Objective: To determine the effects of leukemia inhibitory factor (LIF) on embryonal development in in vitro culture. Methods: This is designed in vitro model using eggs from mouse. The eggs from mouse were assigned 29 for control group, 53 for 20 ng/ml of LIF, 88 for 40 ng/ml of LIF, 68 for 80 ng/ml of LIF respectively for in vitro fertilization. And 26 fertilized eggs at 2 cell stage from mouse also were assigned. The mouse embryos of all groups were cultured in medium supplemented with LIF in different concentrations, whereas the eggs in control group was cultured in medium without supplement of LIF. Results: At 72 hours culture of eggs from in vitro fertilization, there was a slight increas in rate of embryonal development to morula in both LIF-20 and LIF-40 as results of 64.15% and 75% respectively, while 42.65% in inferior rate of LIF-80, compare with 51.72% in control group. But the difference between these each groups were not significant in statistically ($p{\le}0.05$). And after 96 hours culture of eggs, the rates blastocyst formation was significantly higher in both LIF-20 and LIF-40 as 56.6% and 63.63% than those in control and LIF-80 as 44.83% and 35.29% respectively. On culturing eggs from in vivo fertilization, the rates of blastocyst formation was significantly not only higher as 85% and 81.81% respectively in medium supplemented with LIF-40 and LIF-80 than 42.3% in LIF-20 but also embryonal cell viability were remakedly improved at 96 hours after culture. Conclusion: The LIF in low dose is embryotrophic, but LIF in high dose is embryotoxic on eggs from in vitro fertilization. Whereas on culturing eggs from in vivo fertilization, LIF is more beneficial with dose dependent in high concentration.
Lee, Won Young;Lee, Ran;Kim, Hee Chan;Lee, Kyung Hoon;Cui, Xiang Shun;Kim, Nam Hyung;Kim, Sang Hyun;Lee, Il Joo;Uhm, Sang Jun;Yoon, Min Jung;Song, Hyuk
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제27권10호
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pp.1417-1425
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2014
The selection of morphologically normal spermatozoa is critical to obtain high breeding performances in boar breeding farms and artificial insemination (AI) centers. Parameters for the selection of semen mainly include total sperm motility, concentration, and morphology. However, these primary parameters are often not reliable for discriminating between normal and abnormal, non-fertilizable spermatozoa. The present study was designed to compare the motion characteristics, fertilization ability using in vitro fertilization (IVF), and acrosome formation of the semen from boars having low (boar number 2012) and normal (boar number 2004 and 2023) breeding performances. The ultimate goal was to identify additional simple and easy criteria for the selection of normal sperm. There was no significant difference between boar 2004 and boar 2023 sperm total motility in computer assisted sperm analysis. However, boar number 2012 semen presented a significantly reduced population of rapid moving spermatozoa and an increased population of slow moving spermatozoa compared to boar numbers 2004 and 2023. Analysis of detailed motion characteristics revealed that sperm from boar number 2012 had significantly reduced motility in progressiveness, average path velocity, straight-line velocity (VSL), curvilinear velocity (VCL), straightness, and linearity. The assessment of the fertilizing ability by IVF also showed that sperm from boar number 2012 showed a fertility rate of 3.4%, whereas sperm from boar number 2023 had a fertility rate of 75.45%. Interestingly, most of the sperm nuclei were found on the peripheral area of the oocytes, suggesting that the sperm from boar number 2012 lacked penetration ability into the oocyte zonapellucida. The acrosome formation analysis using Pisum sativum agglutinin staining demonstrated that the sperm from boar number 2012 had a defect in acrosome formation. Consequently, primary parameters for selecting semen before AI such as motility are not sufficient to select normal and fertilizable spermatozoa. In conclusion, the present study suggests that the acrosome staining and detailed motion characteristics such as progressiveness, VCL, and VSL should be included in determining semen quality together with primary parameters for successful AI and high breeding performance in the swine industry.
본 연구는 우리나라에 자생하는 순비기나무의 실생묘와 삽목묘를 이용하여 토양의 종류와 시비방법에 따른 재배방법을 구명하고자 한 것으로서, 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 순비기나무의 1년생 실생묘와 삽목묘를 모래, 마사토, 황토 등 3종류의 토양에 시비하지 않고 재배한 결과, 실생묘는 모래와 마사토에서 70% 그리고 황토에서 35%의 생존율을 나타내었고, 삽목묘는 마사토에서 90% 그리고 모래와 황토에서 80%의 생존율을 나타내었다. 실생묘와 삽목묘 모두 전반적인 생장은 마사토와 모래에서 양호하였고, 황토에서 비교적 불량하였다. 실생묘의 경우는 줄기생장이 양호하였고, 삽목묘의 경우는 뿌리생장이 양호하였다. 마사토를 기본토양으로 하고 비료의 종류와 시비량을 조절하여 재배하였을 경우에 유기질 비료만을 기비로 시비한 시험구에서만 묘목이 생존하였고, 무기질비료와 액비를 시비한 시험구에서는 식재한 묘목이 모두 고사하였다. 시비구에서 삽목묘는 실생묘에 비해 월등히 높은 생존율을 나타내었고, 특히 소량 시비구에서는 실생묘에 비해 2배 이상 높은 생존율을 나타내었다. 이상의 결과를 요약하면, 순비기나무 묘목을 재배할 때에 삽목묘가 실생묘보다 전체적인 활착과 생장이 양호하며, 토양에 대한 적응성도 높고, 토양비옥도에 대한 요구도가 적은 것을 알 수 있었다.
We evaluated the hatchability of fertilized eggs from six hybrid combinations of highly valued grouper species inhabiting temperate and warm waters, with the goal of establishing a novel hybrid with enhanced growth and viability during the culturing period in the temperate waters of Korea. Hybrid combinations with red-spotted grouper females exhibited high hatchability with high a fertilization and hatching rate of fertilized eggs and a low deformity rate of hatched larvae. Conversely, hybrid combinations with kelp grouper females had very low hatching rates and very high deformity rates; commercial production of seed from such crosses would be difficult without improving hatchability. The hatchabilities of convict grouper ♀×giant grouper ♂ and kelp grouper ♀×red-spotted grouper ♂ were lower than those of maternal purebreds, but these two hybrid combinations were expected to produce potentially large quantities of hatched larvae. In the above evaluation, promising hybrid combinations were identified for commercial production of seed. For these hybrids to contribute to the development of Korea's mariculture industry, mass production of fertilized eggs and seeds is necessary, along with the development of advanced rearing techniques, such as the identification of a suitable rearing temperature.
노동력 절감을 위해 감나무의 수고 낮추기가 일반화되고 있지만 수고를 심하게 낮춘 해에는 나무 세력이 강해져 과원 관리가 어려워지는 것이 문제가 되고 있다. 본 시험은 동계전정 때에 강전정을 하여 3 m 이상의 수고를 약 2 m로 낮춘 12년생 '상서조생' 단감나무를 대상으로 수세 안정을 위한 시비량 조절 효과를 검토하였다. 관행 시비량을 기초로 4월 기비 (주당 N 224 g, $P_2O_5$ 172 g, $K_2O$ 172 g), 6월 추비(주당 N 112 g, $K_2O$ 99 g), 10월 추비 (주당 N 112 g, $K_2O$ 99 g)를 시용하는 관행시비구와 각 시기마다 관행시비구의 1/3, 2/3씩 주는 시비구 및 무시비구 등 4처리구를 두었다. 처리 당년에 무시비구는 관행시비구에 비해 신초장이 작고 불필요한 2차생장지 발생이 39% 줄었으나 수량과 과실 크기, 색도, 경도, 당도는 감소하지 않았다. 또한 시비구들간의 신초 및 과실의 반응에도 유의적인 차이가 없었다. 이듬해 3월에 채취한 휴면 가지의 가용성 당, 전분, 질소, 칼륨농도는 전년도 시비량에 따른 차이가 명확하지 않았다. 시비량이 동일했던 이듬해 신초장, 도장지 및 2차 생장지 발생, 수량 및 과실 특성은 전년도 시비량에 따른 차이가 없었다. 그러므로 수세 관리 및 시비 비용 절감 측면에서 강전정에 의한 수고 낮추기 당년에는 시비량을 관행의 1/3 이하로 줄여도 될 것으로 판단되었다.
비닐피복작물 재배시 시비효율 증대 및 생력시비기술 확립을 목적으로 토중시비기를 개발하였고 2000년 부터 2001년까지 2년 동안 이를 이용하여 양파를 재배한 후 토양개량, 양분이용률 및 수량성에 미치는 영향을 평가하였으며 그 결과는 다음과 같다. 시험 전 토양보다 모든 처리에서 치환성칼륨 함량은 증가되었으나 유효인산 함량은 감소되었다. 생육시기별 토양 중 질산태질소 함량은 모든 처리에서 생육초기에 가장 높았으며 특히 관행시비에 비하여 토중시비에서 $30-60mg\;kg^{-1}$ 높았고 3회 추비에서 생육후기까지 높게 발현되었다. 양파의 생장속도는 토중시비에서 높았고 생육중기 이후 차이가 크게 나타났으나 토중시비 추비횟수 사이에는 유의성이 없었다. 시비질소 흡수량은 관행시비($78kg\;ha^{-1}$)에 비하여 토중시비에서 59-69% 많았고 질소이용률은 추비 2회>추비 1회>추비 3회 순으로 18-20% 높았다. 시비칼리 흡수량은 관생시비($63kg\;ha^{-1}$)에 비하여 토중시비에서 52-71% 많았으며 칼리이용률은 13-17% 높았다. 시비방법별 시비질소 잔존량은 관행시비에 비해 토중시비에서 8-14% 많았고 시비질소 손실량은 관행($154kg\;ha^{-1}$)에 비해 토중시비에서 26-34% 적은 반면에 시비칼리 잔존량은 13-18% 많았고 시비칼리 손실량은 29-31% 적었다. 양파 생육 및 수량은 토중시비에서 엽초경과 구경이 굵고 구중이 무거워 관행시비($45.91Mg\;ha^{-1}$) 대비 7-13% 증수되었으며 질소시비효율이 22-42% 증대되었다.
본 연구는 벼 재배에 있어 맞춤형비료 시용 효과를 평가하기 위하여 기존의 3요소 단비 처리 및 일반 관행시비 농가에 대한 맞춤형비료 시용에 따른 벼 생육과 수량 그리고 비료사용량 절감 효과 등을 평가하였다. 처리별 벼 생육 상황은 기존 3요소 단일비료 처리구와 맞춤형비료 처리구간 유의성 있는 차이는 나타나지 않았다. 또한, 벼의 정조 수량에도 3요소구 및 일반 관행 농가와의 차이가 없어 맞춤형비료 시용에 따른 벼 생육 및 수량 저하 문제는 없었다. 반면에 맞춤형비료 시용에 따른 농가의 관행 비료 시용량 대비 절감율은 조사 지역별로 6~33% 범위로 평균 17% 이었으며, 맞춤형비료 분시비율에 따른 비료 성분량은 밀양지역을 제외한 모든 조사지역에서 가지거름을 시용하지 않고 2회 분시한 맞춤형비료 70구가 3회 분시한 맞춤형비료 50구에 비해 상대적으로 적은 것으로 나타났다. 조사지역 전체적으로는 평균 5% 정도 비료 성분량이 적게 사용된 결과를 보였다.
최근 잔디관리를 위한 시비프로그램에서 인산의 사용량을 줄이기 위한 연구가 많이 진행 되고 있다. 토양의 인산함량이 식물성장을 위해서 충분히 존재하더라도 시비프로그램은 질소의 양을 기준으로 이루어져 있기 때문에 인산이 불필요 하더라도 질소와 같이 시비되는 것이 일반적이다. 많은 선행연구에서 이미 조성된 잔디에서는 토양내 인산함량의 조건에 상관없이 인산의 영향이 발견되지 않았다. 이것은 뗏장으로 조성된 켄터키블루그래스의 대취층에 많은 인산의 함량이 발견되었기 때문이다. 본 연구에서는 대취층을 최소화 하기위하여 파종하여 새로 조성된 켄터키블루그래스의 성장에 질소와 인산의 영향을 측정하기 위해서 수행되었다. 질소의 시비량은 소량, 중량, 다량으로 각각 20, 30 and $40g\;m^{-2}\;yr^{-1}$로 되었으며 시비 횟수를 각각 2, 4, 6회로 구성되었다. 인산의 시비량은 0, 10 and $20g\;m^{-2}\;yr^{-1}$로 되었으며 인산은 질소시비와 함께 이루어 졌다. 소량의 질소시비는 실험기간 동안 최소수용 품질을 유지 하였으며 가장 적은 예지물을 생산하였다. 다량의 질소시비는 가장 좋은 잔디 품질을 나타내었다. 그러나 실험기간 동안 켄터키블루그래스의 성장에 대한 인산의 일관적인 영향은 발견되지 않았다. 두꺼운 대취층에 조성된 켄터키블루그래스의 성장에 인산의 영향이 없는 것과 동일하게 새로 조성된 켄터키블루그래스의 성장에도 인산의 영향은 일년 동안 발견되지 않았다.
Cryopreservation of embryos by vitrification is a simple method to preserve bovine embryos for subsequent embryo transfer, but embryonic viability after vitrification has been inconsistent and low compared with conventional slow freezing. The aim of the present study is to examine the effect of serum or serum albumin in a vitrification solution and epidermal growth factor(EGF) or fibroblast growth factor(FGF) on in vitro viability of bovine blastocysts frozen by vitrification. Bovine blastocysts were produced by in vitro maturation, fertilization of follicular oocytes and culture of embryos in a synthetic oviduct fluid medium(SOFM) containing BSA and 19 essential and nonessential amino acids. Blastocysts with excellent or good morphology were selected at 7 or 8 days after culture and utilized for vitrification. In experiment 1, blastocysts were vitrified in a solution containing semi-fetal calf serum(SFCS) or BSA(5 or 10mg/ml) and then their subsequent viabilities were examined by culturing thawed embryos in a SOFM containing BSA and 19 amino acids. Effect of EGF or FGF added to a SOFM containing polyvinyl alcohol(PVA) on the viability of vitrified-thawed blastocysts was investigated in experiment 2. BSA added at 5 or 10mg/ml to a vitrification solution showed significantly higher(p < 0.05) developmental rate to expanded and hatching blastocysts than SFCS, but there was no significant difference in the developmental rate to hatched blastocysts after thawing. Supplementation of a culture medium with EGF and/or FGF significantly increased(p < 0.05) embryo development to expanded blastocysts compared with control but showed no beneficial effect on the development to hatching or hatched blastocysts. Coculture of thawed embryos with granulosa cells in a TCM 199 containing 10% fetal calf serum(FCS) showed the highest developmental rate to expanded, hatching and hatched blastocysts among the groups tested. In conclusion, supplementation of a vitrification solution with BSA at 5mg/ml and culture of thawed blastocysts in a medium containing EGF and/or FGF can improve in vitro viability of bovine blastocysts frozen by vitrification.
This stduy was carried out to find a reliable method for the production of in vitro fertilized embryos having more excellent development capacity and freezability in the rabbit and cattle. The greatest number of rabbit oocytes was recovered 6hrs after HCG injection(P<0.05). The maturation rate in vitro was slightly higher in the oocytes(6-h-oocytes) from 6h than those (8-h-oocytes)from 8 hrs after HCG injection and the beneficial effect of FSH during oocyte maturation was significantly great in the oocytes from large follicles. The cleavage rate into 2-to-6-cell stage was not differ between the 6-h-oocytes and 8h-oocytes, but the cleavage of these oocytes was greatly promoted by FSH addition to maturation medium and the cleavge of 8-h-oocytes matured without FSH was significantly low. The embryo development into 16-cell to morula was not promoted by the co-culture with rabbit oviduct epithelial cells. The freezability by embryo stages was ovidusly high at 4-cell and morula stage in 6-h-oocytes and the viability of 16-cell embryos from 8h-oocytes was similar to that of morula stage. The implantation sites after surgical tranfer of fresh rabbit embryos were not implanted. In bovine experiment, the in vitro development into 16-cell and morula after in vitro maturation and fertilization in the follicular oocytes was slightly improved by the co-culture with granulosa cells compared to that with oviduct epithelial cells and the frozen-thawed viability rate of these embryos ranged from 14 to 40%. The excellent fresh embryos were transferred nonsurgically to 6 recipients, but were not pregnant.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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