This study was conducted to establish the optimal temperature condition before oocyte activation in B6m F1 mouse. In experiment 1, two embryo culture media (CZB vs KSOM) were evaluated for the development of activated mouse oocytes. Parthenogenetic embryos cultured in KSOM showed better blastocyst development than ones cultured in CZB $(56.2\%\;vs\;81.0\%\;p<0.01)$. Two-hour of pre-incubation before activation significantly reduced the number of hatched blastocysts in KSOM $(22.0\%\;versus\;8.8\%\;p<0.05)$. In experiment 2, recovered oocytes were pre-incubated at different temperature conditions before activation. The experimental groups were divided by 5 as follows. Group A: pre-incubation for 120 min at $37^{\circ}C$, Group B: pre-incubation at $37^{\circ}C$ for 90 min then at $25^{\circ}C$ for 30 min, Group C: pre-incubation at $37^{\circ}C$ for 60 min then at $25^{\circ}C$for 60 min, Group D: pre-incubation at $37^{\circ}C$ for 30 min then at $25^{\circ}C$ for 90 min, and Group E: pre-incubation at $25^{\circ}C$ for 120 min before activation. Group A $(67.6\%)$ and B $(66.7\%)$ showed better development to the blastocyst stage than other groups $(Group\;C:\;50.0\%\;Group \;D:\;49.2\%\;Group\;E:\;33.3\%,\;p<0.05)$. The present study indicates that the temperature before activation affects the development of B6D2 F1 mouse parthenogenetic oocytes and exposure to room temperature should be limited to 30-min when the oocytes are left in HEPES-buffered medium for micromanipulation.
Hyejin Yoon;Jongwoo Lee;Inyoung Kang;Kyoo Wan Choi;Jaewang Lee;Jin Hyun Jun
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제50권4호
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pp.244-252
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2023
Objective: We evaluated the efficacy of the newly developed optimized in vitro culture (OIVC) dish for cultivating preimplantation mouse embryos. This dish minimizes the need for mineral oil and incorporates microwells, providing a stable culture environment and enabling independent monitoring of individual embryos. Methods: Mouse pronuclear (PN) zygotes and two-cell-stage embryos were collected at 18 and 46 hours after human chorionic gonadotropin injection, respectively. These were cultured for 120 hours using potassium simplex optimized medium (KSOM) to reach the blastocyst stage. The embryos were randomly allocated into three groups, each cultured in one of three dishes: a 60-mm culture dish, a microdrop dish, and an OIVC dish that we developed. Results: The OIVC dish effectively maintained the osmolarity of the KSOM culture medium over a 5-day period using only 2 mL of mineral oil. This contrasts with the significant osmolarity increase observed in the 60-mm culture dish. Additionally, the OIVC dish exhibited higher blastulation rates from two-cell embryos (100%) relative to the other dish types. Moreover, blastocysts derived from both PN zygotes and two-cell embryos in the OIVC dish group demonstrated significantly elevated mean cell numbers. Conclusion: Use of the OIVC dish markedly increased the number of cells in blastocysts derived from the in vitro culture of preimplantation mouse embryos. The capacity of this dish to maintain medium osmolarity with minimal mineral oil usage represents a breakthrough that may advance embryo culture techniques for various mammals, including human in vitro fertilization and embryo transfer programs.
This paper proposes a novel wavelet transform and Kohonen neural network based technique for short-time load forecasting of power systems. Firstly. Kohonen Self-organizing map(KSOM) is applied to classify the loads and then the Daubechies D2, D4 and D10 wavelet transforms are adopted in order to forecast the short-term loads. The wavelet coefficients associated with certain frequency and time localisation are adjusted using the conventional multiple regression method and then reconstructed in order to forecast the final loads through a four-scale synthesis technique. The outcome of the study clearly indicates that the proposed composite model of Kohonen neural network and wavelet transform approach can be used as an attractive and effective means for short-term load forecasting.
In this paper, we are proposed development of electric energy method and load curve. A daily electric energy is forecasted using artificial neural network. The load curve is obtained by combining forecasted electric energy and typical daily load patterns which are classified using KSOM and Fuzzy system. As a result, we know that we could get more accurate results and easier application than the results from based on the hourly historical data.
Earth parameters me essential to design and analysis of earth. In this study, a algorithm to estimate earth parameter using artificial neural network(ANN) was proposed. Structures of the soil are grouped by using KSOM algorithm before estimation. Earth parameter is obtained by using BP algorithm. The effectiveness of the proposed algorithm was verified in the case study.
현재의 지문 인식 시스템은 지문 패턴의 복제와 지문 특징점의 해킹이라는 불안한 요소가 잠재되어 있어, 시스템 오동작의 주요 원인이 되기도 한다. 이에 본 논문에서는 신체의 일부인 지문을 주 핵심 인식기로 사용하고, 여기에 최근 널리 이용 되고 있는 화자 인증을 이용하여 직렬 형태의 다중 생체인식 시스템을 구현하였다. 구현된 시스템은 다중생체인식시스템으로 먼저 음성에 대한 인증과정이 성공하면 지문에 대한 인식과정을 수행하는 구조로 되어있다. 또한 효율적인 실시간 인증 처리를 위해 기존의 음성 인식 알고리즘 중에서 화자 종속형인 DTW(Dynamic Time Waning) 알고리즘을 사용하였으며, 지문 인식 알고리즘으로는 계산량을 고려하여 인공지능 기법인 KSOM(Kohonen Self-Organizing feature Map) 알고리즘을 적용하였다. 본 논문에서 구현한 다중생체 인식시스템을 실험한 결과 지문과 음성을 각각 이용한 단일인식시스템보다 본인거부율은 $2\~7\%$정도 떨어졌지만, 인식시스템에서 가장 중요한 요소인 타인수락율은 전혀 발생하지 않음을 확인하였다. 아울러 인식테스트 시간 또한 기존의 단일 생체 인식 시스템과 차이가 거의 없었으며, 인식에 걸린 시간은 평균 1.5초 정도였다. 이에 구현된 다중 생체 인의 시스템은 여러 가지 실험 결과 단일 인식 시스템보다 더 효율적인 보안 시스템임을 증명하였다.
This study was performed to investigate the effect of laser-assisted hole in the zona pellucida (ZP) of frozen-thawed ICR mouse embryos on the process of hatching that is critical for expanded blastocysts to implant into endometrium, Vitrification medium, composed of ethylene glycol and sucrose supplemented with 7.5% (w/v) PVP, was used to freeze $2{\sim}4$ cell stage embryos recovered from oviducts of superovulated and mated female mice before storing them in $LN_2$. Right after thawing them, a laser beam was shot to make a hole in ZP followed by culturing in KSOM for $96{\sim}120\;hr$ and examining development to blastocyst and hatching every 12 hr. Laser-treated embryos showed significantly higher hatching rate compared to control (92.9% vs. 22.1%, p<0.05). From around Day 4, blastocysts developed from laser-treated embryos started hatching while the blastocysts of control group failed to hatch showing a lot of shrinkage. This study shows that a laser-assisted hole in ZP improves the hatching rate of blastocysts developed from frozen-thawed, in vitro cultured ICR mouse embryos.
Yang, Ning Jie;Seol, Dong-Won;Jo, Junghyun;Jang, Hyun Mee;Yoon, Sook-Young;Lee, Dong Ryul
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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제41권1호
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pp.1-8
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2014
Objective: Estrogen related receptor ${\beta}$ (Esrrb) is a member of the orphan nuclear receptors and may regulate the expression of pluripotencyrelated genes, such as Oct4 and Nanog. Therefore, in the present study, we have developed a method for delivering exogenous ESRRB recombinant protein into embryos by using cell-penetrating peptide (CPP) conjugation and have analyzed their effect on embryonic development. Methods: Mouse oocytes and embryos were obtained from superovulated mice. The expression of Oct4 mRNA and the cell number of inner cell mass (ICM) in the in vitro-derived and in vivo-derived blastocysts were first analyzed by real time-reverse transcription-polymerase chain reaction and differential staining. Then 8-cell embryos were cultured in KSOM media with or without $2{\mu}g/mL$ CPP-ESRRB protein for 24 to 48 hours, followed by checking their integration into embryos during in vitro culture by Western blot and immunocytochemistry. Results: Expression of Oct4 and the cell number of ICM were lower in the in vitro-derived blastocysts than in the in vivo-derived ones (p<0.05). In the blastocysts derived from the CPP-ESRRB-treated group, expression of Oct4 was greater than in the non-treated groups (p<0.05). Although no difference in embryonic development was observed between the treated and non-treated groups, the cell number of ICM was greater in the CPP-ESRRB-treated group. Conclusion: Treatment of CPP-ESRRB during cultivation could increase embryos' expression of Oct4 and the formation rate of the ICM in the blastocyst. Additionally, an exogenous delivery system of CPP-conjugated protein would be a useful tool for improving embryo culture systems.
So, Seongjun;Karagozlu, Mustafa Zafer;Lee, Yeonmi;Kang, Eunju
한국동물생명공학회지
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제35권1호
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pp.21-27
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2020
Somatic cell nuclear transfer derived embryonic stem cells (NT-ESCs) have significant advantages in various fields such as genetics, embryology, stem cell science, and regenerative medicine. However, the poor establishment of NT-ESCs hinders various research. Here, we applied fasudil, a Rho-associated kinase (ROCK) inhibitor, to develop somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos and establish NT-ESCs. In the study, MII oocytes were isolated from female B6D2F1 mice and performed SCNT with mouse embryonic fibroblasts (MEFs). The reconstructed NT-oocytes were activated artificially, and cultured to blastocysts in KSOM supplemented with 10 μM fasudil. Further, the blastocysts were seeded on inactivated MEFs in embryonic stem cell medium supplemented with 10 μM fasudil. A total of 26% of embryos formed into blastocysts in the fasudil treated group, while this ratio was 44% in the fasudil free control group. On the other hand, 30% of blastocysts were established NT-ESCs after exposure of fasudil, which was significantly higher than the control group (10%). The results suggest that fasudil reduced blastocyst development after SCNT due to inhibition of 2 cell cleavage while improved the establishment of NT-ESCs through the anti-apoptotic pathway.
This study was conducted to examine the effect of oocyte donor age and micromanipulation medium on the development of mouse cloned embryos receiving cumulus cells. Mouse oocytes were obtained from 6 to 11 week-old mice BDF1 female mice(experiment 1) and cumulus cells were used as donor cells. Micromanipulation procedures for nuclear transfer(NT) were performed in FHM, M2 or Hepes-buffered TCM199(TCM199) medium(experiment 2). After nuclear transfer, the reconstructed oocytes were activated by 10 mM $SrCl_2$ in Ca-free CZB medium in the presence of 5 II ${\mu}$g/ml cytochalasin B for 5 h and cultured in KSOM medium for 4 days. In experiment 1, the survival rate of oocytes after injection of cumulus cells were significantly(p<0.05) lower in oocytes from 6~7 week-old mice(53.3%) than in oocytes from 8~9(80.9%) and 10~11 week-old mice(77.1%). In experiment 2, the survival rate of oocytes after cell injection were significantly(p<0.05) higher in FHM and M2 medium(71.7% and 76.9%) than in TCM199 medium(51.2%). The activation rates of cloned embryos were not different among the micromanipulation media. However, the embryos developed to blastocyst stage were significantly(p<0.05) higher in FHM medium(13.9%) than in M2 and TCM199 medium(0.0% and 0.0%). In conclusion, the present study suggest that oocytes from above 8 week-old mice are superior to oocytes from 6~7 week-old mice as a source of recipient cytoplasm and FHM is superior to M2 and TCM199 as a micromanipulation medium for mouse somatic cell cloning.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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