• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제24권2호
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• pp.254-263
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• 2014

Enteromorpha polysaccharides (EP) extracted from green algae have displayed a wide variety of biological activities. However, their high molecular weight leads to a high viscosity and low solubility, and therefore, greatly restrains their application. To solve this problem, bacteria from the surface of Enteromorpha were screened, and an Alteromonas macleodii strain B7 was found to be able to decrease the molecular weight of EP in culture media. Proteins harvested from the supernatant of the A. macleodii B7 culture were subjected to native gel electrophoresis, and a band corresponding to the Enteromorpha polysaccharide lyase (EPL) was detected by activity staining. The enzyme identity was subsequently confirmed by MALDI-TOF/TOF mass spectrometry as the putative ${\alpha}$-amylase reported in A. macleodii ATCC 27126. The amylase gene (amySTU) from A. macleodii B7 was cloned into Escherichia coli, resulting in high-level expression of the recombinant enzyme with EP-degrading activity. AmySTU was found to be cold-adapted; however, its optimal enzyme activity was detected at $40^{\circ}C$. The ${\alpha}$-amylase was highly stable over a broad pH range (5.5-10) with the optimal pH at 7.5-8.0. The highest enzyme activity was detected when NaCl concentration was 2%, which dropped by 50% when the NaCl concentration was increased to 16%, showing an excellent nature of halotolerance. Furthermore, the amylase activity was not significantly affected by tested surfactants or the presence of some organic solvents. Therefore, the A. macleodii strain B7 and its ${\alpha}$-amylase can be useful in lowering EP molecular weight and in starch processing.

• 한국버섯학회지
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• 제9권1호
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• pp.3-16
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• 2011

In the bipolar basidiomycete Pholiota nameko, a pair of homeodomain protein genes located at the A mating-type locus regulates mating compatibility. In the present study, we used a DNA-mediated transformation system in P. nameko to investigate the homeodomain proteins that control the clamp formation. When a single homeodomain protein gene (A3-hox1 or A3-hox2) from the A3 monokaryon strain was introduced into the A4 monokaryon strain, the transformants produced many pseudo-clamps but very few clamps. When two homeodomain protein genes (A3-hox1 and A3-hox2) were transformed either separately or together into the A4 monokaryon, the ratio of clamps to the clamp-like cells in the transformants was significantly increased to approximately 50%. We, therefore, concluded that the gene dosage of homeodomain protein genes is important for clamp formation. When the sip promoter was connected to the coding region of A3-hox1 and A3-hox2 and the fused fragments were introduced into NGW19-6 (A4), the transformants achieved more than 85% clamp formation and exhibited two nuclei per cell, similar to the dikaryon (NGW12-163 ${\times}$ NGW19-6). The results of real-time RT-PCR confirmed that sip promoter activity is greater than that of the native promoter of homeodomain protein genes in P. nameko. So, we concluded that nearly 100% clamp formation requires high expression levels of homeodomain protein genes and that altered expression of the A mating-type genes alone is sufficient to drive true clamp formation.

• 한국가금학회지
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• 제39권1호
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• pp.45-52
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• 2012

본 시험은 토종오리 육용종의 생산성과 도체수율을 조사하기 위해 수행하였다. 공시동물은 A와 B계통 육용종 토종오리에서 발생한 오리 병아리를 암수 각각 210수씩 선별하여 총 420수를 이용하였다. 시험 설계는 농장에 따른 2처리구(A, B)와 성별에 따른 2처리구(암, 수)로 나누어 $2{\times}2$의 복합요인으로 총 4처리구, 처리구당 7반복, 반복당 15수씩 완전임의 배치하였다. 주령별 체중은 계통 간 비교에서 2, 4, 6 및 8주령에 체중의 차이가 없었으나(P>0.05), 성별에 따라서는 2주령에 암컷, 8주령에 수컷의 체중이 높았다(P<0.01). 주령별 일일 사료 섭취량은 암수 비교에서 6~8주령에 수컷의 섭취량이 높았다(P<0.05). 주령별 증체량은 계통 간에 유의적인 차이가 없었으나, 암수 비교에서는 수컷이 높았다(P<0.01). 주령별 사료 섭취량은 계통에 따른 차이는 없었으며(P>0.05), 암수 비교에서는 6~8주령에 수컷의 사료 섭취량이 암컷에 비해 높았다(P<0.05). 주령별 사료 요구율은 계통 간 비교에서 차이가 없었으며, 암수 비교에서 0~2주령에암컷(P<0.05), 6~8주령에수컷이 높았다(P<0.01). 계통과 주령에 따른 생체중과 도체중은 8주령 B계통에서 가장 높았으며(P<0.01), 도체율은 8주령의 A와 B계통이 가장 높게 나타났다(P<0.05). 이런 결과들은 토종오리 육용종의 생산 성적과 도체수율에 대한 기초적인 자료로서 이용될 것이라 사료된다.

• 한국가금학회지
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• 제40권3호
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• pp.263-270
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• 2013

일반적으로 병아리의 성감별은 생식돌기 감별법이나 반성 유전 형질을 이용한 자가 성별법으로 이루어지고 있다. 이들 중 우모 발생 속도에 관여하는 만우성 유전자를 이용한 깃털 성감별법이 산업적으로 가장 널리 이용되고 있는데, 이는 발생 시 깃털의 형태적 차이로 쉽게 판별이 가능하기 때문이다. 그러나 깃털 자가 성별종의 계통 조성을 위하여 반드시 모계가 만우성이어야 하므로 깃털의 조만성이 생산 능력에 미치는 영향을 구명할 필요가 있다. 따라서 본 연구에서는 깃털 자가 성감별 계통으로 조성 중인 한국 재래닭 적갈색종 만우성 개체들과 조우성 개체들을 대상으로 이들 간의 생산능력의 차이를 비교 분석하였다. 조우성과 만우성 개체들의 번식 능력 분석 결과, 수정율과 부화율 모두에서 이들 간에 차이가 없는 것으로 나타났고, 발생 후 60주령까지 생존율에서도 두 집단 간에 차이가 없었다. 또한 성장 능력의 비교 분석에서 발생 시부터 50주령까지 모든 주령에서 집단 간 평균 체중의 차이는 없는 것으로 나타났다. 깃털의 조만성이 산란능력에 미치는 영향으로 초산 일령의 경우 조우성 개체들의 시산 일령이 만우성 개체들에 비해 평균 3일 정도 빨랐으나, 일계 산란율에 있어서는 조우성 개체와 만우성 개체 간에 차이가 없었다. 깃털의 조만성이 난질에 미치는 영향에 대해서도 난각색을 비롯한 난중, 난백 높이, 하우유니트, 난황색, 난각 두께, 난각 무게 및 난각 밀도 등 모든 난질 지표의 차이는 없는 것으로 나타났다. 결론적으로 한국 재래닭에 있어 깃털 조만성에 따른 생산 능력의 차이는 없는 것으로 사료되어, 이를 이용한 자가 성감별 계통 조성 시 깃털 조만성에 따른 생산능력의 영향은 고려하지 않아도 되는 것으로 판단된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권1호
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• pp.24-28
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• 2005

전통 된장으로부터 단백질 분해능이 있으면서 혈전용해활성이 우수한 D-1 균주를 분리하였다. 분리된 D-1 균주는 표준물질인 plasmin 2.51 $\mu}g$과 같은 혈전용해효소활성을 보였으며 이 균주를 동정하기 위하여 세포막 지방산 조성 분석과 탄수화물 이용성을 조사한 결과 김 등[12], 허 등[7] 청국장에서 혈전용해효소활성을 보이는 균주로 보고된 Bacillus subtilis로 유사하게 나타났다. 탄수화물 이용성, 세포막 지방산 분석 그리고 16S rRNA sequence를 통하여 Bacillus속으로 동정 할 수 있었고, 이에 된장으로부터 분리한 혈전용해효소를 생산하는 D-1균주를 최종적으로 Bacillus sp. D-1으로 명명하였으며 앞으로 이 균주를 이용하여 혈전용해효소를 함유하는 기능성 된장과 청국장 제조에 큰 효과를 보일 것으로 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제12권4호
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• pp.392-398
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• 2002

Lignocellulose 분해 이용을 위해 토양 등에서 lignin분해 능력이 우수한 세균을 분리 및 동정함으로서 방향족 화합물의 이용을 위한 생물전환의 기초를 확보하고자하였다. 토양 등의 시료로부터 38주의 리그닌 분해 균주를 분리하였다. 분리된 LG2를 공시 균주로 선정하여 형태학적, 배양학적 및 생리학적 특성을 조사한 결과 Pseudomonas sp. LG2로 명명하였다. 이 균주는 리그닌을 분해 할 수 있었으며, 리그닌 함유 배지에 배양하여 배양 분해 산물을 HPLC로 분석한 결과 다수의 방향족 화합물을 생산하였다 Poylacrylamide gel활성 분석에 의해서 3종류로 구성된 peroxidase가 조사되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권8호
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• pp.1215-1218
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• 2010

The recombinant DNA pLR5cat_PSAB, in which pediocin PA-1 structural and immunity genes (pedAB) fused with the promoter and deduced signal sequence of an ${\alpha}$-amylase gene from a bifidobacterial strain were inserted in Escherichia coli-lactobacilli shuttle vector pLR5cat, was transferred to Lactobacillus reuteri KCTC 3679 and the transformant presented bacteriocin activity. The recombinant L. reuteri KCTC 3679 transformed with the shortened pLR5cat(S)_PSAB, where a nonessential region for the lactobacilli replicon was removed, also showed bacteriocin activity. The molecular mass of the secreted pediocin PA-1 from the recombinant bacteria was the same as that of native pediocin PA-1 (~4.6 kDa) from Pediococcus acidilactici K10 on a sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) gel. In cocultures with Listeria monocytogenes, the recombinant L. reuteri KCTC 3679 effectively reduced the viable cell count of the pathogenic bacterium by a 3 log scale compared with a control where L. monocytogenes was incubated alone.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권4호
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• pp.201-205
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• 2001

자연계로부터 locust bean gum이 들어 있는 선택배지에서 투명환을 형성하는 mannan 분해능을 갖는 미생물을 스크링 하였고 이를 Aeromonas sp. 로 동정하였다. Aero monas sp. 로부터 염색체 DNA를 분리하여 EcoRI으로 절단하여 대장균에 형질전환한 후 대장균 콜로니 주위에서 locust bean gum을 분해하여 투명환을 형성하는 대장균을 찾아냈다. 형질전환된 대장균으로부터 플라스미드를 분리하여 동일한 제한효소를 처리하여 확인한 결과 10 kd의 Aeromonas sp. 염섹체 DNA에 $\beta$-mannanase 유전자 존재하였다. 대장균에서 발현된 $\beta$-mannanase 의최적 반응 pH와 최적 반응온도는 각각 6.0과 $50^{\circ}C$로서 모균인 Aeromonas sp. 와 동일하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권6호
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• pp.887-892
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• 2015

Uricase is an important microbial enzyme that can be used in the clinical treatment of gout, hyperuricemia, and tumor lysis syndrome. A total of 127 clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were tested for uricase production. A Pseudomonas strain named Ps43 showed the highest level of native uricase enzyme expression. The open reading frame of the uricase enzyme was amplified from Ps43 and cloned into the expression vector pRSET-B. Uricase was expressed using E. coli BL21 (DE3). The ORF was sequenced and assigned GenBank Accession No. KJ718888. The nucleotide sequence analysis was identical to the coding sequence of uricase gene puuDof P. aeruginosa PAO1. We report the successful expression of P. aeruginosa uricase in Escherichia coli. E. coli showed an induced protein with a molecular mass of about 58 kDa that was confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blotting. We also established efficient protein purification using the Ni-Sepharose column with activity of the purified enzyme of 2.16 IU and a 2-fold increase in the specific activity of the pure enzyme compared with the crude enzyme.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제27권8호
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• pp.1519-1528
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• 2017

Foodborne contamination and salmonellosis caused by Salmonella Enteritidis (S. Enteritidis) are a significant threat to human health and poultry enterprises. Outer membrane vesicles (OMVs), which are naturally secreted by gram-negative bacteria, could be a good vaccine option because they have many biologically active substances, including lipopolysaccharides (LPS), outer membrane proteins (OMPs), and phospholipids, as well as periplasmic components. In the present study, we purified OMVs derived from S. Enteritidis and analyzed their characteristics through silver staining and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. In total, 108 proteins were identified in S. Enteritidis OMVs through liquid chromatography tandem mass spectrometry analysis, and OMPs, periplasmic proteins, and extracellular proteins (49.9% of total proteins) were found to be enriched in the OMVs compared with bacterial cells. Furthermore, native OMVs used in immunizations by either the intranasal route or the intraperitoneal route could elicit significant humoral and mucosal immune responses and provide strong protective efficiency against a lethal dose (~100-fold $LD_{50}$) of the wild-type S. Enteritidis infection. These results indicated that S. Enteritidis OMVs might be an ideal vaccine strategy for preventing S. Enteritidis diseases.