클로람페니콜은 광벙위 항생물질로서 수의축산분야에서 널리 사용되어 왔으나 이 제제의 잠재적인 독성과 축산식풍 중 잔류성 때문에 세계 각국에서는 식용동물에서의 사용을 금지하고 있다. 따라서 이 시험에서는 미생물학척 방법에 의한 우유 및 식육 중 미량의 잔류클로람페니콜을 측정할 수 있는 방법을 확립하고자 M. luteus ATCC 9341을 시험용 균주로 설정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 검출감도를 향상시키고자 시험명판용 Mueller-Hinton 배지의 배지량을 최소화하고 ethylacetate로 추출 농축하여 ml당 0.15/lg의 옥시테트라사이클린을 첨가한 회석용 인산염 완충액 (pH 6.0) 으로 잔류물을 용해하여 사용하였을 때 가기장 좋은 검출강도를 나타내였다. 2. 시료별 최저검출농도는 원유가 0.025 ppm이었으며, 식육은 0.05 ppm까지 검출할 수 있었다. 3. 시료별 평균 회수율은 원유가 68.5%이었으며, 쇠고기, 돼지고기 및 닭고기는 각각 65.1%. 63.8% 및 59.4%이었다. 이들 시료의 회수율에 대한 변이계수 (CV)는 1.8~15.1%이었다.
어류조직내에 잔류하는 항균물질을 미생물학적 방법인 disk assay를 이용하여 항균물질의 계열별로 확인이 가능한지를 검토하였다. 본 검사법에 사용한 균주는 Bacillus subtilis BGA, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus cereus var, mycoides ATCC 11778 이었다. 본 검사법에는 보다 간편한 clean-up 전처리 조작을 실시하였다. 즉, 피검시료(10g)는 Mcilvaine 완충액으로 마쇄하여 수용액충을 추출하고, 이 수용액층을 핵산에 의해 탈지시킨 후, 클로르포름 및 Sep-Pak $C_{18}$ 카트리지를 이용하여 분획액 2종류(fraction A 및 B)를 추출하였다. 그리고 이들 분획액은 각각 disk assay에 사용하였다. 분획액 A인 클로르포름 용액층은 마크로라이드(ML)계, 설파(SA)계, 클로람페니콜(CP)계 및 퀴놀른(QN)계의 확인시험에 제공되었고, 분획액 B인 Sep-Pak $C_{18}$에 흡착된 물질은 페니실린(PC)계, 테트라사이클린(TC)계 및 니트로푸란(NF)계의 확인시험에 제공되었다. 본 검사법에 의한 항균물질의 검출 최저농도는 oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, spiramycin 및 ciprofloxacin이 $0.1{\mu}g$/g, erythromycin과 ampicillin이 $0.025{\mu}$/g, sodium nifurstyrenate와 florfenicol이 $1.0{\mu}g$/g, sulfamonomethoxine과 sulfadimethoxine이 $0.25{\mu}g$/g, oxolinic acid와 flumequine이 $2.5{\mu}g$/g, piromidic acid는 $15{\mu}g$/g이었다. TC계 및 NF계에 대해서는 B. cereus>B. subtilis>M. luteus, ML계 및 PC계에 대해서는 M. lureus>B. subtilis>B. cereus, CP계 및 QN계에 대해서는 B.cereus=B. subtilis>M. luteus, SA계에 대하여는 B. subtilis>B. cereus=M. luteus로 항균물질의 계열에 따라 서로 다른 감수성 유형을 나타내었다. 따라서 본 미생물학적 검사법은 어류 조직내에 잔류하는 항균물질의 계열을 스크리닝하는 일상 검사법으로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
식품 내의 잔류 항생물질의 검사는 주로 미생물의 생육 억제 여부를 통한 생물학적인 분석을 이용한다. 이러한 방법은 여러 가지 계열의 항생제들에 대한 미생물의 민감성을 토대로 이용되고 있다. 그러나 현재 사용하고 있는 미생물들로는 동물용의약품으로 허가되어 식용동물에 사용되고 있는 점점 다양해지는 항생제 및 합성항균제를 식품에서 모두 검출할 수는 없다는 한계가 있다. 그러므로 본 연구는 검출 가능한 항생제 및 합성항균제 계열의 범위를 확대하고, 각 약품별 감도를 증진시키기 위한 새로운 방법들을 조사하였다. B. megaterium ATCC 9885, B. subtilis ATCC 6633, B. cereus ATCC l1778 and Geobacillus stearothermophilus (B. stearothermophilus) ATCC 10149를 사용한 검사의 민감성은 macrolides, quinolones와 monensin, chloramphenicol에 대한 검출 감도가 낮았다. 반면에 M. luteus(K. rhizophila) ATCC 9341는 macrolides에 대한 높은 검출 감도를 나타냈고, E. coli ATCC l1303는 quinolones와 aminoglycosides에 대한 높은 민감성을 나타냈다. 결론적으로, 두 균주의 추가로 검출가능한 항생제 및 합성항균제의 범위를 확대하였으며, 검출감도를 높일 수 있게 되었다.
실험에는 Bacillus subtilis BGA, Bacillus cereus var. mycoides ATCC 11778, Micrococcus luteus ATCC 9341을 상법에 따라 제작하여 muller hinton agar(Difco)에 각각 접종한 뒤, 3가지 조건의 pH가 조정된 검사용 평판배지(plate)인 B. subtilis(pH 6.0), B. cereus(pH 6.0), B. subtilis(pH7.2), B. subtilis(pH 8.0), M. luteus(pH 8.0)의 EEC 4-plate변법을 이용하였다. 넙치에 옥시테트라싸이클린(OTC)을 농도 100 mg/kg/day으로 단 1회 강제 경구 투여한 후 1일, 3일, 5일, 10일, 15일, 20일, 25일 30일마다 3마리씩 채취하여 시료의 처리를 각각 달리한 근육직접법, 추출디스크법, 직접디스크법의 3종류 간이스크리닝법으로써 OTC의 잔존유무를 분석하였다 B. subtilis(pH 6.0)배지는 투여 후 1일째 근육직접법에서만 양성반응으로 의심되는 의양성 반응(${\pm}$)을 나타내었을 뿐 30일까지 간이스크리닝법 3종류가 모두 음성 반응을 나타내었다. B. subtilis(7.2), B. subtilis(8.0), M. luteus(8.0)배지는 투여 후 1일째부터 30일까지 간이스크리닝법 3종류가 모두 음성반응을 나타내었다. 그러나 B. cereus(pH 6.0)배지는 1일째부터 15일까지 간이스크리닝법 3종류가 모두 명확한 양성반응, 투여 후 20일째 근육직접법과 직접디스크법은 의양성반응(${\pm}$)을 보였으나 추출디스크법은 분명한 음성반응, 그리고 투여 후 25일째 및 30일째는 시험조작법 모두가 음성반응을 나타내었다. 따라서 근육직접법, 추출디스크법, 직접디스크법의 간이스크리닝법 3종류는 OTC의 양성반응 판정에 커다란 차이가 없었으며, B. cereus는 OTC의 모니터링에 유효한 균주라는 사실을 확인하였다.
본 연구는 EEC 4-plate법과 그 변법 그리고 식품공전상 간이검사법으로써 어류질병의 예방 및 치료에 사용되는 28종류의 항균물질에 대한 최저 검출한계를 서로 비교하여 어체내 잔류 항균물질의 최적 간이검사법 (bioassay)으로서의 유효성을 확인하고자 하였다. 식품공전상 간이검사법은 PCs에 뛰어난 검출감도를 나타내었으며 AGs에 대하여 좋은 감도를 보였으나 TCs, MLs, NFs, QNs에 대해서는 낮은 검출감도를 나타내었다. 한편, SAs에 대하여는 대단히 저조한 감도를 보였다. EEC 4-plate변법은 TCs에 대하여 우수한 검출감도를 나타내었다. EEC 4-plate법 및 그 변법은 PCs, MLs, NFs, QNs, SAs에 대하여 상대적으로 높은 검출감도를 나타내었다. 시험법들은 모두 CMs에 대하여는 검출감도가 낮았다. 결국 EEC 4-plate 변법이 여러계열의 항균물질에 대해 검출감도가 뛰어나고 항균활성의 범위가 넓어 어체내 잔류 항균성물질을 가장 유효하게 스크리닝할 수 있는 간이검사법으로 확인되었다.
For the development of new cephalosporin antibiotics with aminothiazolcarboxymethylethoxyimino moiety on the C-7 position and tetrazolymethyl moiety on the C-3 position of cephe m ring, 7${\beta}$-[(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(1-carboxy-1-methylethoxyimino)acetamido]-3-[5-(substituted)tetrazol-2-yl]methyl-3-cephem-4-carboxylic acids(28-35) were synthesized. These compounds were tested for antimicrobial activity in vitro against Gram(+) and Gram(-) bacteria. They showed remarkable antibacterial activity against Escherichia coli AB 1157, Escherichia coli AB 0111, Escherichia coli BE 1186, Micrococcus luteus ATCC 9341, Salmonella typhimurium TV 119, Salmonella typhimurium SL 1102, Staphylococcus aureus IFO 12732, Staphylococcus aureus R-209, but these compounds were not active against Pseudomonas aeruginosa N-10.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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