6-Methoxydihydrosanguinarine (6ME), a benzophenanthridine alkaloid derived from the methanol extracts of Hylomecon hylomeconoides, showed a dose-dependent effect at 1-10 ${\mu}M$ on causing apoptotic cell death in HT29 colon carcinoma cells $(IC_{50} = 5.0{\pm}0.2 {\mu}M)$. Treatment of HT-29 cells with 6ME resulted in the formation of internucleosomal DNA fragmentation. Treatment of the cells with 6ME caused activation of caspase-3, -8 and 9 protease and subsequent proteolytic cleavage of poly(ADP-ribose)polymerase. 6ME increased the expression of p53 and Bax and decreased the expression of Bid. These results indicate that p53 and proapoptotic Bcl-2 family proteins might participate in the antiproliferative activity of 6ME in HT29 cells.
이질아메바에 의한 장염 환자의 조직 또는 이질아메바를 실험적으로 감염시킨 동물의 조직 검사에서 호중구의 침윤이 특징적으로 관찰된다. 그러나 이와같은 호중구의 침윤을 설명할 수 있는 기전에 대한 연구는 매우 미흡하다. 따라서 본 연구자들은 아메바 감염 초기에 인체 대장상피 세포에서 interleukin-8(IL-8)이 유도되어 호중구 침윤과 같은 염증반응이 유발될 것이라는 가설을 설정하였다. 이를 위하여 인체 대장상피세포주인 HT-29에 이질아메바 영양형을 실험적으로 노출시킨 뒤 발현되는 IL-S mRNA를 역전사 중합효소법(reverse transcriptional polymerase chain reaction, RT-PCR)으로 검사함과 퐁시에 발현된 IL-8 mRNA를 인공적으로 합성시킨 표준 RNA와 RT-PCR법을 이용하여 정량하였다. 실험 결과 이질아메바 영양형에 노출된 30분 후 부터 IL-8 mRAN가 발현되기 시작하였다 그리고 그 발현 분자수는 노출 시간의 증가에 따라 계속 증가하여 3시간 대에는 $3.1{\;}{\times}{\;}10^7{\;}molecules/\mu\textrm{g}$ total RNA를 나타내었다. 동시에 IL-8 mRNA의 발현은 노출시킨 이질아메바 영양형의 수에 비례하였다. 즉 HT-29/아메바 영양형의 비율이 10:1인 경우 IL-8 mRNA의 발현 분자수는 $1.2{\;}{\times}{\;}10^7{\;}molecules/\mu\textrm{g}$ total RNA로 나타났다. 이와같은 IL-8 mRNA의 발현은 IL-8 단백질 분비로 이어짐을 ELISA 검사로 확인할 수 있었다. 한편 이질아메바 파쇄액(Iysate)도 대장상피세포군인 Caco-2에서 IL-8 mRNA발현을 유도하였다. 결론적으로 본 실험은 이질아메바 감염 초기에 대장상피세포로 부터 IL-8이 발현되며, 이에 의하여 염증반응이 촉발될 가능성이 있음을 시사해 준다.
Intestinal absorption of dietary taurine is one of the regulatory component maintaining taurine homeostasis along with renal reabsorption, bile acid conjugation and secretion, and de nobo synthesis of taurine in mammals. Recent observations of decreased enterocytic levels of taurine in response to trauma, infection and surgical insults, postulate the possibility that intestinal taurine absorption might be impaired in such stressed conditions. The aim of the present study was to evaluate changes in enterocytic taurine transporter activity using the human intestinal colon carcinoma cell line, HT-29, in various stress-induced conditions. Pretreatment of the HT-29 cells with dexamethasone, a stress hormone(0.1,1,10 or 100$\mu$M) for 3 hrs, or with E coli heat-stable enterotoxin(10, 100, or 200nM) for 30 minutes in order to induce the condition of enterotoxigenic infection did not influence taurine uptake as compared to the value found in control cells. In contrast, pretreatment of the cells with cholera toxin(10, 100, 500, or 1000ng/ml)for 3hr or 24hr significantly decreased taurine uptake by HT-29 cells to 40~50% of the value found in untreated control cells. Kinetic studies of the taurine transporter activity were conducted in control and cholera toxin treated HT-29 cells with varying taurine concentrations(2~60$\mu$M) in the uptake medium. Pretreatment of the cells with cholera toxin(100ng/ml) for 3hr did not influence the Vmax, but resulted in a 55% increase in the Michaelis-Menten constant(Km) of the taurine transporter compared to those in control cells. These results suggest that cholera toxin-induced reduction in taurine transporter activity in HT-29 cells is associated with decreased affinity of the taurine transporter without altering the amount of transporter protein. Intestinal taurine absorption appears to be reduced in the condition of water-borne diseases caused by bacteria such as V. cholerae. This might influence the taurine status of infants and young children more readily, an age group in which the prevalence of intestinal infection is high and the role of intestinal absorption is crucial for maintaining the body taurine pool. (Korean J Nutrition 34(2) : 150-157, 2001)
Fibronectin fragments found in the synovial fluid of patients with osteoarthritis (OA) induce the catabolic responses in cartilage. Nuclear high-mobility group protein Box 1 (HMGB1), a damage-associated molecular pattern, is responsible for the regulation of signaling pathways related to cell death and survival in response to various stimuli. In this study, we investigated whether changes induced by 29-kDa amino-terminal fibronectin fragment (29-kDa FN-f) in HMGB1 expression influences the pathogenesis of OA via an HMGB1-modulated autophagy signaling pathway. Human articular chondrocytes were enzymatically isolated from articular cartilage. The level of mRNA was measured by quantitative real-time PCR. The expression of proteins was examined by western blot analysis, immnunofluorescence assay, and enzyme-linked immunosorbent assay. Interaction of proteins was evaluated by immunoprecipitation. The HMGB1 level was significantly lower in human OA cartilage than in normal cartilage. Although 29-kDa FN-f significantly reduced the HMGB1 expression at the mRNA and protein levels 6 h after treatment, the cytoplasmic level of HMGB1 was increased in chondrocytes treated with 29-kDa FN-f, which significantly inhibited the interaction of HMGB1 with Beclin-1, increased the interaction of Bcl-2 with Beclin-1, and decreased the levels of Beclin-1 and phosphorylated Bcl-2. In addition, the level of microtubule-associated protein 1 light chain 3-II, an autophagy marker, was down-regulated in chondrocytes treated with 29-kDa FN-f, whereas the effect was antagonized by mTOR knockdown. Furthermore, prolonged treatment with 29-kDa FN-f significantly increased the release of HMGB1 into the culture medium. These results demonstrated that 29-kDa FN-f inhibits chondrocyte autophagy by modulating the HMGB1 signaling pathway.
본 연구에서는 최근 식생활의 서구화로 인해 발병률이 급증하고 있는 대장암의 진행을 억제하거나 감소시키고 인체 대장암 세포인 HT-29의 증식을 억제하며, 세포사멸을 유도하는 천연소재를 알아보기 위해서 flavonoid가 HT-29 인체 대장암 세포의 apoptosis 유도 및 기전에 미치는 영향을 알아보았다. MTT assay 결과 apigenin, rutin, naringenin, myricetin을 $100{\mu}M$ 농도로 처리하였을 때 62.71, 75.78, 74.24, 77.61%로 이 중 naringenin이 대장암 세포 성장에 억제 효과가 가장 높은 실험 결과를 나타내었다. Caspase-3 activity에서는 naringenin이 241.46%로 가장 높은 활성을 나타내었다. 이를 바탕으로 세포사멸과 관련된 유전자를 확인하고자 대장암 세포에 flavonoid인 apigenin, rutin, naringenin, myricetin에 $100{\mu}M$ 농도로 처리한 후 RTPCR을 실시한 결과, 세포사멸의 주요한 조절인자인 Bcl-2 family 단백질 중 Bcl-2는 rutin에 의해 감소되었고 Bax는 myricetin에 의해 증가하였으며, p53은 naringenin이 높게 발현되었다. 또한 western blotting을 통해 flavonoid인 apigenin, rutin, naringenin, myricetin에 $100{\mu}M$ 농도로 처리한 결과, Bcl-2 family 단백질과 더불어 세포사멸 조절에 중요한 역할을 하는 활성형인 cleaved caspase-3은 모두 증가하였고, 그중 myricetin이, PARP은 naringenin, E-cadherin은 rutin이 각각 높은 발현 양상을 나타내었다. 이번 실험 결과를 통해 flavonoid가 세포사멸의 주요한 조절 인자인 Bcl-2 family 단백질의 발현이나 caspase의 활성 등을 조절하여 암세포 사멸인자인 Bcl-2의 발현은 감소시키고 Bax, p53, PARP의 발현을 증가시키는 것을 통해 대장암 세포의 apoptosis를 유도하였다. 또한 암세포의 전이와 관련된 E-cadherin의 발현도 조절하는 것을 관찰하였다. 이상의 연구를 통해 flavonoid가 대장암 세포의 증식을 억제하는 효과가 있음을 확인하였으며, 세포사멸과 관련된 기전을 규명하였다. 이를 기초자료로 일상에서 쉽게 섭취할 수 있는 식품에 많이 존재하며 비교적 독성과 부작용이 적은 flavonoid를 이용한 천연 항암제 개발 가능성을 제시하였고, 추후 대장암의 암예방제 및 암치료제로 개발될 수 있도록 추가 연구 수행이 필요할 것으로 사료된다.
미세조류 Arthrospira platensis (A. platensis)는 탄수화물, 지질, 단백질, 파이토케미컬 등을 함유하고 있어 경제적으로 가치가 있으며, 바이오디젤이나 기능성 식품 생산에 중요한 자원이다. 균주 개량을 위해 A. platensis에 240 kGy의 선량으로 전자빔을 조사하여 무작위적 돌연변이를 유도하였다. 여러 변이주를 획득하였고, 스크리닝을 거쳐 지질 함량이 높은 변이주, EB29를 선별하였다. EB29의 세포 생장은 야생균주와 유사하였고, 클로로필 함량도 큰 차이를 보이지 않았다. 하지만, nile red로 염색하여 형광 강도로 측정했을 때, EB29의 지질 함량은 야생균주에 비해 7배 증가하였다. 표준 지질 triolein의 표준곡선을 이용한 지질의 반정량 결과, EB29는 $78.6{\mu}g/mL$로 야생균주($41.4{\mu}g/mL$)보다 약 2배 증가하였다. EB29의 지방산 성분도 분석하였는데, gamma-linolenic acid (GLA)와 같은 PUFA가 약 6배 증가하였고 바이오디젤의 질에 영향을 미치는 지방산들도 야생균주에 비해 증가하였다. 따라서 전자빔은 미세조류의 세포 내 PUFA를 축적시키거나, 바이오디젤에 적합한 지방산 성분을 변화시키는데 유용하게 사용될 수 있을 것이다.
Increase in the utilization rate of recycled paper has significantly increased the problem associated with stickies. Despite the effort to eliminate contaminants from recycled furnishes, stickies are still the most serious obstacle in using recycled paper. The amount of micro stickies that are too small to be eliminated by screening, tends to increase significantly as the closure level of white water system is increased and the quality of raw material deteriorates. To establish a process efficient in removing micro stickies is strongly required. In this study, the surface characteristic of micro stickies was investigated with contact angle measurement. Surface energies of MCC, PSA film and model micro stickies were 53.37 mN/m, 29.75mN/m, and 29.63mN/m, respectively. This indicates that the surface characteristic of MMS is very similar to PSA. Thus, solvent coating of PSA and evaporation of the solvent provided excellent model micro stickies for flotation experiment.
In this paper, we study two types 1-lightlike submanifolds M, so called lightlike hypersurface and half lightlike submanifold, of an indefinite Kaehler manifold $\bar{M}$ admitting non-metric ${\pi}$-connection. We prove that there exist no such two types 1-lightlike submanifolds of an indefinite Kaehler manifold $\bar{M}$ admitting non-metric ${\pi}$-connections.
Multi-server queueing systems with retrials are widely used to model problems in a call center. We present an explicit formula for an approximation of the queue length distribution in a multi-server retrial queue, by using the Lerch transcendent. Accuracy of our approximation is shown in the numerical examples.
The refinement of an inequality provides better convergence of one quantity towards the other one. We have established the refinements of Hadamard inequalities for Riemann-Liouville fractional integrals via strongly (α, m)-convex functions. In particular, we obtain two refinements of the classical Hadamard inequality. By using some known integral identities we also give refinements of error bounds of some fractional Hadamard inequalities.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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