• 환경생물
• /
• 제25권4호
• /
• pp.356-362
• /
• 2007

충남 태안군 일대 4곳의 해안사구 지역에서 자생하는 9종의 사구식물 연관 근권세균 다양성을 2003년 10월부터 2004년 3월까지의 기간 동안 3차례에 걸쳐 denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) 기법을 이용하여 조사하였다. 그 결과 한 밴드가 계속 모든 시료에서 우점하는 것으로 나타났으며, DNA 염기서열 분석에 의하여 Lysobacter enzymogenes와 가장 유사한 것으로 나타났다. 기타 주요 밴드들은 Pseudomonas와 Bacillus 속의 균주들로 동정되었다. L. enzymogenes가 9종의 식물 모두에서 지역이나 조사시기에 관계없이 우점적으로 나타난 것은 이전의 클론 분석을 통한 결과와 일치한다 (Lee et al. 2006a). Bacillus에 속한 밴드들이 모든 조사에서 출현하였으며, Pseudomonas 속 밴드들은 2003년 12월 조사에서 두드러졌다. DGGE 분석만으로는 Lysobacter가 사구식물에 가지는 중요성을 파악할 수는 없으나 건강한 개체에 지속적으로 발견되는 것으로 보아 Lysobacter의 존재는 식물에 긍정적인 영향을 가지는 것으로 사료된다.

• 한국토양비료학회지
• /
• 제43권4호
• /
• pp.490-497
• /
• 2010

근권토양으로부터 고추역병균을 포함한 다양한 식물 병원성 곰팡이에 대하여 항균활성이 강한 세균을 분리하였다. 이 세균은 16S rRNA gene서열 분석 결과 Lysobacter enzymogens로 동정되었고 LE429로 명명 하였다. LE429는 chitinase, ${\beta}-1$, 3-glucanase, protease, gelatinase, lipase 및 항생물질과 같은 다양한 이차대사산물을 분비하였다. 항생물질은 diaon HP-20 및 sephadex LH-20 컬럼크로마토그래피 및 HPLC로 정제하여, GC-EI 및 GC-CI분석을 통하여 phenylacetic acid로 동정되었다. Field 실험에서 LE429의 고추 병해 억제 효과를 조사하기 위해 LE429배양액(CB), Neem oil 용액 (NO), LE429배양액과 Neem oil 용액을 섞은 혼합액(CB+NO), 그리고 대조구로서 물(CON)을 각각 고추에 처리하였다. 고추의 수량구성요소는 일반적으로 CB 처리구가 가장 높았고, CB+NO, CON 그리고 NO 순서로 나타났다. CB 처리구에서 병원성 곰팡이는 강하게 억제 되었지만, 몇몇 해충이 발견되었다. NO 처리구에서는 해충은 발견 되지 않았지만, 병원성 곰팡이가 발견 되었다. 하지만, CB+NO 처리구에서 병원성 곰팡이 및 해충이 전혀 발견 되지 않았다. 결론적으로, 2차 대 사산물을 생산하는 LE429와 Neem oil의 혼합액은 고추에 발생하는 병원성 곰팡이와 해충에 대한 좋은 생물학적 방제제가 될 수 있다고 사료된다.

• 방사선산업학회지
• /
• 제4권1호
• /
• pp.65-71
• /
• 2010

Two chitinase producing strains CHI2 and CHI4 were isolated from soybean rhizosphere soil. Both the strains belonged to Lysobacter enzymogenes as indicated by 16S rDNA sequence analysis. Though strain CHI2 and CHI4 produced extracellular chitinase, they differ in their chitinolytic activity. CHI4 produced approximately three times the higher amounts of enzyme than that of CHI2 under specified conditions. CHI2 produced $535.67U\;l^{-1}$ of chitinase after 48 h incubation with a specific activity of $3.91U\;mg^{-1}$ of protein while strain CHI4 produced $1584.13U\;l^{-1}$ of chitinase with a specific activity of $10.88U\;mg^{-1}$ protein. SDS-PAGE analysis indicated that the molecular weight of chitinase enzyme was approximately 45 kDa. A faint band with a molecular weight of 55 kDa reveals the possibility for the presence of another kind of chitin binding protein. Mutant library was developed by exposing the isolates to gamma rays at their $LD_{99}$ value (0.23 kGy). Totally, 11 mutants of CHI2 and CHI4 are reported to have enhanced chitinase activity. Several leaky mutant clones with decreased enzyme activity and a defective mutant (CHI2-M16) with complete loss of chitinase activity were also identified. CHI4-M18, CHI4-M8 and CHI4-M29 showed 78.8, 41.5, and 31.9% increased chitinase activity over wild type CHI4.

• The Plant Pathology Journal
• /
• 제28권4호
• /
• pp.439-445
• /
• 2012

The chitinase producing Lysobacter enzymogenes C-3 has previously been shown to suppress plant pathogens in vitro and in the field, but little is known of the regulation of chitinase production, or its role in antimicrobial activity and biocontrol. In this study, we isolated and characterized chitinase-defective mutants by screening the transposon mutants of L. enzymogenes C-3. These mutations disrupted genes involved in diverse functions: glucose-galactose transpoter (gluP), disulfide bond formation protein B (dsbB), Clp protease (clp), and polyamine synthase (speD). The chitinase production of the SpeD mutant was restored by the addition of exogenous spermidine or spermine to the bacterial cultures. The speD and clp mutants lost in vitro antifungal activities against plant fungal pathogens. However, the gluP and dsbB mutants showed similar antifungal activities to that of the wild-type. The growth of the mutants in nutrient rich conditions containing chitin was similar with that of the wild-type. However, growth of the speD and gluP mutants was defective in chitin minimal medium, but was observed no growth retardation in the clp and dsbB mutant on chitin minimal medium. In this study, we identified the four genes might be involved and play different role in the production of extracellular chitinase and antifungal activity in L. enzymogenes C-3.

• 식물병연구
• /
• 제13권1호
• /
• pp.40-44
• /
• 2007

비닐하우스에서 고추 흰가루병은 1년 내내 발생하는 가장 문제시되는 병해중의 하나이다. 본 연구에서는 키틴 함유배지에서 자란 L. enzymogenes strain C-3와 Chromobacterium sp. strain C-61의 혼합배양액에 의한 흰가루병 방제효과를 평가하였다. 모든 실험에서 고추 잎 뒷면에 분포하는 흰가루는 혼합배양액 살포 3일 후 완전 사라졌다. 그러나 동일 부위에서 새로운 흰가루가 나타나기까지의 기간(방제지속기간)은 살포후의 환경조건에 따라 크게 달랐다. 특히, 오전 9시보다 오후 6시에 살포되었을 경우, 그리고 살포 다음날 비가 왔을 경우에는 그 방제지속기간이 훨씬 더 길었다. 이것은 살포 후의 환경 조건이 병 방제효과에 크게 영향을 미칠 것이라는 것을 암시한다. 배양 원액은 병 발생이 심한 포장에서 5일 간격, 병 발생이 시작되는 포장에서 7일 간격 살포함으로서 95% 이상의 완전한 방제효과를 보여 주었다. 10배 희석 액도 동일 방법으로 살포하였을 경우 81% 이상의 방제 효과를 나타냈다. 따라서 본 배양액은 고추 흰가루병 방제에 실제 이용 가능할 것으로 판단된다.

• 식물병연구
• /
• 제24권4호
• /
• pp.353-358
• /
• 2018

본 연구팀에서 개발한 키틴분해미생물 대량배양 bioformulated product는 다양한 작물의 병과 선충의 생물적 방제에 성공적으로 이용되어 왔다. 이 연구에서는 개발된 키틴분해미생물 대량배양 기술을 활용하여 인삼 모잘록병의 생물적 방제법을 확립하고자 수행하였다. 인삼 잘록병 오염 토양을 이용한 포트에서 키틴최소배지에서 배양한 키틴분해미생물 Chrobacterium sp.와 L. enzymogenes 혼합배양액 처리구에는 인삼의 출아율과 인삼 잘록병율이 통계적으로 유의하게 감소하였다. 개발된 키틴분해미생물 배양액의 생물적 방제 능력은 희석여부와 처리시기에 따라 차이를 보였다. 인삼 포장에서 혼합배양액을 파종 전 종자침지하고 출아기에는 토양관주하였을 때, 본포의 2년생 인삼에서 배양원액은 2회 토양관주, 10배 희석액은 3회 토양관주에서 높은 방제효과를 나타냈다. 토직 본포의 경우 배양 원액의 종자 침지에 의한 방제효과는 낮았지만, 종자침지 후 1회 또는 2회 토양관주는 살균제인 톨클로로포스메틸수화제의 종자분의소독과 비슷한 수준의 방제효과를 보였다. 이러한 결과는 Chromobacterium sp. C-61와 L. enzymogenes C-3의 혼합배양액을 이용하여 인삼 잘록병 방제에 화학적 살균제를 대신할 수 있을 효과적인 대안이 될 수 있을 것이다.