ATP-Inhibited Ribonuclease of Bacillus subtilis

Bacillus subtilis ATP 조해(阻害) Ribonuclease에 관한 연구

As a study on the ATP-inhibited ribonuclease of Bacillus subtilis the screening work for obtaining the ATP-inhibited ribonuclease negative mutant were carried out. And mutant strain was selected by the treatment of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG). For the selected strain the enzyme purification and some physiological properties were examined and the results obtained were as follows. 1. Among tested 1817 strains with the treatment of NTG, 101 strain was selected as a mutant strain. 2. ATP-inhibited ribonuclease was tentatively purified by several independent column chromatography. The results with Sephadex G-75 column were 30 times purification, 99% recovery, and 20 times purification, 98% recovery, respectively. 3. ATP-inhibited ribonuclease was purified by 60 times through acid treatment, ammonium fractionation, and two successive chromatography. 4. The purified ribonuclease were shown to be effectively concentrated in robonnclease content and to have reduced numbers of protein band on Disc electrophoresis. 5. This enzyme degraded single-stranded RNA to 2',3'-cyclic AMP, 2',3'-cyclic CMP, 2',3,-cyclic GMP, 2',3'-cyclic UMP and some unknown intermediates. The enzyme could not split double-stranded RNA.

ATP-저해 ribonuclease는 Bacillus subtilis와 같은 Bacillus속에서만 발견 되는 것으로서 이들 효소의 생리적 역활을 규명할 목적으로 Bacillus subtilis 균주를 사용하여 ATP저해성 negative ribonuclease변이주의 취득을 시도하고 선정된 균주가 생산하는 ribonuclease의 정제 및 몇 가지 성질에 대하여 실험한 결과는 아래와 같다. 1. Bacillus subtilis로 부터 ATP-저해 ribonuclease negative mutant의 취득을 시도한 결과 시험된 1817주의 균중에서 101균주가 변이주주로 선정 되었다. 2. 수개의 개별적인 column chromatography에 의하여 당균주가 생산하는 ATP-저해성 ribonuclease의 정제를 시도한 결과 DEAE-Sephadex A-50 column chromatography을 이용한 경우는 30배의 정제 효과와 99%의 회수율을 나타냈고 Sephadex G-75 column의 경우는 20배의 정제 효과와 98%의 회수율을 각각 나타냈다. 3. pH 5침전, 유안염석, Sephadex G-75 및 CM Sephadex를 연속적으로 통과시켜 당효소에 대한대량정제 시험을 시도한 결과 최초의 step(crude extract) 과정에 비하여 60배의 정제효과를 나타냈다. 4. 본정제 효소액에 대하여 전기영동을 실시한 결과 비정제 효소액에 비하여 매우 감소된 수의 담백 pattern을 나타냈다. 5. 당균주가 생산하는 ATP저헤 ribonuclease는 single stranded RNA를 분해하여 2',3'-cyclic AMP, 2',3'-cyclic CMP, 2',3'-cyclic GMP, 2',3'-cyclic UMP와 몇종의 미지물을 생성하였고 또한 본효소는 double stranded RNA를 분해하지 않었다.