Kim, Hyun-Sung;Kim, Sang-Joon;Kim, Hui-Jung;Kim, Han-Uk;Ahn, Sang-Joem;Hur, Byung-Ki
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제11권3호
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pp.215-222
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2006
The Lowry method was used in this study to measure protein in Haemophilus influenzae type b (Hib) conjugate vaccines (polyribosylibitol phosphate-tetanus toxoid; PRP-TT) using deoxycholic acid (DOC) to induce protein precipitation. Trichloroacetic acid (TCA) did not induce precipitation adequately from the Hib conjugate bulk and the freeze-dried Hib conjugate product. Its yield was approximately 50%. The matrix structure of Hib conjugate inhibits precipitation by TCA. Although the Lowry method can be carried out without precipitation in Hib conjugate bulk when no residual impurities (adipic acid dihydrazide [ADH], 1-ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl) carbodiimide-HCI [EDAC], phenol and cyanogens bromide [CNBr], etc.) are present, it cannot be used for Hib conjugate products that contain sucrose 8.5%, because 8.5% concentration of sucrose enhanced the protein concentration. DOC- and HCl-induced precipitation is an alternative method for evaluating the protein content of the Hib conjugate bulk and the Hib conjugate product. The precipitation was optimal with a final concentrate of 0.1% for DOC at $4^{\circ}C$ and pH 2. This Lowry method, using DOC/HCI precipitation to induce protein precipitation, was confirmed a consistent, reproducible, and valid test for proteins in Hib conjugate bulk and its freeze-dried product.
쌀부산물인 탈지미강을 상업적으로 사용되는 8가지 protease를 최적화된 조건에서 단일 혹은 혼합 처리하여 수용성 단백질을 분리하였다. 이렇게 분리된 단백질을 Lowry, Kjeldahl 그리고 Gravimetric method 등 총 3가지 방법으로 분석을 한 결과 Protamex, Alcalase, Protease N이 가장 높은 분해율을 나타냈다. 3가지 방법에서 모두 Protamex, Alcalase, Protease N이 가장 높은 분해율을 나타내었고, Gravimetric method의 경우 다른 두 분석방법인 Lowry, Kjeldahl method에 비해 더 높은 단백질 함량을 보였다. 또한 위의 단일처리결과를 바탕으로 3가지 protease를 혼합하여 처리하였을 때 단일효소처리에 비해 상승효과가 나타나는 것을 알 수 있었는데, 이것은 protease의 경우 가수분해 할 수 있는 특정 peptide 혹은 amino acid가 있는데 각각의 protease가 분해하지 못하는 peptide 혹은 amino acid를 서로 분해해줌으로써 상승효과가 나타난 것으로 생각된다. 효소처리를 하여 얻어진 단백질의 사이즈를 알아보기 위해 SDS PAGE를 한 결과 어떠한 밴드도 형성이 되지 않았고 이는 분해된 단백질이 marker의 최소 사이즈인 15 kDa보다 작기때문인 것으로 생각된다. 따라서 일반 단백질보다 사이즈가 작은 polypeptide나 amino acid로써 분해된 것을 뜻하고 실제로 섭취하였을 때는 신체에서 생성되는 단백질 분해효소인 trypsin이나 chymotrypsin의 분해 없이도 쉽게 흡수 할 수 있을 것이라 판단된다. 또한 효소의 종류가 많을수록 총 아미노산의 함량이 높아짐으로써 식품첨가물로써 활용도가 높은 단백질가수분해물로 분해되었음을 확인할 수 있었다.
한외여과막을 이용하여 알부민 용액을 회분식 혼합분리기에서 분리하는 현상들을 연구하였다. 본 연구는 작업시간과 작업압력에 따라 변하는 투과플럭스에 대한 것이다. 또한 실험은 pH 4.8에서 수행되었다. 알부민의 정량은 광학적으로 측정하였으며, Lowry법을 사용하였다. 본 연구 결과는 희박 알부민 용액의 한외여과는 작업시간에 따라 투과량 플럭스가 완만하게 감소되며, 제한된 사용압력에서 알부민 용액의 농도분극 현상은 자석교반에 의해 제기 되었다.
쌀 부산물인 쌀 시럽박을 상업적으로 사용되는 8가지 protease로 최적화된 조건에서 단일 혹은 혼합 처리하여 수용성 단백질을 분리하였다. 이렇게 분리된 단백질을 Lowry, Kjeldahl 그리고 Gravimetric method 등 총 3가지 방법으로 분석을 한 결과 Protease M, Protease N, Protease A이 가장 높은 분해율을 나타내었다. 3가지 방법에서 모두 Protease M, Protease N, Protease A가 가장 높은 분해율을 나타내었지만, 특히 Gravimetric method의 경우 다른 두 분석방법에 비해 더 높은 단백질 함량을 보였다. 또한 위의 단일처리 결과를 바탕으로 3가지 protease를 혼합하여 처리하였을 때 단일처리와는 달리 상승효과가 나타나는 것을 알 수 있었다. 효소 처리를 하여 얻어진 단백질의 사이즈를 알아보기 위해 SDS-PAGE를 한 결과 어떠한 밴드도 형성이 되지 않았고, 이는 단백질이 마커의 최소사이즈 15 kDa보다 작은 것으로 생각할 수 있다. 아미노산분석의 경우 총 아미노산의 함량은 Protease M을 단일 처리하였을 때와 비슷함을 알 수 있었다. 이는 Protease M의 경우 단백질을 분해할 때 peptide와 amino acid를 동시에 생성하는 특성을 가지고 있지만 Protease N의 경우는 peptide만을 생성하는 특성을 가지고 있어서 상대적으로 Protease M을 처리하였을 때 총 아미노산의 함량이 Protease N에 비해 높음을 알 수 있었으며 이러한 특성으로 인해서 효소를 혼합하였을 때도 총 아미노산의 함량은 같은 것으로 판단된다. 효소 처리 후 생성된 총 단백질 함량은 효소를 혼합할수록 증가하였지만 아미노산의 함량은 단일과 비교하였을 때 비슷한 결과를 나타내었는데 이것 또한 Protease M의 특성으로 인해서 기인된 것으로 판단되며 상대적으로 효소를 혼합할수록 아미노산으로 분해되지 못한 polypeptide가 단일 처리에 비해 다량 존재 할 것으로 판단된다.
솔잎혹파리 (Thecodiplosis japonensis Uchi. et Inouye)의 충영속 유충과 충영을 탈출하여 낙하한 토중의 유충을 대상으로 체액을 분석, 측정코저 종이 크로마토그라피법, micro-Kjeldahl법, 박층 크로카토그라피 법, 왈부르그 검압계법, Bessey-Lowry법과 Reitman-Frankel법으로 측정 또는 분석하였다. 충영과 유충과 토중의 유충에 따라 유리 아미노산, 총 질소함량의 변화, 탄수화물의 변화, 지질의 종류와 변화, 호흡능, phosphatase, GOT, ?의 활성도가 측정되었다. 유리 아미노산, 총 질소함량, 지질함량, 호흡능, acid phosphatase의 황성, GPT의 활성은 충영속의 유충에서 토중의 유충으로 진행함에 따라 감소하는 경향을 나타냈다. 그러나 trehalose의 함량과 alkaline phosphatase의 활성은 증가하는 경향을 나타냈다.
This study was designed to study on major components of various Bee Venom(Bee Venom by electrical stimulation in Korea; K-BV I, Bee Venom by Microwave stimulation in Korea; K -BV II, 0.5rng/ml, Fu Yu Pharmaceutical Factory, China; C-BV, 1mg /ml, Monmouth Pain Institute, Inc., U.S.A.; A-BV) using Electrophoresis. The results were summarized as follows: 1. In 1:4000 Bee Venom solution rate, the band was not displayed distinctly usmg Electrophoresis. But in 1: 1000, the band showed clearly. 2. The results of Electrophoresis at solution rate 1:1000, K-BV I and K-BVII showed similar band. 3. The molecular weight of Phospholipase $A_2$ was known as 19,000 but its band was seen at 17,000 in Electrophoresis. 4. Protein concentration of Bee Venom by Lowry method was different at solution rate 1:4000 ; C-BV was $250{wmu}g/ml,\;K-BV\;I\;was\;190{wmu}g/ml,\;K-BVII\;was\;160{wmu}/ml\;and\;C-BV\;was\;45{wmu}/ml5$. Electrophoresis method was unuseful for analysis of Bee Venom when solution rate is above 1:4000 but Protein concentration of Bee Venom by Lowry method was possible. These data from the study can be applied to establish the standard measurement of Bee Venom and prevent pure bee venom from mixing of another components. I think it is desirable to study more about safety of Bee Venom as time goes by.
In order to investigate the antitumor components of Korean wild higher fungi, the carpo-phores of Pholiota squarrosa collected in Kaung Nung area were extracted with water by refluxing for eight hours at 80-90.deg. C. The extracts were dialized for six days against distilled water and lyophilized to produce crude polysaccharide powders. They were found to have the antitumor activity against sarcoma 180 implanted in mice. Especially, the inhibition ratio of the extract of Pholiota squarrosa was 78.7% in the dose of 20mg/kg/day for the period of ten days. The tumor in two of the ten mice was completely regressed. The components of these aqueous extracts were found to be polysaccharide and protein. The total polysaccharide was 42% by Anthrone method and the protein was 55% by Lowry-Folin method in the antitumor component of Pholiota squarrosa.
꿀의 식품학적 특성만으로는 토종과 양봉꿀의 판별이 불가능하므로 꿀 속에 존재하는 단백질의 특성으로 판별의 기준을 마련하고자 다음과 같은 연구결과를 얻었다. 꿀 속의 단백질을 Bradford방법을 이용하여 정량한 결과 토종꿀은 $0.1{\sim}3.3\;mg/g$이었고 양봉꿀은 $0.2{\sim}1.6\;mg/g$으로 토종꿀이 양봉꿀의 단백질함량보다 많음을 확인할 수 있었다. 그리고 단백질 전기영동방법을 이용하여 수집한 벌꿀의 단백질 pattern을 관찰해 본 결과 토종꿀과 양봉꿀의 주요 단백질의 분자량이 각각 56,000 Da과 59,000 Da으로 차이가 있음을 확인하였다. 수집한 모든 토종꿀과 양봉꿀에서 같은 결과를 나타내어 이들 단백질이 토종벌과 양봉벌의 생리적 차이에 의해서 나타나는 결과로 판단되었다. 또한 이 주요 단백질을 두 단계의 chromatography를 통해 정제하였으며, 정제된 주요 단백질은 토종꿀과 양봉꿀을 구별할 수 있는 SDS-PAGE의 marker로 이용할 수 있었다. 그리고 꿀의 주요 단백질을 잘 분리하기 위해서는 10%의 gel농도가 가장 적합하였으며 이 방법을 이용하여 토종꿀과 양봉꿀을 신속하고 효과적으로 구별할 수 있었다.
The carpophores of Cryptoporus volvatus collected in Gyeong-gi Province of Korea were extracted with water and a protein-polysaccharide fraction was obtained after dialysis and lyophilization. The antitumor activity of this fraction was tested against sarcoma 180 implanted in A-strain mice. The tumor inhibition ratio was 80.4% in case of the high dose group (50mg/kg, ip, 10 days) and 70.3% in the low dose group (20mg/kg, ip, 10 days). The proteinpolysaccharide fraction was chemically analyzed and was found to be a complex of a protein which was 18.2% of the fraction when determined by Lowry-Folin method, and a polysaccharide which was 55.3% of ther fraction when determined by Anthrone method. Their subunits were identified as four monosaccharides and 18 amino acids by gas-liquid chromatography and amino acid autoanalysis.
This study was carried out to obtain the basic information for non-saponin contents that can be used to index fresh ginseng roots (Panax ginseng C. A. Meyer) cultivated in the Republic of Korea and China. Non-saponin components in fresh gingeng roots which were cultivated in various areas and ages in Korea were determined. Acidic polysaccharide, total polysaccharide, crude polyacetylene were quantitatively analyzed by using the method of spectrophotometric determination, while the total protein was analyzed by using Lowry method. The results show that there were no statistically significant differences for the average contents of four non-saponins among 4-years-old, 5-years-old, and 6-years-old fresh ginseng roots. Additionally, this study assessed the average contents of non-saponin components in 4-years-old fresh ginseng roots (Panax ginseng C. A. Meyer) which were cultivated in Korea and China. The result showed that the average contents of crude polyacetylene and acidic polysaccharide were statistically significant. Four-years-old fresh ginseng roots cultivated in Korea had the higher average contents of crude polyacetylene and acidic polysaccharide than those cultivated in China. However the average contents of total polysaccharide and total protein had no statistically significant difference.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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