 pBS SK(+)에 삽입하였고 CMV 기질과 ribozyme 클론의 염기서열을 결정하여 확인하였다. 기질과 ribozyme 클론 $1\;{\mu}g$ BssHII이나 SspI으로 처리한후 T7 RNA 합성효소를 이용하여 튜브내에서 전사반응을 실시하였다. 제한효소 BssHII를 처리한 경우 만들어진 기질 RNA의 크기는 176 nt 였는데 50 nt의 CMV RNA 염기, 6 nt의 Xbal 제한효소 염기, 120 nt의 벡터에서 비롯된 염기를 포함한다. Ribozyme RNA의 크기는 164 nt인데 38 nt의 ribozyme 염기부분과 그외는 기질의 것과 같은 염기를 포함한다. CMV 기질 RNA는 ribozyme RNA에 의하여 특이적으로 절단되어 96 nt와 80 nt 두개의 조각을 만들었다. 이러한 특이적 절반은$37^{\circ}C$ 보다 $55^{\circ}C$에서 더 빠르게 일어났다. SspI으로 처리한 경우 만들어진 기질 RNA(2234 nt)도 역시 위치 ribozyme에 의해 두조각으로 절반되었으며 SspI 처리 후 만들어진 ribozyme RNA(2222 nt)에 의해서 특이적으로 절단되었다.

• Molecules and Cells
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• 제45권3호
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• pp.158-167
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• 2022

Ubiquitin (Ub) is post-translationally modified by Ub itself or Ub-like proteins, phosphorylation, and acetylation, among others, which elicits a variety of Ub topologies and cellular functions. However, N-terminal (Nt) modifications of Ub remain unknown, except the linear head-to-tail ubiquitylation via Nt-Met. Here, using the yeast Saccharomyces cerevisiae and an Nt-arginylated Ub-specific antibody, we found that the detectable level of Ub undergoes Nt-Met excision, Nt-deamination, and Nt-arginylation. The resulting Nt-arginylated Ub and its conjugated proteins are upregulated in the stationary-growth phase or by oxidative stress. We further proved the existence of Nt-arginylated Ub in vivo and identified Nt-arginylated Ub-protein conjugates using stable isotope labeling by amino acids in cell culture (SILAC)-based tandem mass spectrometry. In silico structural modeling of Nt-arginylated Ub predicted that Nt-Arg flexibly protrudes from the surface of the Ub, thereby most likely providing a docking site for the factors that recognize it. Collectively, these results reveal unprecedented Nt-arginylated Ub and the pathway by which it is produced, which greatly expands the known complexity of the Ub code.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제49권5호
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• pp.539-544
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• 2006

목 적 : 가와사끼병의 진단 지표로서 NT-proBNP의 유용성을 살펴보고자 하였다. 방 법 : 가와사끼병을 진단 받은 환아 58명에서 발병 10일 이내 급성기에 전기화학발광면역법(Electrochemiluminescence immunoassay)를 이용하여 NT-proBNP를 측정하였고, 그 중 51명에서 회복기(발병 60에서 81일 이내)에 NT-proBNP 값을 측정하여 비교하였다. 가와사끼병과 임상적으로 구별하기 어려운 급성 열성 질환이 있는 환아 34명을 대조군으로 하여 NT-proBNP를 측정하여 가와사끼병 환자군과 비교하였다. 또한 가와사끼병 급성기에 심장 초음파검사를 시행하여 심낭삼출과 관상동맥 병변의 여부를 확인하였고 좌심실 확장기말 내경(LVIDd)과 수축기말 내경(LVIDs), 좌심실 구출율(LVEF)과 좌심실 단축율(LVSF)을 측정하여 NT-proBNP 측정치와의 상관관계를 조사하였다. 가와사끼병과 다른 질환의 감별진단을 위해 receiveroperating characteristic curve를 이용하여 NT-proBNP의 cutoff value를 구하였다. 결 과 : 가와사끼병 급성기 NT-proBNP 측정치는 대조군에 비해 유의하게 높았다($1,501.6{\pm}2,132.6$ vs. $139.0{\pm}88.8pg/mL$, P<0.0001). 51명의 가와사끼병 환자군에서 NT-proBNP 값은 급성기에 증가하고 회복기에 크게 감소하였다($1,466.0{\pm}2,173.2$ vs. $117.5{\pm}95.5pg/mL$, P<0.0001). 가와사끼병의 감별진단을 위한 NT-proBNP의 cutoff value를 260 pg/mL으로 하였을 때 민감도 93%, 특이도 88%를 보였다. NT-proBNP는 심낭삼출이 있는 환아에서 심낭삼출이 없는 환아에 비해 높았다($1,784.2{\pm}1,903.1$ vs. $1,384.4{\pm}2,232.6pg/mL$). 관상동맥 병변이 있는 환아(n=3)가 적어 NT-proBNP와의 관계를 확인할 수 없었다. NT-proBNP 측정치와 LVEF index(r=0.104, P=0.46) 및 LVIDd index(r=0.171, P=0.22)은 상관관계가 없었다. 결 론 : NT-proBNP는 가와사끼병 급성기에 크게 증가하며 회복기에 감소한다. NT-proBNP >260 pg/mL일 때 가와사끼병을 강력히 의심할 수 있으며, NT-proBNP는 가와사끼병을 진단하는 지표로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국임상수의학회지
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• 제30권3호
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• pp.151-158
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• 2013

본 연구는 개의 이첨판 폐쇄부전증(CMVI) 환자군에서 혈장 NT-proBNP농도를 평가한 연구이다. 본 연구를 위해 CMVI에 이환된 50마리와 건강한 대조군 7마리를 대상으로 일반적인 심초음파 검사와 혈중NT-proBNP농도를 측정하였다. 심부전의 심하기에 따라 분류된 환자군에서 측정된 NT-proBNP농도와 심초음파 인덱스의 상호관련성을 평가하였다. 혈중 NT-proBNP 농도는 심부전의 심하기에 따라 상승하였다. 또한 심초음파 인덱스중 left atrium/aorta (LA/AO), early diastolic transmitral flow (E) velocity, late diastolic transmitral flow (A) velocity, end diastolic volume index (EDVI) 등과 밀접한 관련성이 관찰되었다. 본 연구는 이첨판 폐쇄부전증 환자의 예후를 평가하는데 중요할 것으로 보인다.

• 한국임상수의학회지
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• 제29권4호
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• pp.271-276
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• 2012

사람에 연구에 따르면 심부전 진단에 널리 사용되는 NT-proBNP농도는 비만, 비만 관련인자들과 밀접한 상관 관계가 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 이러한 상관관계는 아직까지 수의분야에서는 입증된 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 다양한 정도의 이첨판 패쇄부전증(CMVI)에 이환된 73마리 개 집단에서 NT-proBNP와 비만 및 비만 관련인자들간의 상호관계를 조사하였다. 절식시 혈당 농도, 지방관련 인자(i.e., total triglycerides [TG], total cholesterol [TC], high-density lipoprotein cholesterol [HDL-C], low-density lipoprotein cholesterol [LDL-C]), fructosamine, insulin 및 NT-proBNP 농도를 측정하였다. Insulin/glucose ratio 역시 계산하였다. NT-proBNP 농도는 CMVI에 의한 심부전의 정도에 따라 농도변화가 관찰되었으며, body condition scores (BCS), insulin 및 fructosamine 농도와도 관련이 있었다. 또한 본 연구를 통해 비만과 혈중 NT-proBNP농도 간에 상관관계 역시 확인되었다. 또한 NT-proBNP농도는 비만과 관련 있는 인자인 fructosamine과 insulin농도와도 관련이 있었다. 본 연구는 개에서 NT-proBNP농도와 비만 정도와 상관관계를 입증한 첫 보고이다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제5권6호
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• pp.495-501
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• 2001

We have cloned the mouse neurotensin/neuromedin N (NT/N) gene from the murine mast cell line Cl.MC/C57.1 for the first time. The murine NT/N cDNA clone consisted of 765 nucleotides and coded for 169 peptide residues with an N-terminal signal peptide, and the C-terminal region contained of one copy of neurotensin (NT) and one copy of neuromedin N (NN). Total of four Lys-Arg dibasic motifs were present; one each at the middle of the open reading frame, at the N-terminal of NN, at the C-terminal of NT, and between NN and NT. Amino acid sequence analysis of the mouse NT/N revealed 90% homology to that of the rat NT/N gene. NT/N is expressed in murine mast cell lines (Cl.MC/C57.1 and P815), but not in murine bone marrow-derived mast cells (BMMCs), murine macrophage cell line (RAW 264.7), nor in murine T cell line (EL-4). NT/N mRNA in C1.MC/C57.1 is highly inducible by IgE cross-linking, phorbol myristate acetate, neurotensin, and substance P. Following the treatment of demethylating agent, 5-azacytidine (5-azaC), the NT/N gene was induced in BMMCs in response to IgE cross-linking. 5-azaC-treated BMMCs did not express the NT/N gene without additional stimuli. These findings suggested that the regulation of NT/N gene expression was dependent on the effects of not only gene methylation but also enhancer and/or repressor proteins acting on the NT/N promoter.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권4호
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• pp.253-256
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• 2004

Porcine fibroblasts were transferred into enucleated bovine oocytes for the interspecies nuclear transfer (NT). After NT, the embryos were cultured in three different culture systems. The media used for the experiment were CR1aa and NCSU23. The culture systems used for the experiment were: 1. Culture in CR1aa for 7 days (CR). 2. Culture in CR1aa for 2 days and subsequently in NCSU23 for 5 days (CR-NC). 3. Culture in NCSU23 for 7 days (NC). Bovine (intraspecies) NT group was used as a control. The oocytes in bovine NT group were treated the same as interspecies NT embryos except using bovine fibroblasts as nuclear donors. Regardless of their nuclear origin (interspecies vs bovine), the embryos in CR (68.4% vs 77.2%) and CR-NC (67.8% vs 70.5%) showed better developmental competence to the 2-cell stage (p<0.05) than those in NC (41.0% vs 10.0%). Bovine NT embryos in CR-NC did not develop over the 4-cell stage after the medium replacement, while interspecies NT embryos in CR-NC continued to develop and could reach over the 8-cell stage (12.2%). Blastocysts were only found in bovine NT group (17.4%), but no blastocyst was found in interspecies NT group. This study suggests that the development of interspecies NT embryos mostly depends on their recipient cytoplasm during the culture in vitro.

• BMB Reports
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• 제52권3호
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• pp.163-164
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• 2019

The ribosomal synthesis of proteins in the eukaryotic cytosol has always been thought to start from the unformylated N-terminal (Nt) methionine (Met). In contrast, in virtually all nascent proteins in bacteria and eukaryotic organelles, such as mitochondria and chloroplasts, Nt-formyl-methionine (fMet) is the first building block of ribosomal synthesis. Through extensive approaches, including mass spectrometric analyses of the N-termini of proteins and molecular genetic techniques with an affinity-purified antibody for Nt-formylation, we investigated whether Nt-formylated proteins could also be produced and have their own metabolic fate in the cytosol of a eukaryote, such as yeast Saccharomyces cerevisiae. We discovered that Nt-formylated proteins could be generated in the cytosol by yeast mitochondrial formyltransferase (Fmt1). These Nt-formylated proteins were massively upregulated in the stationary phase or upon starvation for specific amino acids and were crucial for the adaptation to specific stresses. The stress-activated kinase Gcn2 was strictly required for the upregulation of Nt-formylated proteins by regulating the activity of Fmt1 and its retention in the cytosol. We also found that the Nt-fMet residues of Nt-formylated proteins could be distinct N-terminal degradation signals, termed fMet/N-degrons, and that Psh1 E3 ubiquitin ligase mediated the selective destruction of Nt-formylated proteins as the recognition component of a novel eukaryotic fMet/N-end rule pathway, termed fMet/N-recognin.

• 대한임상검사과학회지
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• 제52권3호
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• pp.172-180
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• 2020

본 연구의 목적은 병원정보시스템을 활용하여 N-말단 프로-뇌 나트륨 이뇨 펩타이드(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)의 결과와 통상적인 혈액검사와의 상관성을 후향적으로 조사하는 것이다. NT-proBNP는 심부전의 병태 생리학에 관여한다. 본 연구결과는 연령과 NT-proBNP의 관계는 양의 상관관계(r=0.163)로 통계적으로 유의하였다(P<0.01). NT-proBNP 농도는 총 단백질(r=-0.250)과 알부민(r=-0.270)은 음의 상관관계, 적혈구수와 혈색소 그리고 적혈구 용적률은 음의 상관관계로 나타난 결과로 나타났다(P<0.01). NT-proBNP는 호중구와 양의 상관관계(r=0.227)와 림프구는 음의 상관관계(r=-0.236)로 통계적으로 유의한 결과가 나타났다(P<0.01). NT-proBNP와 크레아티닌은 양의 상관관계로 나타났으며(r=0.594, P<0.01), 다중회귀분석결과 가장 영향을 미치는 인자로 관찰되었다(B=0.53, t=7.65, P<0.01). NT-proBNP와 요산의 농도는 양의 상관관계로 유의한 관계를 나타냈다(r=0.180, P<0.05). 젖산탈수소효소가 NT-proBNP에 영향을 미치는 인자로 관찰되었다(B=0.20, t=3.28, P<0.01). 이러한 설명력은 43%의 영향력을 나타내어 NT-proBNP의 정확한 검사와 관련인자들은 심장표지자로서 임상적 가치가 있는 것으로 사료된다.