• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제51권6호
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• pp.292-295
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• 2008

Three kinds of oligosaccharides were obtained from the hydrolysate of brown copra meal galactomannan by a purified extracellular ${\beta}$-mannanase from Trichoderma sp. These oligosaccharides were identified as Man-Man, ${Gal^2}{Man_3}(6^2 mono-O-{\alpha}-D-galactopyranosyl-4-O-{\beta}-D-mannotriose)$, and ${Gal^2}{Man_6}(6^2-mono-O-{\alpha}-D-galactopyranosyl-4-O-{\beta}-D-mannohexaose)$, where Gal- and Man-represent ${\alpha}$-1,6-D-galactosidic and ${\beta}$-1,4-mannosidic linkages, respectively. The mode of action of ${\beta}$-mannanase on brown copra meal galactomannan is described on the basis of the structure of these oligosaccharides.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제2권3호
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• pp.204-208
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• 1992

Six kinds of oligosaccharides were obtained from the hydrolysate of copra galactomannan by a purified extracellular $beta$-mannanase from Penicillium purpurogenum. These oligosaccharides were identified as M-M, M-M-M, M-M, M-M-M-M, M-M-M-M-M and M-M-M-M-M-M; where G- and M- represent $\alpha$-l,6-D-galactosidic and $beta$-l,4-mannosidic linkages, respectively. The mode of action of mannanase on galactomannan is discussed on the basis of the structure of these oligosaccharides.

• 한국식품영양과학회지
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• 제32권4호
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• pp.562-566
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• 2003

DEAE Sepahcel ion exchange chromatography(2.5$\times$42cm)에 의해 Bacillus sp. 유래 $\beta$-Mannanase정제를 수행하였다. 정제효소의 비활성은 17.41 units/mg로서 정제배율은 84.74배를 나타내었다. Carbon column chromatography를 이용하여 0~50%의 ethanol gradient법으로 xanthan gum의 가수분해물을 분리한 결과 fraction number 40~45 및 50~60사이에서 broad한 2개 peak의 가수분해물 pattern을 나타내었다. 가수분해물의 분리도를 확인하기 위하여 TLC를 수행한 결과 fraction No. 40~44에서는 Rf value상 중합도 5에 해당하는 가수분해물이 주축을 이루고 있는 반면 fraction No.50~55에서는 중합도 7의 가수분해물이 주축을 이루고 있음을 확인할 수 있었다. 중합도별 가수분해물의 분리도를 높이기 위해 2차 Sephadex G-25 column chromatography를 수행한 결과 fraction No. 12~15에서 중합도 7의 올리고당과 fraction No. 77~80에서 중합도 5의 가수분해물을 분리 할 수 있었고, 가수분해물의 분리도를 확인하기 위해 2차 TLC를 수행 한 결과 fraction No. 12~15에서는 중합도 7이 주축을 이루고 있으나 일부 소량의 고중합도 가수분해물이 공존하고 있는 것으로 사료되며, fraction No. 77~80에서는 분리능이 높게 중합도 5의 가수분해물이 분리되었다. 이와 같이 분리된 2개의 fractions은 FACE법에 의해 Homo type가수분해물로 동정되었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제30권10호
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• pp.1450-1455
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• 2017

Objective: The objective of this experiment was to investigate the effect of dietary ${\beta}-mannanase$ on productive performance, egg quality, and utilization of dietary energy and nutrients in aged laying hens raised under hot climatic conditions. Methods: A total of 320 84-wk-old Hy-line Brown aged laying hens were allotted to one of four treatments with eight replicates in a completely randomized design. Two dietary treatments with high energy (HE; 2,800 kcal/kg nitrogen-corrected apparent metabolizable energy [$AME_n$]) and low energy (LE; 2,700 kcal/kg $AME_n$) were formulated. Two additional diets were prepared by adding 0.04% (MN4) or 0.08% ${\beta}-mannanase$ (MN8) to LE treatment diets. The feeding trial was conducted for 28 d, covering a period from July to August in South Korea. The average daily room temperature and relative humidity were $29.2^{\circ}C$ and 83%, respectively. Results: Productive performance, egg quality, and cloacal temperature were not influenced by dietary treatments. The measured $AME_n$ values for MN8 diets were similar to those for HE diets, which were greater (p<0.05) than those for LE and MN4 diets. However, the $AME_n$ values for MN8 diets did not differ from those for LE and MN4 diets. Conclusion: The addition of ${\beta}-mannanase$ to low energy diets increases energy values for diets fed to aged laying hens. However, this increase has little positive impacts on performance and egg quality. These results indicate that dietary ${\beta}-mannanase$ does not mitigate the heat stress of aged laying hens raised under hot climatic conditions.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권4호
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• pp.431-439
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• 2014

We report the construction of two Bacillus subtilis expression vectors, pBNS1/pBNS2. Both vectors are based on the strong promoter P43 and the ampicillin resistance gene expression cassette. Additionally, a fragment with the Shine-Dalgarno sequence and a multiple cloning site (BamHI, SalI, SacI, XhoI, PstI, SphI) were inserted. The coding region for the amyQ (encoding an amylase) signal peptide was fused to the promoter P43 of pBNS1 to construct the secreted expression vector pBNS2. The applicability of vectors was tested by first generating the expression vectors pBNS1-GFP/pBNS2-GFP and then detecting for green fluorescent protein gene expression. Next, the mannanase gene from B. pumilus Nsic-2 was fused to vector pBNS2 and we measured the mannanase activity in the supernatant. The mannanase total enzyme activity was 8.65 U/ml, which was 6 times higher than that of the parent strain. Our work provides a feasible way to achieve an effective transformation system for gene expression in B. subtilis and is the first report to achieve B. pumilus mannanase secretory expression in B. subtilis.

• Animal Bioscience
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• 제34권12호
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• pp.1974-1980
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• 2021

Objective: The objective of this study was to estimate standardized ileal digestibility (SID) of amino acids (AA) in growing pigs fed diets containing increasing levels of copra meal (CM) with β-mannanase supplementation. Methods: Twenty barrows (initial body weight: 34.43±0.11 kg) surgically fitted with T-cannulas at the distal ileum were individually housed in metabolism crates. Pigs were allotted to 5 dietary treatments in a completely randomized design with 4 replicates per treatment. The dietary treatments were: i) NC, negative control, corn-soybean meal (SBM) based diet, ii) PC, positive control, basal diet + 0.10% β-mannanase supplementation (800 IU/kg), iii) CM6, PC diet with 6% CM supplementation, iv) CM12, PC diet with 12% CM supplementation, and v) CM18, PC diet with 18% CM supplementation. A nitrogen-free diet was used to estimate basal endogenous losses of AA for SID calculation. All experimental diets contained 0.5% chromic oxide as an indigestible marker. Each period consisted of a 4-d diet adaptation period and a 3-d ileal digesta collection period. Results: There were no differences in apparent ileal digestibility (AID) and SID of all AA between the NC and PC treatments except that the PC treatment had lower AID and SID of glycine than the NC treatment (p<0.05). There were linear decreases in AID and SID of lysine (p<0.05) and aspartic acid (p = 0.06; tendency) with increasing levels of CM in the diets with β-mannanase. Conclusion: The β-mannanase supplementation had no effect on AA digestibility in pigs fed the corn-SBM based diet but increasing levels of CM reduced SID of lysine and aspartic acid.

• Applied Biological Chemistry
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• 제48권4호
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• pp.364-369
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• 2005

Trichoderma harzianum이 생산하는 ${\beta}-mannanase$의 최적 사면배지조성은 2.0% malt extract, 2.0% glucose, 0.1% peptone, 2.0% agar로, 효소생산 배지조성은 3.0% cellulose, 3.0% C.S.L, 1% $KH_2PO_4$, 0.2% $(NH_4){_2}SO_4$로 결정되어 $28^{\circ}C$, 130 rpm, 진탕배양법으로 조효소액을 생산하였다. ${\beta}-mannanase$의 최적 pH와 최적온도는 pH 4.5, $60^{\circ}C$에서 최대 상대활성을 나타내었다. Locust bean gum에 대한 효소적 가수분해 pattern을 TLC에 의해 검토한 결과 반응초기부터 반응말기까지 주요 생성물은 단당류, 중합도 4와 7의 올리고당으로 확인되었다. 중합도별 올리고당을 조제하기 위하여 activated carbon column chromatography에 250 ml/hr유속으로 tube당 20 ml씩 ethanol $0{\sim}50%$의 gradient법으로 분리 회수하였고, 분리된 각각의 올리고당 중 중합도4는 TLC $R_f$ value상으로 ${\beta}-1,4-mannotetraose$로, 중합도 7은 Methylation method에 의해 M-M-M-M-M 구조로 //G-G 동정되었다. (G-와 M-은 각각 ${\alpha}-1,6-D-galactosidic,\;{\beta}-1,4-mannosidic$ 결합을 나타냄). Bifidobacterium longum에 대한 생육활성을 기존의 MRS media와 탄소원으로 중합도 4와 7의 올리고당으로 대체하였을때 3.4배, 4.3배의 생육활성이 증가하였고, Bifidobacterium bifidum에 대해서는 1.2배, 1.1배의 낮은 활성을 나타내었다.

• 생명과학회지
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• 제19권12호
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• pp.1724-1730
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• 2009

진주산업대학교 농장에서 사육되고 있는 말에서 채취한 분변으로부터 mannanase 생성능이 우수한 균주를 분리하였으며 이를 CS47이라 명명하였다. 통성혐기성인 분리균 CS47의 최적 생육온도는 $38^{\circ}C$였으며 $20^{\circ}C$에서부터 $50^{\circ}C$까지 다양한 온도범위에서도 생육이 가능한 것으로 확인되었다. BIOLOG를 이용하여 분리균 CS47의 생화학적 특징을 분석한 결과, 분리균은 Bacillus amyloliquefaciens 균주와 유사한 특성을 나타내었으며 DNA G+C함량 (44mol%)도 B. amyloliquefaciens 균주의 범위(43.5-44.9)에 속하였다. 16S rDNA 염기서열을 분석한 결과에서도 분리균은 B. amyloliquefaciens FZB42 균주와 가장 높은 상동성을 나타내었으며 Bacillus속의 다른 균주들과는 93-98%의 상동성을 나타내었다. 그러나 분리균의 세포벽을 이루고 있는 주요 지방산[anteiso-15:0 (39.6%), 17:0 (7.6%), iso-15:0(37.8%)]은 Bacillus subtilis 균주와 유사한 특성을 나타내었다. 최종적으로 생화학적 특성과 16S rDNA 염기서열분석 결과를 근거로 하여 분리균 CS47은 Bacillus amyloliquefaciens CS47로 동정되었다. B. amyloliquefaciens CS47 균주가 분비하는 mannanase는 $50^{\circ}C$, pH 6.0에서 가장 높은 활성을 보였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제51권3호
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• pp.159-163
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• 2008

Sephadex G-100 column chromatography에 의해 Xylogone sphaerospora 유래 ${\beta}$-mannanase의 정제를 수행하여 비활성 8.44 units/ml, 정제배율 56.27을 나타내었다. SDS-PAGE에 의한 단일밴드를 확인하였고, 분자량은 42kDa으로 결정되었다. 정제효소에 의해 konjac glucomannan을 가수분해하여 activated carbon column chromatograph)에 의해 당가수분해물을 분리 회수하여 TLC에 의해 주요 당가수분해물은 합도 3과 4의 hetero type으로 확인되었으며 D.P. 3과 4의 예상되는 구조는 본 연구실에서 확보하고 있는 standard glucomannooligosaccharides에 의한 TLC에서 나타나는 Rf value 상으로 1차적으로 확인하고, Aspergillus niger 5-16 유래 정제 ${\beta}$-mannanase를 단계적으로 처리하여 가수분해 pattern을 TLC로 해석한 결과 D.P. 3의 구조식은 비환원말단 mannose로 부터 2번째에 1분자의 glucose가 결합하고 있는 hetero type의 구조(M-G-M)로, D.P. 4의 구조식은 비환원말단 mannose로부터 3번째에 1분자의 glucose가 결합하고 있는 hetero type의 구조(M-M-G-M)로 예상하고 있다. B. longumm, B. bifidum, B. infantis, B. adolescentis, B. animalis, B. auglutum, B. breve의 생육활성에 대한 중합도 3과4의 영향을 검토하기 위하여 modified-MRS 배지 상에 탄소원으로 중합도 3과 4를 대체하여 생육활성을 비교한 결과 B. longum에서는 D.P 4 glucomannooligosaccharide를 탄소원으로 대체한 경우 표준 MRS배지와 비교하여 3.9배의, D.P. 3을 처리한 경우에도 2.7배의 상대 활성을 나타내어 가장 우수한 생육활성을 나타냈었으며, B. breve의 경우에서도 D.P 4에서 2.47배, D.P 3에서 2.08배의 활성을 나타내었으며 B. bifidum에 있어서는 D.P. 4의 경우 2.8배의 상대활성을 나타내었다. Bifidobacterium 7균주 모두에 대해서 중합도 4의 올리고당이 중합도 3의 올리고당보다 생육활성에 크게 기여하는 것으로 나타났다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제7권
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• pp.1-13
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• 1966

(1) 콩과 식물인 guar (Cyamopsis tetragonolobus)의 발아종자(發芽種子)에서 세 가지의 다른 다당류가수분해효소(多糖類加水分解酵素)인 ${\beta}-1$, 4-mannanase A,B,C 를 추출(抽出), 유안염석(硫安鹽析), 이온교환(交換)크로마토그래휘 및 젤여과법(濾過法)에 의하여 분리(分離), 정제(精製)하였다. (2) 이들 효소(酵素)는 작용최적(作用最適) pH, 급속이온의 영향, 분자량(分子量), ior nut mannan A에 대한 Michaelis 항수(恒數), 가수분해(加水分解)의 한도(限度) 및 생성물등(生成物等) 여러 가지 점(點)에서 다르다. (3) ${\beta}-1$, 4-Mannanase A 와 C 는 기질(基質)인 ${\beta}-1$, 4-mannanase 에 random으로 작용(作用)하여 과당류(寡糖類)를 생성(生成)하는 endo형(型) 효소(酵素)임이 밝혀졌다. 한편 ${\beta}-1$, 4-mannanase B 는 같은 기질(基質)의 비환원말단기(非還元末端基)로 부터 수차로 작용(作用)하여 단당류(單糖類)를 생성(生成)하는 exo형(型) 효소(酵素)로 추리(推理)된다. (4) Guar 종자중(種子中)의 galactomannan 인 guaran에 이들 정제효소(精製酵素)를 작용(作用)시킨 결과(結果)로부터 기질(基質)의 구조(構造) 및 guar 종자(種子)의 발아중(發芽中)에 가지는 역할(役割)과 관련시켜 논의(論議)하였다.