Effects of allyl sulfides on kinetic behavior of cytochrome P450 1 (CYP1)-catalyzed ethoxyresorufin O-deethylase (EROD) activity were studied using microsomes from benzo[a]pyrene-treated human hepatoma cells. Apparent $K_m$ and $V_{max}$ values were calculated as $2.8\;{\mu}M$ and $3.0\;{\mu}mol$ resorufin/min/mg protein based on Lineweaver-Burk plot of microsomal EROD activity, respectively. Diallyl disulfide (DADS) and diallyl trisulfide (DATS) affected $K_m$ and $V_{max}$ values of EROD activity and acted as mixed-type inhibitors for CYP1 isozymes. Apparent Ki values of DADS and DATS were calculated as 1.07 and 0.88 mM, respectively, by re-plotting slopes of Lineweaver-Burk plot and inhibitor concentrations.
Hydrolysis and adsorption reversibility experiments were run for initial enzyme activity of 4.48, 9.65, 11.19 and 17.14U/mL at a temperature 30$^\circ C$. The chitin particle size corresponded to a mean particle diameter of 0.127mm, and the initial concentration of chitin was 10mg/mL. After approximately 2hrs, the enzyme activity remained constant in a speudo-steady state. The amounts in the bulk [E] and the amounts of enzyme adsorbed on the chitin surface [E] are plotted on Lineweaver-Burk plot to yield a linear relationship with a correlation coefficient of 0.99, a slope of 2.79cm$^-1$ and an intercept of 0.08$\textrm{cm}^2$/U. From this parameters, the values of [E$_T$] and $K_E$ were calculated to be 12.5U/cm$^2$ and 34.88U/mL. respectively, Adsorption isotherm of the enzyme on the particles showed a well developed plateau of 1.35$\times$10$^-3$, 4.72$\times$10$^-3$, 4.42$\times$10$^-3$, 8.58$\times$10$^-3$U/cm$^2$ at 30$^\circ C$. To determine the specificity of chitinase for crystalline chitin, the free energy of adsorption was measured, and its was determined as about -14.62~-18.8kJ/mol.
토양에서 분리된 Streptomyces sp으로부터 cholesterol oxidase의 정제 및 효소학적 특성을 조사하였다. 본 효소의 정제는 50~80% 포화의 황산암모늄 침전 및 cholesterol affinity column chromatography를 통하여 28.3%의 수율로 정제 되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE에서 단일한 밴드를 보였으며 분저량은 약 60,000 dalton으로 추정되었으며, HPLC분석 결과 단일의 peak로 검출되었다. 본 효소의 특성을 검토한 결과, 금속 이온으로 Hg와 Cu의 존재시 크게 저해를 받았고, dithiothreitol 과 mercaptoethanol과 같은 저해제에 의해서 상당히 실활되었다. 본 cholesterol oxidase의 Michaelis 상수는 cholesterol을 기질로하여 Lineweaver-Burk plot분석에서 1.38mM로 추산되었다. 정제효소의 아미노산 조정은 약 416개의 잔기로 추정되며 glycine, alanine, threonine의 함량이 높은 반면, methionine, isoleucine의 함량은 극히 낮았다.
EPDM을 결합재로 사용하고, HRP를 고정시켜 과산화수소 정량을 위한 탄소반죽전극을 제작하고, 바이오센서로서 실용화 가능성을 살펴보기 위하여 전기화학적 특성을 고찰하였다. 실험 농도 영역에서 신호의 Lineweaver-Burk 도시가 보여준 좋은 직선성은 촉매력이 효과적으로 발휘될 수 있도록 EPDM이 전극 물질 속에서 HRP를 잘 고정하고 있음을 보여 주었으며, 이는 EPDM이 전극물질 결합재로 활용될 수 있음을 말하는 것이다. 전극은 낮은 전극전위($0.0\sim-1.0$ V vs. Ag/AgCl)에서 작동하였으며, 이 때 얻어진 신호는 높은 감도와 재현성을 보여 주었다. 특히 건조된 고무의 기계적 안정성은 탄소반죽 전극 실용화의 난제였던 실리콘 오일 결합재의 대체가능성을 열어주었다.
탄소반죽에 쑥조직을 혼입시켜 과산화수소 정량 바이오센서를 제작하고 그것의 전기화학적 성질을 조사하였다. 다른 생체조직을 이용하여 제작한 센서와 비교할 때, 생촉매 안정성이 뛰어났으며, 보다 큰 감응신호를 보여주었다. 조직의 함량 변화에 따른 신호의 변화는 넓은 범위에 걸쳐 직선성을 보여 주었고, Lineweaver-Burk 도시의 직선성은 전극 감응이 효소 촉매작용에 의하여 조절되고 있음을 보였다. 또 감응전류의 pH 의존성 변화는 센서가 두 종류의 동위효소를 포함하고 있음을 암시하였다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제15권2호
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pp.161-164
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2007
While searching for ${\alpha}$-glucosidase inhibitors, the active compound was found in a methanol extract of Burthus martensi Kirsch. The separation of the active compound was performed using various chromatography methods and the physico-chemical properties of the purified compound were characterized. The compound showed very potent inhibitory activity against ${\alpha}-glucosidase$ with an $IC_{50}$ value of $5.3\;{\mu}g/ml$. Lineweaver-Burk plot indicated that its inhibition of ${\alpha}-glucosidase$ was competitive.
혹미의 취반과정 중 lipoxygenase 작용에 의해 생성되는 휘발성 향미 성분의 분석을 위한 기초 자료를 제공하기 위해 진도산 흑미의 lipoxygenase activity를 비색법을 이용하여 측정하였다. 20-60% 포화농도의 ammonium sulfate를 첨가하여 활성을 비교한 결과 30% 포화농도에서 23.9 unit/mg으로 가장 높은 활성을 나타내었다. pH 6.0-9.0에서 조효소액의 활성을 측정한 결과 pH 7.0에서 24.97 unit/mg 으로 가장 높게 나타났으며 0.05-0.8 mM의 linoleic acid를 기질로하여 활성을 측정한 후 Lineweaver-Burk plotting으로 해석하여 속도상수 Vmax와 Km을 구한 결과 각각 53.85 unit/mg과 0.21 mM로 나타났다. 저장온도 -4$0^{\circ}C$, 4$^{\circ}C$, $25^{\circ}C$에서 저장하며 활성을 측정한 결과 -4$0^{\circ}C$에서 저장 3일 후 활성이 62%까지 떨어졌으며 $25^{\circ}C$ 저장의 경우에는 저장 4시간 이후로는 활성을 나타내지 않았다. Microwave로 0-100초간 가열처리 후 활성을 측정한 결과 100초간 가열 하였을 때 대조구에 비해 3.25%의 활성만을 나타내었다. 따라서 진도산 흑미의 lipoxygenase activity는 pH 7.0, ammonium sulfate 30% 포화농도, 기질의 농도 0.21 mM에서 측정하는 것이 가장 적합하며 microwave heating 처리에 의해 효소를 불활성화 할 수 있는 것으로 생각되었다.
부틸고무를 결합재로 사용하여 과산화수소 정량 바이오센서를 제작하고, 그것의 전기화학적 특성과 실용화 가능성을 살펴보았다. 전극은 본 실험실에서 연구되었던 실리콘 오일을 결합재로 사용한 동식물조직 바이오센서보다 수백 배 이상 큰 신호를 보여주었으며, $0.0{\sim}-1.00\;V$(vs. Ag/AgCl)의 넓은 퍼텐셜 영역에서 안정적으로 작동될 수 있었다. 또 신호전류는 실험 퍼텔셜 영역에서 전극전위에 따라 좋은 직선성을 보였다. 검출한계는 $3.0{\times}10^{-4}\;M$ 이었으며, Lineweaver-Burk 도시의 직선성은 효소가 전극 표면에 효과적으로 고정되어 있음을 확인시켜 주었다. 높은 감도에 의한 신호전류의 재현성과, 부틸고무의 결합력에 의한 전극물질의 기계적 안정성은 전극의 실용화 가능성을 보여 주었다.
We investigated the optimum conditions for conversion of water-insoluble components of basidiocarps of Ganoderma lucidum to water-soluble components by hydrolyzing with chitinase. We also tried it with Ganoderma luciclum residue remaining after extracting hot water-soluble components of Ganoderma lucidum. After hydrolyzing under optimum conditions (20 ppm chitinase, 2% Ganoderma lucidum or 6% Ganoderma lucidum residue, at pH 3 and at $ 35^{\circ}C$), the contents of total water-soluble components (polysaccharide or protein) were measured, and it was found that the contents of water-soluble components increased to 1.5-2.7 fold. Michaelis constant, $K_m$ and maximum rate, $V_max$ calculated by Lineweaver-Burk plot for hydrolysis of Ganoderma lucidum were 1.75% and 0.02%/min respectively and those for hydrolysis of Ganoderma lucidum residue were 53.15% and 0.53%/min respectively The protein-bound polysaccharide was isolated after hydrolysis and molecular weights were measured by Sepharose CL-4B gel filtration and compared with the molecular weights of polysaccharide before hydrolysis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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