• 생명과학회지
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• 제24권11호
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• pp.1174-1179
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• 2014

본 연구는 감마선이 새로운 품종의 버섯을 개발하는데 이용 될 수 있는지 평가하기 위하여 수행하였다. 본 연구를 한국, 일본, 대만 등의 느티만가닥버섯 20종류, 한국 잿빛느티만가닥버섯 5종류, 일본 땅지만가닥버섯 등의 3품종과 돌연변이체의 유전적 변이를 분석하였다. 50~2,000 Gy의 감마선을 느티만가닥버섯 포자에 조사하였다. 포자를 이용한 돌연변이 유발의 감마선 적정선량은 50~500 Gy의 저준위선량이었다. 돌연변이 단핵균사를 교배하여 이핵균주를 만들었다. 돌연변이 균주와 재래종의 버섯들로부터 DNA를 추출하여 16S ribosomal DNA, ITS의 전부분 28S ribosomal DNA의 일부분이 포함된 ITS서열을 분석을 하였다. 분석한 ITS서열의 길이는 1,052~1,143 뉴클레오티드였다. Nei-Li's 방법에 의해 유전적 유연 관계계를 분석하였다. 느티만가닥버섯 품종들간의 비유사도는 0~3.5%였다. 또한 Neighbor-Joining (NJ)방법에 의해 계통수를 작성하였다. 그 결과 느티만가닥버섯의 품종간의 비유사도는 0~3.5%였다. 또한 23품종과 5 돌연변이 이 그룹의 ITS서열을 바탕으로 한 계통순는 12 cluster를 나타내었다. 돌연변이 균주들은 서로 다른 cluster를 형성하였다. 무작위적인 돌연변이가 발생하였음을 알 수 있었다. 이상의 연구결과들을 감마선이 버섯의 품종개량을 위한 수단이 될 수 있음을 보여주었다.

• 한국작물학회지
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• 제39권1호
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• pp.1-6
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• 1994

돌연변이로 유기된 고당미 계통과 원품종을 대비하여 미립의 외형, 배유결정조직, 유리당함량, 단백질함량 및 아미노산 조성, 지방함량 및 지방산조성, 알칼리붕괴도, 호응집성을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 고당미는 입폭과 입후가 원품종에 비해 작았고, 현미 1000입중이 월등히 감소하였다. 2. 고당미의 배유조직에서는 뚜렷한 전분입자를 관찰할 수 없었는데, 고당미의 종류별로 차이가 있었다. 3. 고당미의 sucrose, glucose, fructose 함량은 원품종보다 유의하게 높았으며 특히 sucrose는 원품종이 1.11∼2.65%인데 비해 고당미는 5.84∼8. 79%로 월등히 증가하였다. 동일한 sugary 유전자를 가진 계통간에도 차이가 있었으며, 화청su-2는 유의하게 낮은 sucrose 및 총당함량을 보였다. 4. 화청su-1을 제외한 고당미계통들은 원품종과 같거나 높은 알카리붕괴도를 보였고, 호응집성에서도 원품종에 비해 harder gel의 특성을 보였다. 5. 고당미계통의 단백질 및 지방함량은 원품종에 비해 월등히 높았는데, 이는 고당미계통에서 도리어 호분층이 두터워졌고 배유전분층의 축소로 인해 현미에서 호분층의 상대적 비율이 높기 때문이었다. 아미노산 및 지방산 조성에는 두드러진 변화가 없었다.

• 한국식물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국식물생명공학회 2003년도 식물바이오벤처 페스티발
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• pp.65-71
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• 2003

Bax, a mammalian pro-apoptotic member of the Bcl-2 family, induces cell death when expressed in yeast. To investigate whether Bax expression can induce cell death in plant, we produced transgenic Arabidopsis plants that contained murine Bax cDNA under control of a glucocorticoid-inducible promoter. Transgenic plants treated with dexamethasone, a strong synthetic glucocorticoid, induced Bax accumulation and cell death, suggesting that some elements of cell death mechanism by Bax may be conserved among various organisms. Therefore, we developed novel yeast genetic system, and cloned several Plant Bax Inhibitors (PBIs). Here, we report the function of two PBIs in detail. PBI1 is ascorbate peroxidase (sAPX). Fluorescence method of dihydrorho-damine 123 oxidation revealed that expression of Bax in yeast cells generated reactive oxygen species (ROS), and which was greatly reduced by co-expression with sAPX. These results suggest that sAPX inhibits the generation of ROS by Bax, which in turn suppresses Baxinduced cell death in yeast. PBI2 encodes nucleoside diphosphate kinase (NDPK). ROS stress strongly induces the expression of the NDPK2 gene in Arabidopsis thaliana (AtNDPK2). Transgenic plants overexpressing AtNDPK2 have lower levels of ROS than wildtype plants. Mutants lacking AtNDPK2 had higher levels of ROS than wildtype. $H_2O_2$ treatment induced the phosphorylation of two endogenous proteins whose molecular weights suggested they are AtMPK3 and AtMPK6. In the absence of $H_2O_2$ treatment, phosphorylation of these proteins was slightly elevated in plants overexpressing AtNDPK2 but markedly decreased in the AtNDPK2 deletion mutant. Yeast two-hybrid and in vitro protein pull-down assays revealed that AtNDPK2 specifically interacts with AtMPK3 and AtMPK6. Furthermore, AtNDPK2 also enhances the MBP phosphorylation activity of AtMPK3 in vitro. Finally, constitutive overexpression of AtNDPK2 in Arabidopsis plants conferred an enhanced tolerance to multiple environmental stresses that elicit ROS accumulation in situ. Thus, AtNDPK2 appears to play a novel regulatory role in $H_2O_2$-mediated MAPK signaling in plants.

• 대한수의학회지
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• 제40권3호
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• pp.471-478
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• 2000

새로운 항HIV 후보물질인 19개의 KR-V 경구제제의 생체이용률을 평가하기 위해 랫드에서 정맥 및 경구투여후 약물동태를 연구하였다. 혈장내 KR-V 화합물들의 검출은 HPLC-UVD 법을 이용하여 분석하였다. 19개 KR-V series 중 KR-V 3, 10, 14, 16 및 18-1만이 랫드에서 경구로 흡수되어 생체이용성을 나타내었다. 10mg/kg의 정맥투여후 약물 통태 연구에 있어서는 5개물질, KR-V3, 10, 14, 16 및 18-1의 소실 반감기는 서로 비슷하였으나 KR-V 3, 10, 14 및 16의 총청소율($CL_{total}$, >4L/hr/kg)은 KR-V 18-1(1.1L/hr/kg) 보다 유의성있게 높았다. KR-V 3, 10, 14 및 16에 비해 KR-V3 18-1이 혈중곡선하면적(AUC, $8.97{\mu}g{\cdot}hr/ml$)은 크고 겉보기분포용적(Vd, 0.58L/kg)은 적었다. 50mg/kg의 경구투여후 약물동태 연구에 있어서는 KR-V 18-1의 반감기가 다른 4개의 물질에 비해 비록 짧았지만 경구 AUC($3.659{\mu}g{\cdot}hr/ml$), 최고혈중농도($C_{max}$, $1.891{\mu}g/ml$) 는 현저히 높았다. 또한 별도의 in virus 실험결과 생체이용률을 나타낸 이들 5개의 물질들 중 KR-V 18-1만이 HIV-1 돌연변이종(mutants)에 대한 억제효과를 나타내었다. 따라서 KR-V 18-1이 항에이즈(AIDS)제의 새로운 후보물질 혹은 선도물질로서 가능성이 기대되었다.

• 대한수의학회지
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• 제32권2호
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• pp.181-194
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• 1992

Two hundred and eighty nine strains of Yersinia enterocolitica isolated from healthy pigs were tested for the presence of 40~50 Megadalton virulence-associated plasmids and plasmidmediated in vitro virulence-associated properties, i.e., congo red uptake, calcium dependency, autoagglutination, CRMOX reaction, crystal violet binding and pyrazinamidase reaction. The correlationships between in vitro virulence-associated properties and the presence of 220 Kdalton outer membrane protein(OMP) were examined in strains with or without virulence-associated plasmids. The correlationships between the presence of plasmids on the production of the OMP and the expression of in vitro virulence-associated properties were studied with $CRMOX^+$ strains and acridine orangecured $CRMOX^-$ mutants. The results were as follows : 1. Of the in vitro virulence-associated tests with 289 strains of Y enterocolitica, 275 strains (95.2%) were positive for pyrazinamidase test, and followed by in order of crystal violet binding test, 226 (79.2% ) ; CRMOX test, 190 (65.7%) ; autoagglutination test, 1.85(64.0%) : calcium dependency test, 86 (29.8%) and congo red uptake test, 47(16.3%). 2. The correlationship between autoagglutination and CRMOX test(r=0.90) was highly significant (p<0.01). 3. In 190 strains(65.7%) bearing the virulence-associated plasmids(MW 40~50 Mdalton), the correlation between the presence of plasmids and their in vitro virulence-associated properties were highest with CRMOX test(r=0.93) and followed by in orders of AAG test(0.81), CV test(0.46), PYZ test(0.37) and CD test(0.18), but no correlationship between the presence of plasmids and CR test(-0.11). 4. The $CRMOX^+$ strains produced the 220 Kdalton OMP when they were cultured at $37^{\circ}C$, but not at $26^{\circ}C$. The presence of 220 Kdalton OMP was correlated significantly with in vitro virulence properties and the presence of virulence-associated plasmid, respectively. 5. In the isogenic $CRMOX^-$ mutant strains, of which plasmid were cured by treatment with acridine orange not only in vitro virulence-associated properties(CR 100%, CD 100%, AAG 82.6%, CV 58.3%) disappeared but also 220 Kdalton OMP(100%) was not produced. These results indicate that the positive CRMOX reaction is plasmid-mediated and the CRMOX test is potential as an in vitro virulence tests with Y enterocolitica.

• 미생물학회지
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• 제35권4호
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• pp.315-321
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• 1999

핵전이 방법을 이용하여 효모에서 전분분해능이 향상된 새로운 우수 균주를 개발하고자 하였다. Saccharomycopsis fiburigera KCTC 7393과 Saccharomyces cerevisiae KCTC 7049에서 핵을 분리한 후 영양요구 돌연변이주인 S. cerevisiae의 안으로 전달시켜 잡종(MN-16)을 형성하여 전분 분해능이 증가된 잡종을 선별하였다. 세포 배양액으로 조효소 용액을 만든 후 ammonium sulfate 침전, DEE-Sephacel column chromatography, Sephacryl S-200 column chromatography 등의 정제과정을 통해 9.7%의 회수율로 약 10.6배 정제 된 효소를 얻을 수 있었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE 전기영동을 통해 단일 band를 보여 주었으며, SDS-PAGE 와 Sephacryl S-200 column chromatography를 통해서 53kDa으로 나타났다. 정제효소의 최적 활성 온도는 40${\circ}C$이고, 안정성은 40~45${\circ}C$로 나타났다. 최적 활성 pH는 5.5이었고, pH 5.0~7.0 정도에서 pH안정성이 80%정도 유지되었다. 가용성 전분에 대한 $K_{m}$ 값은 2.5㎎/㎖이었다. 또한, 정제 효소의 금속 이온의 효과로 $Ca^{2+}, Co^{2+}, EDTA, Mg^{2+}, Mn^{2+}, Zn^{2+}$ 첨가시 활성이 촉진되었고, $Ca^{2+}$의 경우 가장 높은 반면 $Cu^{2+}, Fe^{2+}, Ni^{2+}$의 경우는 오히려 활성이 감소되었다.

• 미생물학회지
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• 제27권3호
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• pp.176-180
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• 1989

E. coli의 $tRNA^{phe}$내에는 세 개의 psiudouridine 염기들이 존재한다. 이 $tRNA^{phe}$내의 pseudouridine 염기들의 기능을 연구하기 위하여 부위특이적 돌연변이를 이용하여 $tRNA^{phe}$ 유전자의 염기를 다른 염기로 치환시켰다. E. coli $tRNA^{phe}$ 유전자들 중 하나인 phe W 유전자내에서 32번에 해당하는 T 염기를 C 염기로 39번 T 염기를 C 염기로 Kunkel이 개발한 부위특이적 돌연변이 방법을 사용하여 각각 치환시켰다. DNA 염기서열을 결정함으로써 돌연변이체를 확인하였으며, 이들 돌연변이 유전자를 함유한 재조합 플라스미드를 이용하여 돌연변이된 phe W 유전자들의 E. Coli NP37($pheS^{-ts}$)에 대한 complementation 활성을 조사하였다. 32번 위치가 변이된 pheW 유전자 뿐만아니라 39번 위치가 변이된 phe W 유전자를 함유한 E. coh NP37들은 모두 non-permissive temperature에서 자라지 못하였다. 이 결과는 변이된 pheW 유전자들이 E. coli NP37을 complementation 할 수 없으며, 또 pseudouridine 염기들이 생체내에서 E. coli $tRNA^{phe}$의 활성에 필수적이라는 것을 의미한다.

• 미생물학회지
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• 제49권1호
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• pp.99-104
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• 2013

박테리오파지 P2 sir 변이체는 그것의 위성파지인 박테리오 파지 P4를 위해 비효율적인 도움파지로 알려졌다. 이러한 현상을 "P2 sir-관련 도움파지 비효율성"이라고 부르고 있으며, P2와 P4의 cos 지역에서의 DNA 염기배열 순서 차이가 이러한 현상을 나타나게 한다고 생각되었다. 이를 검증하기 위해, 여러 단계의 in vitro DNA 조작을 거쳐 P2의 cos 지역을 함유하는 유도체 P4인 P4 sid71 cosP2를 조성하였다. 일단계 생장 실험을 통해 그것의 후손 방출량을 결정하였다. 그 결과는, P4 sid71 cosP2에서 P4의 cos 지역을 P2의 cos 지역으로 대체한 것이 "P2 sir-관련 도움파지 비효율성"을 극복한 것으로 나타났다. P2 야생형과 P2 sir 돌연변이형을 도움파지로 삼아 준비한 P4 sid71 cosP2 파지 농축액들을 CsCl 부양 균등밀도 편차실험으로 분석하였다. 그 결과, 양 경우 모두 3개의 P4 유전체를 가진 파지 입자가 우세한 것으로 나타났다.

• 한국균학회지
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• 제41권1호
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• pp.1-8
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• 2013

Cop9 signalosome(CSN)은 최초 식물 발달 과정에서의 빛에 의한 전사 조절 과정에서의 억제 유전자로 처음 분리된 이후 이들이 다양한 진핵 생물 에서 매우 잘 보존되어 있음이 알려지게 되었다. 이들은 대부분 8개의 subunit으로 구성되며 26S proteasome lid와 eIF3와 구조적으로는 물론 기능적으로도 유사성을 보인다고 알려져 있다. 이들은 특히 Cullin-Ring ubiquitin ligases(CRL)의 구성 요소인 Cullin의 deneddylation을 매개하여 ubiquitin ligase의 활성을 조절한다고 알려져 있으며, 또한 세포 주기 및 checkpoint 조절에 관여한다고 보고되었다. 분열효모의 경우 CSN1 및 CSN2 결손 세포에서 S-phase로서의 진행이 지연됨이 관찰되었고 감마선 혹은 UV에 좀더 민감해지는 현상이 관찰되어 CSN이 checkpoint 조절에 관여한다는 것을 보여주었다. 곰팡이의 CSN 경우 구조적으로 더욱 상위 개체들의 그것과 더욱 유사한데, CSN이 생체 시계 리듬, 빛과 연관한 호르몬 생산, 곰팡이의 발달 과정 및 생식 주기를 조절함이 보고되었다. 또한 Aspergillus nidulans의 경우 상위개체에서 보여준 DNA 합성 및 손상, 세포 주기 조절에서의 기능이 알려지면서 CSN은 곰팡이 생활사에 필수적인 여러 과정들을 조절하는 중요한 인자임을 알 수 있다. 이로써 식물이나 포유동물 등에서 보고되었던 CSN의 주요 기능을 미생물에서도 대부분 공유하고 있음을 알 수 있고 이들이 CRL을 통한 주요 세포 활성 조절 연구에 좋은 툴로서 활용할 수 있음을 시사하고 있다.

• BMB Reports
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• 제39권3호
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• pp.304-310
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• 2006

Transcription factor NF-E2-related factor 2 (Nrf2) regulates the induction of Phase II detoxifying enzymes and antioxidant enzymes in response to many cancer chemopreventive compounds. In this study, we investigated the role of receptor associated coactivator (RAC3) or steroid receptor coactivator-3 (SRC3) and other nuclear co-regulators including CBP/p300 (CREB-binding protein), CARM1 (Coactivator-associated arginine methyltransferase), PRMT1 (Protein arginine methyl-transferase 1), and p/CAF (p300/CBP-associated factor) in the transcriptional activation of a chimeric Gal4-Nrf2-Luciferase system containing the transactivation domain (TAD) of Nrf2 in HepG2 cells. The results indicated that RAC3 up-regulated the transactivation activity of Gal4-Nrf2-(1-370) in a dose-dependent manner. The enhancement of transactivation domain activity of Gal4-Nrf2-(1-370) by RAC3 was dampened in the presence of dominant negative mutants of RAC3. Next we studied the effects of other nuclear co-regulators including CBP/p300, CARM1, PRMT1 and p/CAF, and the results showed that they had different level of positive effects on this transactivation domain activity of Gal4-Nrf2-(1-370). But importantly, synergistic effects of these co-regulators in the presence of RAC3/SRC3 on the transactivation activity of Gal4-Nrf2-(1-370) were observed. In summary, our present study showed for the first time that the 160 RAC3/SRC3 is involved in the functional transactivation of TAD of Nrf2 and that the other nuclear co-regulators such as CBP/p300, CARM1, PRMT1 and p/CAF can also transcriptionally activate this TAD of Nrf2 and that they could further enhance the transactivation activity mediated by RAC3/SRC3.