• 한국식품영양과학회지
• /
• 제16권4호
• /
• pp.251-261
• /
• 1987

본(本) 실험(實驗)은 세균(細菌)에 의한 L-threonine의 효율적인 생성(生成)을 검토할 목적(目的)으로 Brevibacterium flavum ATCC 14067을 사용하여 L-threonine 생성능(生成能)이 우수한 균수(菌株)를 선발(選拔)하기 위해 변이원인 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG)로 처리하여 돌연변이주(突然變異株)를 유도(誘導)한 후(後), 다시 methionine 영양요구주, lysine 영양요구주, isoleucine 영양요구주, lysine 영양요구주, isoleucine 영양요구주, methionine 및 isoleucine 영양요구주를 선발(選拔)하였다. 또한 선발(選拔)된 영양요구성 변이주들 중에서 L-threonine 생성능(生成能)이 원균(原菌)에 비(比)해 $3{\sim}4$배(倍)정도 우수한 B-13균주(菌株)$(met^-)$를 선발(選拔)하여 L-threonine 생성력(生成力), 배지(培地) 조성(組成) 및 배양(培養)에 따른 몇가지 요인(要因)들에 대하여 실험한 결과 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. L-threonine생성량은 원균주가 1.4mg/ml에 비해 methionine 영양요구성 변이주인 B-13은 4.86mg/ml로서 약 3.5배(倍)의 높은 생성량을 나타내었다. 2. B-13에 의한 L-threonine 생성(生成)에 적당한 배지조성(培地組成)은 glucose 10%, ammonium sulfate 2%, potassium phosphate monobasic 0.2%, magnesium sulfate 0.05%, biotin $200{\mu}g/l$ thiamine $300{\mu}g/l$이였으며 nicotinic acid 0.05% 첨가시 더욱 증가 되었다. 3. B-13에 있어서 유기영양원에 대한 효과는 yeast extract와 Peptone이 양호하였으며 영양요구물질인 metionine은 $100{\mu}g/ml$가 적당하였으며 aspartic acid와 homoserine 첨가시 L-threonine 생성이 증가되었으며 lysine 첨가시에는 감소하는 경향이 나타났다. 4. B-13에 의한 L-threonine 생성에 가장 적절한 pH는 $7.0{\sim}8.0$이였으며 배양일수(培養日數)는 4일(日)이 적당하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제3권2호
• /
• pp.78-85
• /
• 1993

In order to elucidate the mechanism which regulates the production of cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) and to achieve overproduction of CGTase by releasing catabolite (glucose) repression, several catabolite repression resistant mutants were selected from newly screened Bacillus firmus var. alkalophilus H609, after NTG (N-methyl-N -nitro-N-nitrosoguanidine) treatment, using 2-deoxyglucose as a nonmetabolizable analog of catabolite glucose and as a selection marker. Five catabolite repression resistant mutants were selected from about 30, 000 2-deoxyglucose resistant colonies. Relative catabolite repression indices of the selected mutants were in the range of 8~80% assuming 100% for parent strain. The amount of CGTase produced by the mutant strain CR41, which was 250 units/ml, was three times larger than that produced by its parent strain. The mutation seems to have occurred in the regulatory region of CGTase gene and not in the structural region or the glucose transporting system in cell membrane. The enzymatic properties of CGTase excreted from parent and mutant strains were also compared.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제33권3호
• /
• pp.566-570
• /
• 2004

공시균인 A .terreus mutant로부터 lovastatin의 생산성을 극대화할 수 있는 조건을 확립하고자 액체 배양법 및 고체 배양법 을 이용하여 HPLC를 통해 분석하였다. Lovastaton의 생산을 위해 액체 배양에서는 균사체 접종법인 No. 2배지를 사용한 전배양 및 본배양법이 포자접종법인 No. 1배지를 사용한 경우보다 lovastatin의 생산이 더 우수하였다. 고체 배양법에서는 분쇄 밀의 호화전분을 사용하여 28$^{\circ}C$, 15일간 배양시 lovastatin의 생산이 가장 우수하였으며 대량배양을 위해 배양용기를 달리하여 배양하였으며 cap을 부착하는 내열성 plastic bag을 이용하여 배양한 결과 두 방향으로 cap을 부착하여 통기량을 조절한 배양에서 lovastatin의 생산이 가장 우수하게 나타났다.

• Current Research on Agriculture and Life Sciences
• /
• 제11권
• /
• pp.81-89
• /
• 1993

xylA 유전자의 발현에 관한 xylR 유전자의 조절 메카니즘을 밝히기 위한 연구의 일환으로 xylA 프로모터 하류에 cat 유전자를 삽입시켜 Pxyl-cat-xylA 융합 플라스미드인 pEXC131을 제작하였고 이 플라스미드를 xylA 변이주인DH77로 형질전환시킨 결과 xylose의 유도시에만 Cm 내성과 xylose isomerase활성이 나타났다. pEXC1131/DH77에 NTG를 처리하여 xylose 유도없이도 Cm 내성과 xylose isomerase의 활성을 나타내는 xylA 유전자의 구성적 변이주인 pEXC131-39를 xylR 변이주인 DH60으로 형질전환시킨 균주가 xylose에 의한 유도와 무관하게 Cm 내성 및 xylose isomerase 활성을 가지는 것으로 보아 xylA 유전자의 프로모터부위의 변이에 의한 구성적 변이주임을 확인하였다.

• 한국초지조사료학회지
• /
• 제15권1호
• /
• pp.1-12
• /
• 1995

This study was to investigate an effective biological control of forage diseases and provide a basic data and a model in improving variety of antagonistic bacteria, with growth promoting effect on forage, through cell fusion. The results obtained were summarized as follows; 1. The antagonistic himbacterium against soil-borne phathogenic fungi Fusarium oxysporum and Rhizoctonia solani was isolated from continuous cropping himsphere soil of forage, and its biological and physiological characteristics were investigated. This bacterium was identified as Bacillus subrilis and named BS 101. Another strain for cell fusion was Bacillus thur ingiensis ssp. kurstaki HD-I(BT 37669) with insecticidal crystal. 2. The auxotropic mutants of BS 101 and BT 37669 were derived after mutagenesis using N-methyl-N'nitro- Nitrosoguanidine(NTG) to give amino acid requirement marker. n e s e auxotropic mutants of BS 101 and BT 37669 were named BS 1013(his-) and BT 69(asp-), respectively. 3. The best protoplast requirement was obtained using DM 3 medium, containing 5% casamino acid, 1 M $MgCI_2$ and 2% bovine semm albumin, to give Fusant 3, 7 and 8. BT toxin gene was not identified with fusants by Southern blotting. However, SDS-PAGE analysis of strains showed various protein patterns among fusants. 4. From the dark culture experiment, growth of forage in inoculated soil with antagonistic bacteria was delayed than that of non-inoculated soil with antagonistic bacteria in each continuous cropping soil and in each sterilized soil. On the other hand, growth duration of forage was different between continuous cropping soil and sterilized soil. 5. Seed germination of Alfalfa, Italian ryegrass and Orchardgrass were significantly improved by inoculation of antagonistic bacteria(p< 0.05).

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제30권2호
• /
• pp.111-115
• /
• 2002

천연 황색소 생산을 위하여 Monascus anka Nakazawa et Sato IFO 4478(KCCM l1832 strain) 균주를 모균주로 하여 UV 조사 및 NTG(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine)처리 및 이들 방법을 병용하는 방법을 사용하여 모균주와는 색소생성 특성이 다르게 황색소를 단일성분으로 생성하는 변이주를 분리하고 그 특성을 조사하였다. leucine, cystein, aspartic acid, glutamic acid 와 asparagine 등 5종의 아미노산에 대한 영양요구주를 분리하였고 이중 asparagine 영양요구주 Y7은 colony 형태와 균사의 직경에서 약간의 차이를 나타내지만 전형적인 Monascus 균주의 특성을 지니고 있었으며 특히 유성생식에 의한 번식 특성이 강하여 색소 생성에 유리한 조건을 지니고 있었다. 그리고 Y7은 밝은 색조의 황색소를 단일 성분으로 생성하며 10대 이상의 계대배양에서도 색소 생성 특성이 안정하였고 색소 생성량이 모균주보다 약 2.2배 높은 값을 나타내고 있었다. 이때 생성된 황색소는 373 nm에서 단일 흡수 peak를 나타내고 물, 에탄올 등 극성용매에 대한 용해성이 높은 특성을 나타내며 생성된 색소의 대부분이 균체 밖으로 배출되는 특성을 지니고 있었다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제18권3호
• /
• pp.167-176
• /
• 1975

ATP-저해 ribonuclease는 Bacillus subtilis와 같은 Bacillus속에서만 발견 되는 것으로서 이들 효소의 생리적 역활을 규명할 목적으로 Bacillus subtilis 균주를 사용하여 ATP저해성 negative ribonuclease변이주의 취득을 시도하고 선정된 균주가 생산하는 ribonuclease의 정제 및 몇 가지 성질에 대하여 실험한 결과는 아래와 같다. 1. Bacillus subtilis로 부터 ATP-저해 ribonuclease negative mutant의 취득을 시도한 결과 시험된 1817주의 균중에서 101균주가 변이주주로 선정 되었다. 2. 수개의 개별적인 column chromatography에 의하여 당균주가 생산하는 ATP-저해성 ribonuclease의 정제를 시도한 결과 DEAE-Sephadex A-50 column chromatography을 이용한 경우는 30배의 정제 효과와 99%의 회수율을 나타냈고 Sephadex G-75 column의 경우는 20배의 정제 효과와 98%의 회수율을 각각 나타냈다. 3. pH 5침전, 유안염석, Sephadex G-75 및 CM Sephadex를 연속적으로 통과시켜 당효소에 대한대량정제 시험을 시도한 결과 최초의 step(crude extract) 과정에 비하여 60배의 정제효과를 나타냈다. 4. 본정제 효소액에 대하여 전기영동을 실시한 결과 비정제 효소액에 비하여 매우 감소된 수의 담백 pattern을 나타냈다. 5. 당균주가 생산하는 ATP저헤 ribonuclease는 single stranded RNA를 분해하여 2',3'-cyclic AMP, 2',3'-cyclic CMP, 2',3'-cyclic GMP, 2',3'-cyclic UMP와 몇종의 미지물을 생성하였고 또한 본효소는 double stranded RNA를 분해하지 않었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제16권4호
• /
• pp.275-281
• /
• 1988

호알칼리성 Bacillus sp. F204와 Bacillus sp. K 17간에 원형질체 융합에 의한 cellulase와 xylanase를 동시에 생산하는 균주를 개발하기 위하여 두 균주에 500 $\mu\textrm{g}$/ml NTG를 처리한 후 약제내성변이주 인 S20(Km$^r$, Cm$^r$과 G70(Str$^r$)을 분리하였다. 원형질체 형성율은 균체를 대수증식기 중기까지 배양하여 200$\mu\textrm{g}$/m1 Iysozyme으로 37$^{\circ}C$에서 30-45분간 처리하였을 때 약 95%였다. 재생배지에 0.4-0.5M sodium succinate, 0.5% casamino acid, 1.5% polvinylpyrrolidone, 25mM MgC1$_2$및 50mM CaC1$_2$를 첨가하므로 Bacillus sp. F204와 Bacillus sp. K17의 재생율은 각각 24.9%, 26.2%였다. 50mM $Ca^{++}$을 첨가한 30%의 PEG 6,000용액을 45$^{\circ}C$에서 5분간 융합시킴으로써 6.2$\times$$10^{-6}$ 빈도로 융합주를 얻었다. cellulase, xylanase 및 avicelase를 생산하는 융합주는 모균주와 비교하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.150-155
• /
• 1988

L-Lysine 생산균주인 Brevibacterium flavum ATCC 14067 과 Corynebacteriurn glutamicum ATCC13032에 섬유소 자화능이 우수한 Cellulomonas flavigena KFCC31221를 속간 융합시켜 섬유소로부터 L-lysine을 생산할 목적으로 이들 균주의 영양요구성 변이주 분리, 원형질체의 형성 및 재생의 조건을 조사하였다. NTG(500$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)로 유기하여 penicillin-G(300$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)로 농축한 변이주에서 B. flavum은 hse- str$^{r}$(100$\mu\textrm{g}$/$m\ell$), C. glutamicum는 Met$^{-}$T$hr^{-}$ Rif$^{r}$(5$\mu\textrm{g}$/$m\ell$), C. flavigena 는 T$hr^{-}$Val$^{-}$Kan$^{r}$(50$\mu\textrm{g}$/$m\ell$)의 gene marker를 가지는 영양요구성과 약제내성균주를 분리하였다. 공시균주의 원형질체 형성은 osmotic stabilizer로서는 0.5M sucrose, 배양기간은 대수증식기 중기의 균이 양호하였고, lysozyme 최적 처리 pH, 온도, 농도 및 반응시간은 각각 pH6.5, 33$^{\circ}C$, 500 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$, 6시간으로 나타났으며, 이때의 원형질체형성율은 95-98%였다. 원형질체를 1.5% agar가 함유된 완전재생용 배지위에 0.7% agar가 함유된 완전재생용 배지로 중층했을 때 약 30~33%의 재생율을 보였다.

• 농업과학연구
• /
• 제10권1호
• /
• pp.166-185
• /
• 1983

생전분당화효소(生澱粉糖化酵素) 생산능(生産能)이 강력(强力)한 균주(菌株)를 얻기 위하여 Aspergillus niger IFO 8541(NRRL 3112)을 친주(親株)로 하여 연차적(連次的)인 자외선조사처리(紫外線照射處理) 및 NTG 처리(處理)에 의(依)한 인공변이(人工變異)를 시도(試圖)하였다. 그 결과(結果) 효소생산능(酵素生産能) 우수한 2개(個)의 변이주(變異株)를 얻었으며, 이어서 이들 균주(菌株)의 균학적(菌學的) 특징(特徵)을 조사(調査)하고 효소(酵素)의 생산조건(生産條件)과 작용조건(作用條件)을 검토(檢討)하였다. 더욱 생전분당화효소(生澱粉糖化酵素)를 정제(精製)하고 정제효소(精製酵素)의 특성(特性) 등(等)을 검토(檢討)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 자외선조사처리(紫外線照射處理)에 의(依)하여 얻은 변이주(變異株) UV-46은 분생자두(分生子頭)의 색(色)이 tan type으로 변(變)하였으며, 밀기울배양시(培養時) 친주(親株)에 비(比)하여 호화전분당화효소(糊化澱粉糖化酵素)의 생산능(生産能)은 약(約) 2배(倍), 생전분당화효소(生澱粉糖化酵素) 생산능(生産能)은 약(約) 1.8배(倍)로 증가(增加)되었다. 2. NTG처리(處理)에 의(依)하여 얻은 변이주(變異株) NG-41은 분생자두(分生子頭)의 색(色)은 약간 엷어졌으나 흑색(黑色)이었으며, 밀기울배양시(培養時) 친주(親株)에 비(比)하여 호화전분당화효소(糊化澱粉糖化酵素) 생산능(生産能)은 약(約) 1.8배(倍) 생전분당화효소(生澱粉糖化酵素) 생산능(生産能)은 약(約) 2배(倍), ${\alpha}$-amylase 생산능(生産能)은 약(約) 3배(倍)로 증가(增加)되었다. 3. 변이주(變異株) 및 친주(親株)의 조효소액(粗酵素液)을 DEAE-Sephadex A-50 column chromatography법(法)으로 정제(精製)하여 각각(各各) 2개의 glucoamylase활성(活性) peak와 ${\alpha}$-amylase활성(活性) peak를 얻었다. Glucoamylase I은 호화전분당화효소활성(糊化澱粉糖化酵素活性)만 나타냈으나, glucoamylase II (생전분당화효소(生澱粉糖化酵素))는 생전분당화효소활성(生澱粉糖化酵素活性)과 동시(同時)에 호화전분당화효소활성(糊化澱粉糖化酵素活性)을 나타내었다. 4. 변이주(變異株) UV-46은 glucoamylase II의 생산능(生産能)이 강화(强化)되고, 변이주(變異株) NG-41은 ${\alpha}$-amylase 생산능(生産能)이 특(特)히 강화(强化)된 균주(菌株)였다. 5. 친주(親株) 및 두 변이주(變異株)의 glucoamylase II는 효소화학적(酵素化學的)인 성질(性質)이 동일(同一)한 것이었다. 6. 친주(親株) 및 두 변이주(變異株)에서 얻은 정제(精製) glucoamylase II는 전기영동적(電氣泳動的)으로 단일효소(單一酵素)라고 인정(認定)되었다. 7. 정제(精製)한 glucoamylase II의 결정(結晶)은 능형판상(菱形板狀)이었다. 8. 결정(結晶) glucoamylase II의 분자량(分子量)은 76,000, 등전점(等電點)은 3.4, 작용최적(作用最適) pH는 3.5, 작용최적온도(作用最適溫度)는 $60^{\circ}C$였다.