Zoogloea ramigera l15SLR로부터 zooglan다당류의 생산을 위한 최적조건에 관한 연구를 수행하였다 탄소원으로 2.5%의 glucose와 lactose를 이용하였을 때 각각 10.7, 10.5 g/L의 다당류를 생산하였으며 , galactose, white sugar, brown sugar의 경우는 각각 6.4, 6.7, 8.7 g/L의 다당류 생산 을 보였다. 2.5% glucose가 첨가된 제한배지에서 종균 배양액(TSB 배지)을 7ml 이상 접종함으로서 종균 1 ml를 접종 하석 생산된 다당류(2.37 gt) 보다 약 4배의 높은 다당류 생산(10.28 g/L)을 보였다. 종균 배양액을 5 ml이상 접종시에 배양 36시간 이후부터 다당류를 생산하였으며 48시간 배양시에 10g/L이상의 다당류 생산이 가능하였다. 탄소원으로서 또한, 종균 배양액의 흡광도가 1.0~l.7일 경우에 10g/L 이상의 다당류를 생산하였으며, 이 범위를 벗어나는 경우에는 다당류 생산이 저해되었다. 배양액에 rifampicin첨가는 12 g/L이상의 다당류 생산을 보였으며, 다당류 분자량은 1.367$\times$106(g/mol)로서 rifampicin을 가하지 경우 1.711$\times$106(g/mol)와 약간의 차이를 보였다.
The objective of this research was to create a new probiotic candy with good flavor and healthy benefits by using the response surface method and a sequential quadratic programming technique. The endpoint was to increase the varieties of dairy products and enhance their market values. In this study, milk was mixed with yogurt cultures (Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus) and probiotics (L. paracasei, Bifidobacterium longum) and incubated at $37^{\circ}C$ for 20 h. The samples were blended with lyoprotectants (galactose, skim milk powder and sucrose), freeze dried and then mixed with sweeteners (lactose and xylitol) to improve the texture for forming tablets. The processing conditions were optimized in two steps: the first step constructed a surface model using response surface methodology; the second step optimized the model with a sequential quadratic programming procedure. Results indicated that skim milk inoculated with L. delbrueckii subsp. Bulgaricus, S. thermophilus, L. paracasei subsp. paracasei and B. longum and blended with 6.9% of galactose, 7.0% of sucrose and 8.0% of skim milk powder would produce a new probiotic candy with the highest viability of probiotics and good flavor. A relatively higher survival of probiotics can be achieved by placing the probiotic candy product in a glass bottle with deoxidant and desiccant at $4^{\circ}C$. These probiotic counts remained at 106-108 CFU/g after being stored for two months.
Im, Kyung Hoan;Nguyen, Trung Kien;Choi, Jaehyuk;Lee, Tae Soo
Mycobiology
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제44권1호
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pp.48-53
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2016
Lenzites betulinus, known as gilled polypore belongs to Basidiomycota was isolated from fruiting body on broadleaf dead trees. It was found that the mycelia of white rot fungus Lenzites betulinus IUM 5468 produced ethanol from various sugars, including glucose, mannose, galactose, and cellobiose with a yield of 0.38, 0.26, 0.07, and 0.26 g of ethanol per gram of sugar consumed, respectively. This fungus relatively exhibited a good ethanol production from xylose at 0.26 g of ethanol per gram of sugar consumed. However, the ethanol conversion rate of arabinose was relatively low (at 0.07 g of ethanol per gram sugar). L. betulinus was capable of producing ethanol directly from rice straw and corn stalks at 0.22 g and 0.16 g of ethanol per gram of substrates, respectively, when this fungus was cultured in a basal medium containing 20 g/L rice straw or corn stalks. These results indicate that L. betulinus can produce ethanol efficiently from glucose, mannose, and cellobiose and produce ethanol very poorly from galactose and arabinose. Therefore, it is suggested that this fungus can ferment ethanol from various sugars and hydrolyze cellulosic materials to sugars and convert them to ethanol simultaneously.
Ulex europaeus agglutinin I(UEA I), succinylated wheat germ agglutinin(sWGA), Griffonia simplicifolia lectin-I(GSL-I)을 이용하여 생쥐 부정소 조직내 당쇄의 분포를 조사하였다. 당쇄의 측쇄 말단의 $\alpha$-L-fucose 잔기에 특이적으로 결합하는 UEA I은 체부 및 미부 부정소를 제외한 두부 부정소 선단의 세정관 상피를 강하게 표지하였으나 관강은 중간 정도의 강도로 모두 표지되어 $\alpha$-L-fucose 잔기를 갖는 부정소 항원들은 부정소 선단부에서 주로 합성된 후 분비되는 것으로 추정된다. 이와 반대로 당쇄 말단의 $\alpha$-D-galactose 잔기에 특이적으로 결합하는 GSL-I은 두부 부정소를 제외한 체부와 미부 부정소 상피의 투명세포의 세포질과 섬모 및 기저세포를 표지하였다. 다당 사슬 및 복잡한 구조를 갖는 glycan의 당쇄의 N-acetyl-giucosamine 잔기에 특이적으로 결합하는sWCA는 부정소 부위별로 커다란 차이를 보이지 않았으나, 체부와 미부 부정소의 투명세포는 주세포에 비해 더 강하게 표지되어 sWGA 표지는 투명세포 기능분화의 표식자로 추측된다. UEA I 및 sWGA에 의한 관강의 표지 강도는 체부보다는 미부에서 약하게 관찰되어 미부 부정소 관강내에 $\alpha$-L-fucose 및 N-acetyl-glucosamine 잔기의 절단과 관련된 효소활성이 존재하는 것으로 추정된다. 요약하면 $\alpha$-L-fucose, $\alpha$-D-galactose, N-acetyl-glucosamine 잔기를 갖는 당쇄의 분포가 상피세포의 종류 및 부정소의 길이를 따라 차이를 보임을 확인하였다. 이는 정자의 성숙을 조절하는 부정소 각 절편 및 특정 절편 내 소관상피 세포의 기능적 분화를 대변하는 것으로 사료된다.
본 연구는 발효노니 다당체 추출물(Vitalbos)을 건강기능식품 소재로 활용하기 위해 DAA, 총당 함량, 단당류 3종(galacturonic acid, glucose 및 galactose)을 지표성분으로 설정하고, 지표성분에 대한 효과적인 분석법 설정 및 검증을 위해 수행되었다. 기존에 보고된 분석법 검증 방법을 수정하여 특이성, 직선성, 정밀성, 정확성, 검출한계(LOD) 및 정량한계(LOQ)를 고성능 액체크로마토그래피와 페놀-황산법을 이용하여 측정하였다. 그 결과 DAA 및 단당류 3종의 표준용액과 Vitalbos의 머무름 시간이 일치하였으며 스펙트럼 또한 동일하여 분석법의 특이성을 확인하였다. 지표성분의 검량선 상관계수(R2)는 0.9995-0.9998 범위로 0.99 이상의 우수한 직선성을 나타냈다. Intra-day 및 inter-day 정밀도는 0.14-3.01%의 범위로 5% 미만의 우수한 정밀도를 나타냈고 회수율은 95.13-105.59% 범위에서 우수한 정확도를 보였다. DAA 분석의 LOD와 LOQ는 각각 0.39 ㎍/mL 및 1.18 ㎍/mL이었으며 총당 함량의 LOD 및 LOQ는 각각 0.84 ㎍/mL 및 2.55 ㎍/mL로 측정되었다. 단당류 3종에 대한 LOD는 0.48-0.81 ㎍/mL의 범위였으며, LOQ는 1.45-2.44 ㎍/mL 범위에서 정량분석이 가능한 것으로 나타났다. 분석법 검증 결과, 특이성, 직선성, 정밀성 및 정확성 모두 우수한 분석법임을 검증하였으며, LOD와 LOQ 또한 Vitalbos 분석에 적합하였음을 확인하였다. 검증된 분석법을 이용하여 Vitalbos의 지표 성분 함량을 측정하였을 때, DAA, 총당 함량, galacturonic acid, glucose 및 galactose의 함량은 각각 2.31±0.06 mg/dry weight g, 475.92±5.95 mg/dry weight g, 72.83±1.05 mg/dry weight g, 71.63±2.44 mg/dry weight g 및 67.30±2.31 mg/dry weight g으로 측정되었다. 본 연구에서 검증된 분석법을 사용했을 때 Vitalbos의 지표성분 3종에 대하여 우수한 재현성으로 정량분석이 가능하였으며, 건강기능식품 소재로의 품질관리에 기여할 수 있을 것으로 판단된다.
A simple method for the purification of porphyran from laver Porphyra yezoensis was developed to obtain information for the development of food materials with biological functionality. Crude porphyran (CP) was extracted from dried laver in boiling water for 3 h, and then fractionated using cetylpyridinium chloride into an acidic fraction (CP-F1) and a neutral fraction (CP-F2). CP-F1 was fractionated further by fractional ethanol precipitation. Fraction CP-F1-70, precipitated at an ethanol concentration of 61-70% was the major fraction containing 68.1% of the yield from the initial fraction CP-F1. The CP-F1-70 fraction displayed a single band on Sepharose CL-4B with a molecular mass of 550 kDa, indicating a homogeneous polysaccharide. The molar ratio of galactose, 3,6-anhydro-L-galactose, 6-0-methyl-D-galactose and ester sulfate of CP-F1-70 was 1:0.32:0.07:0.53. This method is very useful for rapid and large-scale preparation of purified porphyran because it is compatible with mass production.
고추잎의 열수추출을 행하여 추출물의 보체계 활성을 측정한 결과 열수추출물에서 높은 항보체 활성이 나타나 고추잎의 열수추출물을 대상으로 활성 다당을 분리하여 특성을 조사하였다. 즉 열수추출물의 메탄을 환류, 에탄을 침전, 투석 및 동결건조를 통하여 고추일 600 g으로부터 186g의 조다당(CAL-0)을 얻었다. CAL-0는 당 51.8%, 산성당 8.2%, 단백질 16.8%를 함유하고 있었으며 주로 arabinose, glucose, galactose로 구성되어 있었다. 조다당 CAL-0는 pronase 처리에서 활성의 변화가 없었으나 과요오드산 산화에 의해서 급격히 활성이 감소하였다. 또한 CAL-0의 항보체 활성은 $Ca^{2+}$이온 존재 유무시의 항보체 활성과 교차면역 전기영동 결과 고전경로와 부경로를 통하여 보체계를 활성화하는 것이 관찰되었다. 이 조다당 CAL-0를 DEAE Sepharose CL-6B을 사용하여 0$\longrightarrow$1 M NaCl로 이온교환 크로마토그래피를 행하여 1개의 비흡착획분과 6개의 흡착획분을 얻었다. 이중 증류수(CAL-1)와 0.1 M NaCl에서 용출된 획분(CAL-2)이 다른 획분에 비해 높은 보체계 활성을 보였으며 활성 획 분들에서는 주로 arabinose, galactose, glucose가 다양한 비율의 몰비로 구성되어 있었다. CAL-2 획분은 Sepharose CL-6B의 gel filtration에서 고분자 peak와 저분자 peak로 분리되었으며 항보체 활성은 분자량 61,000 정도의 고분자 획분에서 높게 나타났다.
재조합 효모를 이용한 포도당산화효소의 대량생산 에 관한 기초연구를 실시하였다. 분비신호를 포함한 포도당산화효소 유전자는 Aspergillus niger로부터 polymerase chain reaction을 이용하여 클로닝한후 G GALl과 GALlO promoter를 이용하여 s. cerevi siae strain 2805에서 말현시킨 결과 GALl promoter를 사용한 형질전환체(yGOD1-l)에서 높은 효율 의 효소생성을 나타냈다. 플라스크 배양 결과 1% galactose를 포함한 YEP 배 지 에셔 최고 6 IU/mL 의 포도당산화효소를 생산하였으며 재조합 포도당산 화효소의 세포내 위치를 비교한 결과 A. niger와는 달리 발현된 효소가 80% 이상 배지로 분비됨을 확인하였다. 재조합 포도당산화효소의 열 안정성을 측정한 결과 표준품과 비교하여 $50^{\circ}C$까지 큰 차이를 보이지 않고 높은 활성을 유지하는 것으로 확인되었다.
The chemical and rheological properties of deproteinated porphyrans from laver Porphyra yezoensis were investigated to obtain basic data for the production of food materials with biological functionality. Deproteinated porphyran was prepared by acid extraction (pH 4.0, $80^{\circ}C$, 4 hr) and successive hydrolysis with 0.5% Alcalase and 0.5% Flavourzyme. The porphyran constituted 10.7% of the dry laver and consisted of 0.6% protein, 14.8% ester sulfate, 3.2% 6-O-methyl galactose, 16.0% 3,6-anhydro-L-galactose, and 67.3% galactose. The effects of concentration and temperature on the apparent viscosity were examined by applying the power law and Arrhenius equations. The porphyran solution showed the typical behavior of a pseudoplastic liquid and the flow behavior index decreased with increasing concentration. The activation energy of the deproteinated porphyran solution at a 1,000 L/s shear rate also increased from $1.4954{\times}10^{4}\;to\;1.9544{\times}10^{4}\;J/kg$ mol with the concentration.
본 연구는 한국산 겨우살이 lectin유전자 (A 및 B chain) 을 효모 (Saccharmyces cerevisiae) 에 형질 전환시키는 시스템을 사용한 것으로, 효모내 효과적인 lectin유전자 발현을 위하여 유전자 상에 Kozak translation initiation sequence를 PCR을 이용 삽입, 변형시켜 재 클로닝 하였다. 변형된 lectin A 및 B 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드는 S. cerevisiae INVSc (MATa, his3 $\Delta$l, leu2, trpl-289, ura3-52) 에 형질전환 되었다. 형질전환된 효모는 ABI 3700 system을 이용한 DNA 염기서열 분석을 통해 확인되었고 재조합 한국산겨우살이 lectin 발현을 위해 2% galactose를 사용하여 유도발현되었다. 재조합 lectin A 및 B 단백질은 SDS-PACE 및 western blotting 분석을 수행한 결과 약 29kDa 크기로 확인되었다. 재조합 lectin은 세포내 가용성 단백질 1mg중 1.24∼l.75 $\mu\textrm{g}$ 수준으로 발현되어짐을 ELISA 분석을 통해 확인하였다. 한편 lectin 유전자는 galartose 유도발현 후 36시간이 되 었을 때 발현량이 최대가 되었으며 lectin A 유전자의 경우 48 시간 이후에는 발현이 억제되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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