Conditions for lily pollen growth in vitro and transformation were optimized. Active pollen tube development was achieved effectively in a medium containing 7% sucrose with pH adjusted to 5.7 at the temperature of 27$^{\circ}C$ for about 16-24 hours. Pollen growth was little impaired by the presence of kanamycin at concentration up to 100 mg/L. Pollen rains near the beginning of germination stage were more reliable for Agrobacterium-mediated GUS DNA transformation via vacuum infiltration lasted for 20-40 minutes. GUS DNA integration and its expression in fully developed pollen tubes could be confirmed by Southern blot hybridization, RT-PCR and histochemical staining.
A pollen-specific cDNA clone, LMP50, was isolated from the mature pollen cDNA library of the Easter lily. The LMP50 transcript was highly abundant in mture pollen grains but not detectable in other organs. The LMP50 cDNA clone contains 1383 nucleotides and two open reading frames. The first codes for a peptide of 15 amino acid residues. The role of this peptide is nuclear. The second encodes a protein containing 329 amino acid residues. This protein exhibited a significant homology to human tartrate-resistant acid phosphatase and porcine uteroferrin. Both of these enzymes have been suggested to play a role in iron transport. Therefore, LMP50 may act as an iron carrier protein in mature pollen grains.
송화분, 참나무화분 및 백합화분에 대한 항산화 효능을 DPPH radical 소거능 및 동물조직의 지질산화 억제효능을 이용하여 평가하였다. 각 화분을 ethanol, 50% ethanol 및 물을 이용하여 추출물을 조제한 후 이들에 대한 DPPH radical 소거능을 분석한 결과 50% 소거능을 나타내는 $EC_{50}$ 값은, 송화분의 경우 50% ethanol 추출물(40.0mg/mL)이 가장 낮게 나타났으며 물 추출물(46.8mg/mL), 100% ethanol 추출물(131.2mg/mL) 순 이었다. 참나무화분에서는 50% ethanol 추출물(3.2mg/mL), 100%, ethanol 추출물(4.5mg/mL), 물 추출물(8.3mg/mL) 순이었고 백합화분에서는 100% ethanol 추출물의 $EC_{50}$값이 14.0mg/mL로, 50% ethanol 추출물(24.0mg/mL) 및 물 추출물(18.8mg/mL)에 비해 가장 낮았다. 3 종의 화분에서는 참나무 화분의 DPPH radical 소거능이 우수한 것으로 나타났다. 한편 $ascorbate-Fe^{3+}-EDTA$에 의해 유도되는 뇌조직에서의 지질산화도는 송화분, 참나무화분, 백합화분 추출물에 의해 모두 농도 의존적으로 억제되었으며 신장에서의 지질산화도 억제되었다. 그리고 이 중에서 송화분보다는 참나무와 백합화분의 효능이 우수한 것으로 나타났다. 화분 추출물에 대한 총 polyphenol의 함량을 분석한 결과 참나무화분$(32.5{\pm}2.9{\mu}g/mg\;pollen)$이 백합화분$(25.9{\pm}1.4{\mu}g/mg\;pollen)$이나 송화분$(9.3{\pm}0.7{\mu}g/mg\;pollen)$보다 높게 나타났다.
풍부한 식물의 화분을 이용하여 재조합단백질의 생산연구를 위하여 UreB 단백질 정보를 지닌 1.7 kb DNA를 Helicobacter pylori urease gene cluster를 지니는 pH808로보터 PCR을 통하여 증폭하고 이를 CaMV35S promoter에 연결하여 백합(Lilium longiflorum)화분내로 도입하고 기내배양을 실시하였다. 발아초기의 화분을 Agrobacterium과 함께 진공침윤시켜 ureB DNA를 형질전환시키고 kanamycin을 지니는 화분배지에서 16-24시간 배앵하여 완전한 화분관신장을 이루도록 하였다. 이들 형질전환화분의 유전자도입 및 발현을 분석하였으며 그 결과 기내배양하는 하분을 일회성의 단백질공장으로 이용할 수 있다는 가능성을 제시하였다.
백합 (Lilium longiflorum cv. Georgia) 화분의 생장과 agro-infiltration에 의한 일시발현에 대한 물리적, 화학적, 생물적 요인의 영향을 분석하였다 화분을 배지에 섞기 위한 물리적 과정이나 agro-infiltration을 위한 진공작업과정은 정상적 화분생장을 위하여 최소화되는 것이 바람직한 것으로 나타났다. 비교적 넓은 범위에서의 온도 (19 to 27$^{\circ}C$)나 pH(5.0 to 8.0)에서 화분의 생장이 유사하게 진행되었으며 화학적 요인으로서의 cefotaxime (300mg/L), acetosyringone (800 $\mu$M), syringealdehyde (800 $\mu$M) 등의 처리는 화분의 생장에 영향을 나타내지 않았다. 그러나 kanamycin의 경우 매우 심한 생장저해현상을 보였는데 25mg/L의 농도에서도 저해현상을 보이는 경우도 있었다. GUS유전자의 화분발현시 acetosyringone(200-400$\mu$M)의 처리에 의하여 그 효율이 약간 향상되는 것으로 나타났으나 syringealdehyde의 경우에는 효과가 없었다. 짧은 시간 내의 agro-infiltration과정과 이어서 18 hr의 화분 및 박테리아의 동시배양으로서도 acetosyringone의 첨가에 상관없이 화분에서의 GUS 일시 발현결과를 얻을 수 있었다.
백합(Lilium longiflorum)으로부터 수집한 화분에 대하여 기내배양, Agrobacterium 및 vacuum infiltration과정을 이용한 형질전환 그리고 kanamycin배지에서의 선별배양을 통하여 PCR에 의하여 증폭된 1.7 kb의 human tissue plasminogen activator(tPA) cDNA의 발현을 분석하였다. 16시간 정도 배양한 신장화분관의 western blotting결과, human standard와 유사한 크기로의 발현을 확인하였다. 이로써 백합화분은 신속한 단백질발현의 분석을 위한 일회성 생산숙주로서의 가능성을 제시하고 있다.
Pollen has been used for Prevention or treatment of certain diseases such as diabetes, arthritis, or cancer in traditional medicine. In addition, pollen is under investigation as a host cell for a gene expression. This study was undertaken to evaluate the immunologic safety of pollen intake. BALB/c mice were administered with 500, 50,5, or 0.5 mg/kg bw of lily pollen for five times a week for four weeks through gastric intubation. Comparing the control mice administered with distilled water, no significant changes were observed in body weight gain, weight of liver, spleen, lung, and his-topathological findings of liver and kidney of the mice groups administered with the pollen. Plasma level of IgG1, IgG2a, and IgE was not different among the groups. When splenic B lymphocytes were stimulated in vitro with lipopolysaccharides for 7 days, level of IgGl and IgGwa produced in the culture supernatants was not significantly different among the groups. Furthermore, no significant alteration was observed in IL-4 and $IFN{\gamma}$ producing ability with splenic T lymphocytes stimulated in vitro with phytohemagglutinins for 48 hours between the pollen-administered and the control mice. Overall, this study suggests that the lily pollen intake is Inducing no significant modulation of humoral and cell-mediated immunity in mice.
기내에서의 발아 및 형질전환 활성을 지닐 수 있는 백합 (Lilium longiflorum) 화분의 장기보존조건을 얻기 위하여 용매를 이용한 연구를 수행하였다. 화분의 용이한 수집을 위하여 용매를 사용했을 때, petroleum ether, n-heptane, benzene 등의 경우 화분의 기내발아에는 영향을 미치지는 않았으나 수집과 정 후 바로 화분건조 및 냉동 보관함으로써 발아활성을 유지 할 수 있었다. 이들의 활성유지는 또한 vacuum infiltration 및 Agrobacterium을 이용한 형질전환에 따른 외래유전자인 tissue plasminogen activator의 발현에 의하여 확인하였다.
본 연구는 우리나라 전통 참나리중 본 연구에서는 경남 진주시에서 선발한 참나리 변이체의 생장과 형태적 특성, 그리고 배수체 검사와 virus 검정 등을 실시하여, 기존 참나리 품종과는 다른 자가결실성 2배체 품종으로 선발하여 조경지피용 소재 및 나리속 식물의 육종시 유전자원으로 이용할 수 있는 기초자료로 이용하고자 하였으며, 얻어진 결과는 다음과 같다. 선발된 자가결실 참나리 2배체 품종의 생육형은 고성형으로 자생 3배체 품종과 동일하였고 주아도 공히 형성하였다. 꽃의 형태적 특성 및 잎의 형태적 특성등은 큰 차이를 보이지 않은 반면 주아의 크기 및 구근의 크기에서는 큰 차이를 보여 품종간 차이를 나타내었다. 자가결실율에서는 자가결실성 2배체 품종의 경우 착과율이 72.6%로 높은 결실율을 보인 반면 자생 3배체 품종은 0%로 자가 불화합성을 보였다. 또한 염색체 조사결과 자가결실 품종의 경우 염색체수가 26개로서 x = 13의 2배체 품종으로 확인되었으며 자생 참나리의 경우 염색체 수가 39개로서 3배체 품종임이 증명되었다. 선발된 자가 결실성 품종의 경우 후대검정을 실시한 결과 생육 특성 및 형태적 특성, 그리고 결실 습성까지 모본과 동일하여 모본의 특성이 후대에도 유전되는 것을 증명할 수 있었고 염색체 조사결과 2n = 26으로 2배체임이 증명되었다. 자가 결실성 참나리 2배체 품종의 화분발아력을 조사한 결과 모본의 화분발아력이 58%로 양호하였으며 종자 및 주아로 번식된 3년생 식물체와 2년생 식물체 공히 화분발아력이 50% 이상으로 나타났다. 그러나 자생 참나리의 화분발아력은 0%로 전혀 발아가 되지 않았다.
개화시기의 수술로부터 수집한 백합화분을 aluminum oxide 미세입자와 섞어 교반에 의해 상해를 발생시켰다. 이어서 이들 화분은 signal peptide-fused epidermal growth factor (EGF) DNA를 지니는 Agrobacterium 세포로 vacuum infiltration을 시켰으며 24 hr 화분신장을 통한 배양을 실시하였다. 이들 신장 화분에서의 EGF mRNA 및 단백질 발현은 성공적으로 확인되었으며 이는 cDNA blot hybridization 및 immuno-blotting의 분석결과이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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