미꾸리(Misgurnus anguillicaudatus)의 호르텐스극구흡충 피낭유충 감염상황을 조사하였다. 전국 4개 지역(서울, 김해, 나주군 및 강진군)에서 총 154마리의 미꾸리를 구입하여 피낭유 감염률, 감염량 및 미꾸리 체내 기생부위를 조사한 바 그 결과는 다음과 같다. 1. 호르텐스극구흡충 피낭유충이 검출된 미꾸리는 총 64마리로 41.6%의 양성률을 보였고 마리당 1∼29개(평균 .1개)가 검출되었다. 가장 높은 피낭유충 양성률을 보인 지역은 전남 강진군이었다. 2. 피낭유충은 주로 미꾸리의 장관 말단부 및 장간막, 항문주위조직, 두부 및 아가미에서 검출되었고 근육 등에서는 전혀 검출되지 않았다. 이상의 결과로, 우리나라의 미꾸리는 호르텐스극구흡충의 중요한 제이중간숙주임이 판명되었으며 감염률 및 감염량도 비교적 높음을 알 수 있었다.
붕어(Carassius carassius), 가물치(Ophicephalus argus) 및 미꾸리(Misgurnus anguillicaudatus)의 혈색소상에 미치는 동과 염의 영향을 전분전기영동법으로 연구하였다. 1. 정상 붕어의 혈색소 band는 양극에 1개 있고, band의 수나 이동도가 동이나 염에 의하여 영향을 받지 않았다. 2. 정상 가물치의 혈색소 band는 양극 2개 있고, 이동도는 붕어와 미꾸리의 것보다 빨랐으며 동이나 염의 영향을 받지 않았다. 3 정상 미꾸리의 혈색소 band는 2개로서 양극과 음극에 1개씩 있었고, 기준선으로부터의 상대이동도는 서로 비슷하였다 미꾸리가 동에 처리된 경우 양극에 있는 band의 이동도는 대조군과 염처리군의 이동도보다 상당히 빨랐고, 한편 음극에 있는 혈색소 band는 동과 염의 영향을 받지 않았다. 이 연구를 지도하여 주신 숙명여자대학교 약학대학의 노일협박사님께 깊은 감사를 드린다.
무지개송어 (Oncorhynchus mykiss), 메기 (Silurus asotus) 그리고 미꾸리 (Misgurnus anguillicaudatus)의 성숙 난자의 방사대 (zona radiata) 및 난문의 미세구조적 특징을 광학, 주사 및 투과 전자현미경을 이용하여 조사하였다. 무지개송어와 메기의 난에 있는 난문은 깔대기 형태의 전정과 방사대를 통과하는 끝이 작아지는 통로로 구성되어 있었다. 무지개송어와 메기의 난문은 편평한 구멍과 긴 통로로 구성된 구조를 나타내었다. 메기 난문의 구조는 무지개송어 난문의 구조와 일치되었다. 무지개송어의 난문을 구성하는 내부 벽은 시계방향(우선형)의 구조를 나타내었다. 미꾸리의 난문은 짧은 통로를 지닌 얕은 구멍을 가진 형태를 나타내었고, 시계방향의 반대방향으로 난문의 벽은 방향성율 나타내었다. 미꾸리의 이러한 나선형의 방향은 무지개송어의 방향과 일치하지 않는 것으로 나타내었다. 개구부 바로 주변부에 있는 표면은 실험에 이용된 3가지 어류에서 모두 여러 가지 크기의 작은 구멍이 존재하였다. 상호 연결부위 (ridge)가 모든 어류의 미수정된 난자에서 관찰되었다. 본 논문에서는 난성숙시 난막과 난문의 형태를 알아보기 위해서 3가지 양식어종 난자의 표면형태와 난문의 미세구조를 상호 비교하였다.
미꾸라지 (Misgurnus mizolepis) 정자에 electroporation 처리를 통해 난과 인공수정시킨 후 수정율, 부화율, 초기 생존율 및 유전자 이식 효율을 조사하였다. pRSV/luc을 reporter유전자로 이용하여$0\~1$ 625 V/cm의 field strength와 $0\~1,000$${\mu}F$의 capacitance 범위의 electroporation을 시도한 결과, 실험군간에 수정율, 부화율, 초기 생존율에서 유의한 차이는 나타나지 않았다. 유전자 이식 효율을 PCR 분석으로 조사한 결과, $0\~20\%$로 나타났으며 elertroporation조건에 따라 큰 차이는 관찰할 수 없었다. 그러나 pMT/hGH의 경우, 대조군 및 처리군 모두에서 homology sequence에 의한 nonspecific amplication이 관찰됨으로서 PCR을 이용한 transgene의 검색이 불가능한 것으로 나타났다
미꾸라지 양식시 기본 요건인 종묘의 안정적 공급을 위하여 호르몬 처리에 의한 산란 유도와 연중 다산란 유도 가능성을 조사하였다. 미꾸라지는 어체중 g당 $2\~10$ IU 농도의 태반성 성선자극 호르몬(HCG) 1회 주사로 $23.1\~100{\%}$ 산란이 유발되었으며, 특히 6 IU/g의 농도 이상에서는 모든 실험어가 산란하였다. 호르몬 주사 후 산란까지 대개 $13\~25$시간이 소요되었고 HCG농도 증가에 따른 수정율, 부화율 및 위생식소 숙도지수의 변화는 관찰되지 않았다. 어체중 증가에 따라 포란수도 증가하여 어체중 g당 평균 약 $500\~600$의 난을 산란하는 것으로 나타났다. 다산란 유도를 위해 $25^{\circ}C$ 조건하에서 사육하면서 첫 산란 후 사육 일수에 따른 비만도, 간 숙도지수 및 생식소 숙도지수를 조사하고 이를 토대로 재산란을 유도한 결과 미꾸라지 암컷은 최초 산란 후 40 일이 경과하면 양질의 난을 재산란하는 것으로 나타났다.
E. coli의 \beta-galactosidase$ 유전자를 미꾸라지 수정난에 미세현미 주입하고 이를 분석함으로써 미꾸라지에 외래 유전자 이식을 위한 reporter 유전자로서의 유용성을 검토하였다 X-gal 염객분석, 4-methylumbelliferyl-$\beta$-D-galactoside (MUG) 분석을 수행한 결과 유전자 이식 처리군 및 대조군에서 모두 \beta-galactosidase$의 활성이 관찰되었으며 PCR, dot blot 및 southern blot분석결과 역시 유전자 이식 처리군과 대조군에서 모두 유사한 양상을 나타내었다. 처리군 및 대조군의 PCR product의 염기서열은 E. coli의 \beta-galactosidase$ 유전자와 매우 높은 homology를 갖고 있었으며 pH에 따른 X-gal 염색 분석을 수행한 결과 미꾸라지에 관찰되는 본 효소는 pH 4.5에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 따라서 앞으로 미꾸라지를 대상으로 한 외래 유전자 이식시 E. coli의 \beta-galactosidase$ 유전자의 reporter 유전자로서의 사용은 신중한 재검토가 이루어져야만 할 것으로 판단된다.
물고기에서 효과적인 발현 vector의 구성을 위해, 미꾸라지 MAR로부터 ARS를 cloning하여, 그 염기서열을 분석하였다. 총 443 염기들로 구성된 미꾸라지의 ARS는 다른 여러종들의 DNA 복제원점에서 나타나는 것 처럼, AT가 풍부하고, ARS consensus sequences, topoi-somerase II consensus sequences, 그리고 A 흑은 T-box등을 포함하고 있다. 그리고 그 DNA 단편은 복제원점에서 일반적인 양상으로 나타나는 반복적인 inverted sequence들을 가지고 있고, 5개의 가능한 hairpin loop 구조들을 내포하고 있다. 이들 구조는 DNA 복제개시에 관여하는 단백질들의 인지부위로 작용할 것으로 생각된다.
인공수정으로 부화시킨 미꾸리자어에 대한 합성세제(LAS)의 급성독성 영향을 실험하고 그 결과를 생물검정법에 의하여 조사하였다. 1. LAS의 영향을 시간에 대하여 각 농도별로 보면 6ppm이 120시간, 18 ppm이 96시간, 30 ppm이 48시간, 그리고 38 ppm이 16시간만에 $100\%$의 폐사율 가져왔다. 2. 반수치사농도 ($LC_{50}$)는 48hr-$LC_{50}$이 12.59ppm, 96 hr-$LC_{50}$은 4.00 ppm, 120 hr-$LC_{50}$은 1.02 ppm이었다. 3. 급성독성에 대한 영향한계농도는 $0.37{\sim}0.43ppm$이고 적용계수는 $0.093{\sim}0.108$로 나타났다. 4. 합성세제의 각 농도에 대한 반수치사를 가져오는 시간($LT_{50}$)은 0.2 ppm이 165.1시간, 2ppm은 106.2시간으로 나타난 반면 8 ppm은 60.3시간으로 낮아져 38ppm의 경우는 23.5시간이었다.
Lee, Jang Wook;Kim, Jung Eun;Goo, In Bon;Hwang, Ju-Ae;Im, Jea Hyun;Choi, Hye-Sung;Lee, Jeong-Ho
한국발생생물학회지:발생과생식
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제19권4호
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pp.181-187
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2015
Early life stage mortality in fish is one of the problems faced by loach aquaculture. However, our understanding of immune system in early life stage fish is still incomplete, and the information available is restricted to a few fish species. In the present work, we investigated the expression of immune-related transcripts in loach during early development. In fishes, recombination-activating gene 1 (RAG-1) and sacsin (SACS) have been considered as immunological function. In this study, the expression of the both genes was assessed throughout the early developmental stages of loach using real-time PCR method. maRAG-1 mRNA was first detected in 0 dph, observed the increased mostly until 40 dph. Significant expression of maRAG-1 was detected in 0 to 40 dph. These patterns of expression may suggest that the loach start to develop its function after hatching. On the other hand, maSACS was detected in unfertilized oocyte to molura stages and 0 to 40 dph. maSACS mRNA transcripts were detected in unfertilized oocytes, suggesting that they are maternally transferred.
미꾸리과 어류의 6속 12종의 정자에 대하여 전자현미경으로 조사한 결과, 미꾸리과 어류의 정자는 첨체가 없고 머리(핵)와 짧은 중편, 그리고 하나의 꼬리로 구성되어 있으며, 수중으로 배정되는 무첨체 수중형의 정자형태(anacrosomal aquasperm)을 보였다. 그러나 Nemacheilus toni는 발생도중에 핵에 침체의 흔적적인 acrosomal vesicle이 존재하였으며, N. toni의 정자의 핵은 방추형이었으나 나머지 미꾸리과 어류는 거의 원형이었다. 정자의 중편의 길이는 $3{\mu}m$ 이하로 ring모양의 미토콘드리아가 5-8개 존재하였다. 짧은 중편(0.7-2.0${\mu}m$)의 Cobitis, Iksookimia, Niwaella, Nemacheilus, 그리고 비교적 긴 중편(2.0-2.7${\mu}m$)의 Misgurnus속과 Lefua속으로 구분되었다. 편모는 전형적인 9+2구조를 보였으며, 돌기물(fin)이 존재하지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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