야생형(野生形)인 만가닥버섯 Lyophyllum ulmarium(=Hypsizigus marmoreus) ASI 8007에서 분리한 분열자(分裂子)와 잔나비걸상버섯 영양요구주 Ganoderma applanatum ASI 7-18 (cys met)의 원형질체(原形質體)를 polyethylene glycol로 융합(融合)하여 융합주를 얻었다. 융합주는 GCM(Ganoderma complete modium)에서 양친균총이 혼합된 형태였으나 3회 계대 배양되면서 만가닥버섯 균총으로 변하여 균사에는 클램프연결체와 분열자를 지녔고, 만가닥과 거의 유사한 자실체를 형성하였다. 균사체로 esterase 동위효소(同位酵素)를 분석하였는데 만가닥이 1개 밴드, 잔나비걸상이 2개의 밴드를 가진데 비하여 융합주는 양친의 3개와 새로운 2개의 밴드를 나타내었다. 이들 융합주 상호간에는 균총형태, 생장속도, esterase 동위효소, 자실체 특성에 있어서 거의 차이가 없어 아주 안정되게 양친의 유전물질을 보유하였다.
This experiment was undertaken to investigate proper conditions for protoplast formation from Lyophyllum ulmarium. Combination of Novozym 234, ${\beta}-Glucuronidase$ and ${\beta}-D-Glucanase$ with 0.6 M Sucrose was the most effective for isolation of protoplasts. The optimal reaction time of mycelium with the lytic mixture was 3 hrs in shaking condition at 120 strokes $min-^1$. When the mycelium of L. ulmarium was cultured for 6 days on yeast glucose agar medium at $25^{\circ}C$, the formation of protoplasts was effective. The yeast glucose agar medium stabilized with 0.6 M sucrose was the most effective for reversion of protoplasts.
야생형(野生型)인 만가닥버섯(Lyophyllum ulmarium ASI 8007)의 원형질체(原形質體)로부터 분리(分離)한 염색체(染色體)를 영양요구주(營養要求株)인 잔나비걸상버섯(Ganoderma applanatum ASI 7-18; cys met)의 원형질체내(原形質體內)에 $PEG+CaCl_2$로 섭입(攝入)하였다. 형질전환주(形質轉煥株)는 microtransgenome과 macrotransgenome type으로 전자(前者)는 느리고 불안정성(不安定性)인 균사생장(菌絲生長), 후자(後者)는 아주 빠른 안정성(安定性)인 균사생장(菌絲生長)이 있으며, 균사(菌絲)가 양친(兩親)보다 굵었으며 GCM+benomyl에서 균총분리(菌叢分離)가 일어났다. 이들을 전기영동으로 esterase 동위효소(同位酵素) 패턴을 조사한 결과 양친에 비하여 위치가 다르게 나타났다.
만가닥 버섯 추출물의 수율 및 전자공여작용, 총폴리페놀 함량, tyrosinase 저해작용, 갈색도, 아질산염 소거작용에 대하여 반응표면분석에 의해 추출조건을 최적화하였다. 만가닥 버섯의 경우 수율은 에탄올 농도에 가장 큰 영향을 받았으며, 전자공여작용의 경우 에탄올 농도가 높고 microwave power가 높은 조건에서 높은 추출률을 나타내었다. 갈변도 및 tyrosinase 저해작용의 경우 에탄을 농도가 증가할수록 microwave power가 증가할수록 더욱 크게 나타났다. 아질산염 소거 작용의 경우 에탄을 농도와 추출시간의 조건에 크게 영향을 받지 않는 것으로 판단되었으며 총 폴리페놀 함량은 에탄을 농도가 증가할수록 증가폭이 크고, microwave power가 증가할수록 추출물의 생리활성이 우수한 것으로 나타났다. 따라서 만가닥버섯의 최적 추출조건 범위는 microwave power 60.15~102.75 watt, ethanol 농도 53.20~64.01%, 추출시간 7.77분으로 예측되었다.
This experiment was undertaken to investigate proper conditions for protoplast isolation and regeneration from the mycelia of Lyophyllum ulmnrium. Protoplast isolation and regeneration are influenced by a variety of factors such as enzyme, osmotic stabilizer, reaction time and age of mycelia. A combination of Novozyme 234 (10mg/ml) and cellulase Onozuka R-10 (10 mg/ml) with 0.6 M $MgSO_4$ was most effective for isolation of the protoplasts. The optimum reaction time of the mycelia with the lytic enzymes was 3.5~4 hours at $28^{\circ}C$ in shaking condition at 120 strokes per min. High yield of the protoplasts were obtained from its 4~5 days old mycelia on complete agar media. Its protoplasts were regenerated to normal hyphae. Regeneration media with 0.6 M sucrose were proper for regeneration of the protoplasts. Their regeneration frequency on complete agar media was 2.3~2.7%.
팽이 및 만가닥버섯의 가공 기술 개발의 일환으로 수행되진 본 연구는 가공 전 처리 공정으로서의 blanching 조건을 확립하기 위해 두 버섯 peroxidase의 열적 특성 결과를 기초 자료로 삼았다. 효소 활성 측정은 Gorin과 Heidema의 방법을 변형하여 사용하였고, 생 버섯으로부터 추출한 조효소핵을 열처리했을 경우 팽이버섯은 $75^{\circ}C$, 3분, 만가닥버섯의 경우 $80^{\circ}C$, 1분 이상의 온도, 시간 조건에서 peroxidase의 불활성이 유발됨을 알았다. 이때 팽이 및 만가닥버섯 peroxidase의 활성에너지$(E_a)$는 59.58 kcal/mol, 43.05 kcal/mol이며 z값은 $9.0^{\circ}C,\;12.4^{circ}C$였다. 반면 Blanching에 의한 두 버섯 peroxidase의 활성화에너지($E_a$)와 z값은 각각 7.97 kcal/mol, 6.55 kcal/mol와 $59.8^{\circ}C,\;74.1^{circ}C$로 나타났다. 이는 peroxidase 자체의 열적 특성과 blanching에 의해 유발된 peroxidase의 열적 특성이 다르다는 것을 보여주는 것으로 blanching시에는 버섯자체와 버섯내의 성분들에 의해 열에 대한 저항성이 증대되어 z값이 높아지는 결과를 유발, 활성화에너지($E_a$)가 감소하는 결과로 나타났다.
Kim, Byong-Kak;Choi, Eung-Chil;Chung, Kyeong-Soo;Park, Hee-Ju;Kim, Hye-Ryoung;Kim, Yang-Sup;Park, Yong-Hwan;Shim, Mi-Ja
Archives of Pharmacal Research
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제6권2호
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pp.141-142
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1983
To find anititumor metabolites in Korean basidiomycetes, the shake-cultured mycelia of eight of the higher fungi were extracted with hot water and the extracts, after being partially purified, were subjected to in vivo antitumor test. When administered i. p. at the dose of 30mg/kg/day for ten consecutive days into the female ICR mice, which had been implanted with $1{\times}10^{6}$ / cells of sarcoma 180 twenty four hours before the first injection, the extracts of Agaricus campestris, Lyophyllum decastes, Lyophyllum ulmarium, Armillaria Tabescence and Calvatia exipuliformis respectively showed inhibition ratios of 64.1%, 65.45, 60.-%, 53.0 and 49.3%. These five species were selected for further study, whereas the extracts of Phallus impudicus, Coprinus comatus and Pholiota squarrosa whih showed the inhibition ratios of 31.2%, 33.5% and 19.0% were discontinued.
마이크로웨이브 추출(MAE)을 이용하여 만가닥버섯을 물, 50% 에탄올, 99% 에탄올로 추출하였으며 마이크로웨이브의 power와 시간에 따라 추출물의 총 폴리페놀 함량, 전자공여 작용(EDA), tyrosinase 저해작용, 아질산염 소거작용의 차이를 관찰하였다. Microwave power를 60∼120 W로 증가시킴에 따라 총 폴리페놀 함량과 전자공여능은 증가하는 경향을 나타내었다. 만가닥버섯의 전자공여능이 90 W에서 평형에 이른 반면에 tyrosinase 저해능은 90 W 이상에서 급격히 증가하였다. 50% 에탄을 추출물과 99% 에탄을 추출물의 아질산염 소거능은 microwave power를 증가시킴에 따라 확연히 증가하는 경향을 나타내었으며 pH 1.2에서 99% 에탄을 추출물은 물 추출물에 비해 약 5배 정도의 높은 값을 나타내었다. 추출시간에 따른 총 폴리페놀 함량을 살펴본 결과 물 추출물의 경우 추출시간 5분에서 평형에 이르렀다. 전자공 여능은 5∼10분 사이에 급격히 증가하다가 10분에서 평형에 이르렀으며 물 추출물에서 가장 높게 나타내었다. tyrosinase 저해능은 microwave power 증가에 따라 점진적으로 증가하는 경향을 나타내었다.
1. 광 종류별 조도는 백색광은 2,270Lux로 가장 밝았으며, 황색광 1,750Lux, 청색광 460Lux, 적색광 400Lux의 순이었다. 2. 자실체 특성을 조사한 결과, CBM-1757이 느티만가닥버섯에 비하여 갓의 크기와 대직경이 양호한 경향이었으며, 광 종류간에는 황색광에서 다른 광에 비하여 다소 좋은 경향이었다. 3. 생육기간은 CBM-1757이 느티만가닥버섯에 비하여 균 배양일수는 2일, 초발이소요일수는 1일, 생육일수는 1일정도 단축되어 생육기간이 8일 정도 빠른 경향이었다. 광종류간에는 황색광에서 생육기간이 70일 소요되어 다른 광에 비하여 2~4일 정도 단축되는 경향이었다. 4. 유효경수 및 개체중은 품종간에 차이가 나지 않는 경향이었고, 병당 수량은 느티만가닥버섯 94.8g에 비하여 CBM-1757은 95.6g으로 약간 많았다. 광 종류간에는 백색광의 96.0g에 비하여 청색광 및 적색광에서는 2~9%가 감소되었으나, 황색광에서는 103.4g으로 8% 정도 증수되는 경향이었다. 5. 버섯의 색도는 CBM-1757이 느티만가닥버섯에 비하여 명도, 적색도 및 황색도가 높았으며, 광 종류간에는 황색광에서 다른 광에 비하여 다소 높은 경향이었다.
일상생활에서 식용 또는 약용으로 이용되고 있는 12종의 버섯 추출물을 제조하여 이들 추출물의 항산화능 검색과 함께 인간유래의 혈액암 세포주 및 정상 임파구세포의 성장에 미치는 영향에 대하여 조사하였다. 그 결과, 향버섯, 번데기동충하초, 만가닥버섯, 아가리쿠스, 영지버섯, 표고버섯 메탄올 추출물에서 $30\~60\%$정도의 DPPH radical 소거 활성을 보였고, 목이버섯, 그물버섯, 새송이버섯에서 $10\~30\%$의 활성을 보였다. 또한 chinese hamster V79 cells에서 만가닥 버섯, 번데기동충하초, 향버섯 메탄올추출물의 경우 H2O2로 유도된 세포 독성에 대한 $39\~53\%$ 정도의 유의적인 생존율을 나타내었다. 그리고 인간유래 혈액암세포인 HL6O과 U937에 대해 향버섯, 만가닥버섯, 번데기동충하초, 아가리쿠스, 영지버섯 추출물들이 높은 증식 억제 활성이 보였다. 특히 버섯 메탄올추출물 1.0 mg/mL 처리시 HL 60에 대해 향버섯이 $70.5\%$로 가장 높은 저해율을, U937에 대해서는 번데기동충하초가 $81.5\%$의 가장 높은 저해율을 나타내었다. 그리고 버섯 열수추출물들은 메탄올추출물보다 낮은 저해 활성을 보였다. 그러나 모든 버섯추출물들은 인간의 정상 임파구세포에 대해 $95\%$ 이상의 높은 생존율을 나타내어, 정상 세포에 대한 성장 저해 효과가 없음을 보여주었다. 번데기동충하초, 아가리쿠스, 만가닥버섯, 영지버섯, 향버섯 추출물은 항산화 할성 및 혈액암 세포주에 대한 증식 억제 활성이 높음을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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