Park, Jae-Yong;Jeong, Seon-Ju;Lee, Ae-Ran;Park, Ji-Yeong;Jeong, Woo-Ju;Kim, Jeong-Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.17
no.12
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pp.2081-2084
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2007
A 2.5 kb aga gene encoding ${\alpha}$-galactosidase (${\alpha}$-Gal) from Leuconostoc mesenteroides SY1 was cloned into pSJE, an E. coli-Leuconostoc shuttle vector. The recombinant plasmid, pSJEaga, was introduced into Leuconostoc citreum KCTC3526 (ATCC49370) by electroporation. Transcription level of aga was the highest in cells grown on raffinose (1%, w/v) followed by cells grown on galactose, melibiose, fructose, glucose, and sucrose. Western blot using antibodies against ${\alpha}$-Gal showed similar results to slot-blot results and enzyme activity measurements. All the results indicated that the aga was successfully expressed in L. citreum and its transcription was under the carbon catabolite repression (CCR).
Kim, Hyun;Eom, Hyun-Ju;Lee, Jun-Soo;Seo, Jin-Ho;Han, Nam-Soo
한국생물공학회:학술대회논문집
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2005.04a
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pp.68-72
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2005
Leuconostoc citreum is one of the representative strains of Leuconostoc spp. that show fast growth rates in fermented vegetables. Sequential experimental designs including the Plackett-Burman design, fractional factorial design, steepest ascent analysis, central composite design and response surface methodology were introduced tooptimize and improve the medium for Leuconostoc citreum. Fifteen medium ingredients were examined and glucose (20 g/l), yeast extract (12.5 g/l), sodium acetate trihydrate (6.12 g/l), potassium phosphate (42.55 g/l) and dibasic ammonium citrate (4.12 g/l)were chosen as the best components to give a critical and positive effect for cell-growth. The biomass was increased to 2.79 g/l (169%), compared to the 1.65 g/l in MRS medium.
Leuconostoc sp. LAB145-3A isolated from kimchi produced a bacteriocin which was active against food pathogens, such as Listeria monocytogenes, Enterococcus faecalis, and E. faecium. Bacteriocin production occurred during the early exponential phase of growth and was stable upto the late stationary phase of growth. Optimum conditions for bacteriocin production were $37^{\circ}C$ with an initial pH of 7.0. The bacteriocin of LAB145-3A was sensitive to proteases, but stable for solvents, pH change and heat treatment. It was stable even at autoclaving temperature for 15 min. The bacteriocin exhibited a bactericidal mode of action against Lactobacillus curvatus LAB170-12. The bacteriocin produced by Leuconostoc sp. LAB145-3A was purified by CM-cellulose cation exchange column chromatography and Sephadex G-50 gel filtration. The purification resulted in an approximate 10,000-fold increase in the specific activity. Approximately 4% of the initial activity was recovered. Purified bacteriocin exhibited a single band on the SDS-PAGE with an apparent molecular weight of 4,400 daltons. This bacteriocin was named leucocin K. Leuconostoc sp. LAB145-3A had two residential plasmids with molecular sizes of 23 kb and 48 kb. A comparison of plasmid profiles between LAB145-3A and its mutants revealed that the 23 kb plasmid (pCA23) was responsible for bacteriocin production and immunity to the bacteriocin in Leuconostoc sp. LAB145-3A.
Four strains of lactic acid bacteria which produced bacteriocins inhibitory to Listeria species were isolated from Kimchi, and were identified as Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides (2 strains), Leuconostoc paramesenteroides and Pediococcus pentosaceus. The bacteriocins produced by the isolates inhibited all of the Listeria monocytogenes strains tested, but L. denigrificans 28 and L. welchimeri 89 were not inhibited by the bacteriocin produced by the Leu. paramesenteroides isolate. The bacteriocin produced by the P. pentosaceus isolate was more inhibitory against sensitive strains and showed broader spectrum of antimicrobial activity than those produced by other isolates. The bacteriocins produced by Leuconostoc isolates were sensitive to pronase E treatment, but that produced by the P. pentosaceus isolate was not completely inactivated. The bacteriocins produced by all of the isolates were not sensitive to catalase, ${\alpha}$-amylase and lysozyme and heat (30 min at $100^{\circ}C$) treatments.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.21
no.4
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pp.414-417
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1992
In order to study the addition effect of Leuconostoc mesenteroides and nisin on Escherichia coli and lactic acid bacteria during fermentation and storage of Kimchi, Kimchi was stored at 4$^{\circ}C$ for 7 days and then in-creased the temperature to $25^{\circ}C$. Lactic acid content on Kimchi fermentation at 4$^{\circ}C$ was maintained initial content which was increased upto 0.9% and lactic bacteria was also increased after switching to $25^{\circ}C$. E. coli, on the other hand, was a little decreased from the initial level, but a significant decrease was found for the those Kimchi of Leuconostoc muenteroides added and nisin treated group when the fermentation temperature was switched to $25^{\circ}C$.
숙성 중인 김치에서 생육과 산 생성이 우수한 유산균을 분리하여 API 50 CHL kit로 확인하고 16S rDNA의 염기 서열을 분석한 결과 Leuconostoc mesenteroides로 동정되어 Leuconostoc mesenteroides KC51로 명명하였다. 대두에 10배의 증류수를 가하여 제조한 두유에 KC51 균주를 접종하고 $30^{\circ}C$에서 정치 배양한 결과, 생균수는 접종 후 9시간까지 급격히 증가하였으며 그 이후 완만하게 증가하여 배양 12시간에는 $2.70{\times}10^9$ CFU/g까지 증가하였다. 적정산도는 배양 12시간에 0.35%까지 증가하였으며,pH 는 pH 4.52까지 감소하였다. 이때 유기산 농도는 젖산과 초산의 함량이 각각 0.56%와 0.10%로 분석 되었다. 두유 발효액에서 Leuconostoc mesenteroides의 증식에 의한 점도의 증가는 관찰되지 않았으며, 관능적으로도 신맛을 제외한 항목에서 두유와 유사하였다. 또한 $4^{\circ}C$에서 두유 발효액은 2주일의 저장기간 동안 pH, 적정산도와 생균수의 변화는 미미하였다.
Three slime-forming lactic acid bacteria were isolated from Kimchi and shown to produce viscous exopolysaccharides (EPS) in sucrose media. The isolated strains, GJ2, C3 and C11, were identified as Leuconostoc kimchii, Leuconostoc citreum and Leuconostoc mesenteroides, respectively, by examining their metabolic characteristics and determining their 16S rDNA sequences. Leu. kimchii GJ2, Leu. citreum C3 and Leu. mesenteroides C11 exhibited high viability (maintained initial viable cell count of $10^8$ CFU/ml) in 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 3.0) for 2 h, in artificial gastric juice for 2 h and in 0.3% oxgall for 24 h. When tested, Leu. kimchii GJ2, in particular, displayed antimicrobial activity against pathogenic microorganisms. Leu. kimchii GJ2, Leu. citreum C3 and Leu. mesenteroides C11 produced 21.49 g/l, 16.46 g/l and 22.98 g/l EPS, respectively, in sucrose (5%) medium. The amount of purified EPS extracted from Leu. kimchii GJ2, Leu. citreum C3 and Leu. mesenteroides C11 was 14.61 g/l, 7.73 g/l and 4.77 g/l, respectively. Although the EPS produced by Leu. kimchii GJ2, Leu. citreum C3 and Leu. mesenteroides C11 differed in viscosity, TLC and HPLC analysis revealed that each contained only one type of monosaccharide, glucose. The average molecular mass of EPS produced by Leu. kimchii GJ2 was 306,606 Da.
The purpose of this study was to investigate the effect of exopolysaccharide (EPS)-producing Leuconostoc and Weissella isolates from kimchi as a probiotic starter and replacement for thickening agents such as pectin and gums in yogurt. Potential probiotic isolates were first screened for their acid and bile tolerance, and then evaluated for antimicrobial activity against Escherichia coli and Salmonella Typhimurium. When the selected Leuconostoc or Weissella isolates were co-inoculated in yogurt without a thickening agent, the yogurt with 4% sucrose produced lower syneresis values than the control and had higher EPS yields. The isolates were able to survive at a level of $10^6CFU/mL$ when incubated at $4^{\circ}C$ for 12 days. This study shows that EPS-producing Leuconostoc and Weissella strains have the potential to produce a synbiotic yogurt.
To develop a selective medium for the isolation and the detection of leuconostocs from the various samples including fermented vegetables, ten strains of leuconostocs and seven strains of lactobacilli were tested for their sensitivity to various antibiotics. The basal-medium containing 5 ${\mu}g/ml$ of novobiocin inhibited the growth of lactobacilli completely, but not that of leuconostocs. On the basis of this result, a new selective medium was developed and to be named NLS medium. This medium contains 1% Tryptone (Difco), 0.1% Yeast Extract (Difco), 2% sucrose, 0.1% Beef Extract (BBL), 0.5% sodium acetate, 0.2% ammonium sulfate, 0.01% magnesium sulfate, 0.2% dipotassium phosphate, 0.05% sorbic acid, 75 ppm sodium azide (Sigma), 0.1% (vol/vol) Tween 80, 30 ${\mu}g/ml$ of Vancomycin (Sigma), 5${\mu}g/ml$ of Novobiocin (Sigma), 0.5${\mu}g/ml$ of cysteine HCI, and 1.5% Agar (Difco). All of the eighty six isolates obtained from some foodstuffs were identified as members of the genus Leuconostoc. Comparative counts with the MRS, PES, LUSM, and NLS medium indicated that the recovery percent was lower than other selective media. Therefore, this result suggested that NLS medium was suitable for the isolation of leuconostocs, but not for counting or enumerating.
Kim, Bong-Joon;Min, Bong-Hee;Kim, Jeongho;Han, Hong-Ui
Journal of Microbiology
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v.39
no.1
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pp.11-16
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2001
Tentative identification of Leuconostoc lactis IH23 isolated from kimchi (a fermented vegetable product) has been described previously with 16S rDNA sequencing (Choi, 1., M. Sc. Thesis Inha Univ.1999). This strain produced the slime identified as dextran based on IR, $\^$13/C- and $^1$H-NMR spectroscopic results. Further study proved that the isolate IH23 belongs to a homogeneous genetic group with L. lactis DSM 20202$\^$T/ and L. argentinum DSM 8581$\^$T/. The results showed DNA-DNA homology of 99-100%, 16S rDNA gene sequence similarity (97.7% ), and a phylogenetic relationship although L. argentinum DSM 8581$\^$T/ had lower homology (80-91%). These data indicate that L. argentinum DSM 8581$\^$T/ and the isolate IH23 belong to an identical species with L. lactis DSM 20202$\^$T/at the genetic level, although in carbohydrate fermentation, the isolate IH23 was mast closely related to L. argentinum DSM 8581$\^$T/ and quite different from L. lactis DSM 20202$\^$T/. Here we first report the isolation of consistent phenotypic variation in Leuconostoc lactis. We also emphasize that the nomenclature of subspecies needs to be differentiated into the three strains mentioned above in Leuconostoc lactis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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