홍국은 동아시아 국가에서 예로부터 음식과 전통의학에 이용되어 왔다. 홍국은 특정 미생물(일반적으로 Monascus purpureus)이 쌀을 발효시켜 생산되어진다. Monascus sp.는 2차 대사과정을 통해 Monascus 색소, monacolins, γ-aminobutyric acid 등을 생산할 수 있다. Monascus 종의 대사산물인 monacolin K, γ-aminobutyric acid와 dimerumic acid 및 monascus pigments는 항산화 효과, 콜레스테롤과 혈압과 항비만 효과들이 알려져 있다. 본 연구에서는 Monascus sp.로 발효된 홍맥 에탄올 추출물의 항비만 활성을 알아보고자 지방 세포를 이용하여 실험을 실시하였다. 홍국 에탄올 추출물의 항비만 효과는 MDI로 유도된 3T3-L1 전지방세포의 Oil Red O staining과 Real time RT-PCR을 이용하여 비만 유전자 발현을 통해 확인하였다. 홍맥 추출물을 3T3-L1 전지방세포에 각각 200 ㎍/ml, 400 ㎍/ml, 800 ㎍/ml을 처리한 결과 5.04%, 12.24%, 23.52%로 지방축적을 감소시키는 것을 확인하였다. 또한, 홍맥 추출물은 3T3-L1 전지방세포로부터의 C/EBPα, SREBP-1, PPAR-γ 유전자의 발현이 농도 의존적으로 감소되는 것을 확인하였다. 본 연구를 통해 홍맥 추출물의 지방 합성 억제활성을 확인하였으며, 향후 항비만 기능성 식품소재로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
홍국균이 생산하는 색소를 상업적으로 이용하기 위한 기초연구로서 Monascus purpureus CBS 281.34 80% ethanol 가용성 색소의 열 pH, 유기산 존재 시의 안정성을 알아보았다. 또한 ethanol 가용성 색소 추출물에 증류수를 가해 수분 함량이 0∼80%가 되도록 하고 수용성 색소와 함께 저장하면서 이들의 안정성도 검토하였다. 80% ethanol 가용성 홍국색소는 1$0^{\circ}C$의 저온에서 4주간 저장 시 9.74%의 분해율을 보였으나, 60∼8$0^{\circ}C$의 고온에서는 24시간과 12시간 저장 시 각각 23.06%와 30.36%나 분해되어 색소의 안정성은 단기간 내 크게 저하하였다. pH 2와 pH 10에서의 80% ethanol 가용성 색소 분해율은 pH 4∼8보다 높았고, 0.6% citric acid, 6% acetic acid 및 1.5% lactic acid를 가해 pH 4로 조정하여 4주간 저장 시에는 대조구와 대조구와의 차이가 가장 큰 acetic acid 하에서의 분해율과의 차이도 6.08%로 거의 나타나지 않아 80% ethanol 가용성 홍국 색소는 유기산하에서 비교적 안정한 것으로 사료되었다. 또한 ethanol 가용성 색소에 증류수를 가해 저장하면 색소 안정성은 저하하였는데, 색소 분해율은 수분함량 20%에서 가장 높았고 80%에서 가장 낮았다. 한편 수중에서의 ethanol 가용성 색소는 2$0^{\circ}C$보다 1$0^{\circ}C$에서 현저하게 안정하였다.
Monascus rubber KCTC 6122를 이용하여 액체 배양을 통한 실험균의 적색 색소의 생산을 위한 배양 조건의 최적화에 관한 결과는 다음과 같다. 실험 균주가 생산하는 적색색소의 최적 배양 조건은 탄소원으로 rice powder 4% 첨가, 질소원으로 NaN0$_3$ 0.2%, 인산염으로 $Na_2$HPO$_4$의 농도가 0.3%, MgSO$_4$의 농도가 0.15%일 때 가장 높은 적색 색소 생성을 나타내었다. 배양 온도는 3$0^{\circ}C$, 초기 pH가 6.5, 진탕속도를 150 rpm, 배양 시간 8일 일 때 적색 색소의 생성능이 흡광도 70.29로 가장 우수하였다.
Monascus pilosus KCCM 60084로부터 생성되는 색소의 공기에 대한 안정성 및 색소용액의 온도, pH, 빛 및 염류에 대한 안정성을 조사하였다. Monascus 색소는 공기 중에 30일간 방지할 경우 77.9%, 감압하에서는 48.4%가 감소하였다. Monascus 색소는 $20{\sim}80^{\circ}C$에서는 비교적 안정하였으나 $100{\sim}121^{\circ}C$에서는 $6.0{\sim}11.6%$의 감소율을 나타내었다. Monascus 색소는 pH $4{\sim}8$에서는 안정하였으나 pH 3과 9에서의 감소율은 각각 15.5% 및 13.7%이였다. Monascus 색소는 암소에서는 안정하였으나 형광하에서 30일 동안 둔 경우는 22.9%, 태양광 하에서는 68.8%가 감소하였다. 또한 Monascus 색소는 KCI, NaCI, $CaCl_2$, $MgCl_2$ 및 $ZnCl_2$에서는 비교적 안정하였으나 0.1 M $AlCl_3$ 용액에서는 20.3%의 감소로 불안정하였다.
홍국균의 배양액으로부터 황색 색소를 분리하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 60%-ethanol-petroleum ether (1:2)의 혼합유기 용매로부터 partition chromatography 방법으로 색소를 추출하여 petroleum ether층에서 황색 색소를 얻었다. 2. 추출한 황색 색소의 최대 흡광도는 394-403nm 이었으며 적색계색소는 함유되어 있지 않았다. 3. Thin layer chromatography에 의한 황색계 색소는 황색의 Monascin이 대부분이었고 주황색의 unknown 물질 및 pale yellow의 Monascidin A가 소량 함유되어 있었다. 4. 분리한 지용성의 황색 색소를 N-KOH로 검화시켜 수용성인 K염 복합 황색색소로 정제하였다.
Monascus purpureus MK2를 이용하여 수용성 홍국 천연색소 생산을 위한 최적 배양조건에 대한 연구 결과, 탄소원으로 wheat flour 3.0% 첨가, 질소원으로 $NaNO_3$ 0.15%, 인산염으로 $K_{2}HPO_4$ 농도가 0.2% 및 $MgSO_4\;7H_{2}O$의 농도가 0.05%일 때 가장 높은 수용성 홍국 천연색소 생성을 나타내었다. 또한 배양온도는 $30^{\circ}C$, 초기 pH가 7.0, 진탕속도 130 rpm 및 배양시간 7일 일 때 수용성 홍국 천연색소의 생성능은 모 균주의 생성능인 3.12 unit(황색), 1.87 unit(오렌지), 1.77 unit(적색)에 비해 각각 9.33, 19.70, 27.64배 높은 29.10 unit(황색), 36.84 unit(오렌지), 48.92 unit(적색)로 가장 높은 수용성 홍국 천연색소의 생성능을 나타내었다.
The growth characteristics and production of color pigments by Monascus strains were investigated during liquid culture, and production of monacolin K in red mold rice was carried out by solid state fermentation. Four different Monascus ruber strains were cultured in potato dextrose yeast extract broth (PDYB) media at $25^{\circ}C$ for 15 days. The high producing strain for red pigment was not corresponded to the strain for yellow pigment. Production of red pigment was high in the strain causing the fast pH change in culture broth. Production of monacolin K in red mold rice by solid state fermentation was influenced by a combination of wet cell weight and spore density in inoculum by liquid culture. Most strains showed the high production of monacolin K in red mold rice, when submerged fermentation was carried out for 5 days as inoculum for solid state fermentation. These results suggest that submerged fermentation period of inoculum have an effect on the production of monacolin K in red mold rice by solid state fermentation, and monacolin K in red mold rice could be increased by controlling the condition of submerged fermentation for inoculum.
식품용 색소로 사용되고 있는 Monascus-pigment(홍국색소) 를 산업적으로 생산하기 위하여 공기, 토양등으로부터 균주를 순수분리하여 색소생산용 배지에서 $30^{\circ}C$로 5일 동안 액체배양한 결과 색소생산이 가장 높은 Monascus sp. KS 2 를 분리하였다. 이균주를 모균주로 하여 NTG로 돌연변이를 유발한 결과 6개의 돌연변이주를 얻었으며, 색소생산성을 비교한 결과 가장 강력한 색소생산성 돌연변이주인 Monascus sp. SUR 37 을 선별하였으며, 모균주에 비해 적색색소와 황색색소가 각각 2.4배, 1.6배 높았다. 색소생산의 최적배양 조건은 온도 $30^{\circ}C$, pH6.0, 탄소원으로는 rice powder 5%, 질소원으로는 monosodium glutamate 0.15%, 그리고 아미노산으로는 DL-threonine, 배양기간은 4일이 가장 효과적이었다.
홍국 색소의 액체배양에 의한 대량생산조건을 개발하기 위하여 Monascus sp. KM 1001 변이주를 대상으로 균체생산 및 색소생성에 미치는 최적배양조건을 비교 검토하였다. 실험균주의 색소생성을 위한 액체배지의 최적화학적 조성은 4% rice powder, 0.15% Bacto-peptone, 0.1% glycine, 0.01% $FeSO_{4}{\cdot}7H_{2}O,\;0.1%\;MgSO_{4}{\cdot}7H_{2}O,\;0.25%\;KH_{2}PO_{4},\;pH4.5$였다. 실험균주의 $2.0{\times}10^{6}\;spores/ml$의 포자현탁액을 액체배지 50 ml에 접종하여 배양온도 $30^{\circ}C$에서 150 rpm으로 5일간 배양하였을 때, 10.00 g/L의 균체생산과 세포외 황색색소 오렌지색소와 적색색소는 각각 3.25 unit, 1.59 unit, 0.88 unit를 생성하였으며, 세포내 황색색소 오렌지색소와 적색색소는 84.96 unit, 78.84 unit, 91.80 unit의 색소를 생산할 수 있었다.
The hyphal growth, production of color pigments and monacolin K by Monascus strains were investigated in liquid medium. Thirty five different strains were collected and cultured in potato dextrose yeast extract broth (PDYB), potato dextrose broth (PDB) and malt extract broth (MEB) medea at $25^{\circ}C$ for 7 days. The growth rates of most of strains were highest in PDYB medium. Growth rate as well as pigment production were influenced by suspension conditions of mycelia during liquid cultivation. Most of strains producing monacolin K corresponded to strains producing red pigment highly and showing more pH changes of liquid media. Monacolin K produced from strains was detected in culture broth as well as mycelia. Any citrinin was not detected in monacolin K producing strains. These results imply that the selection of the strains producing red pigment highly and showing more pH changes in liquid cultivation could be applied for primary screening of Monascus strains for preparation of red mold rice.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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