G Protein-coupled receptors (GPCRs) mediating wide ranges of physiological responses is one of the most attractive targets for drug development. Rhodopsin, a dim-light photoreceptor, has been extensively used as a model system for structural and functional study of GPCRs. Fish have rhodopsin finely-tuned to their habitats where the intensity and the wavelength of lights are changed depending on its water-depth. To study the detailed molecular characteristics of GPCR architecture and to understand the fishery light-sensing system, genes encoding rod opsins were isolated from fishes living under different photic environments. Full-length rod opsin genes were obtained by combination of PCR amplification and DNA walking strategy of genomic DNA isolated from olive flounder, P. olivaceus, Japanese eel, A. japonica, and Common carp C. carpio. Deduced amino acid sequences showed a typical feature of rod opsins including the sites for Schiffs base formation (Lys296) and its counter ion (Glu113), disulfide formation (Cys110 and Cys187), and palmitoylation (Cys322 and Cys323) although Cys322 is replaced by Phe in Japanese eel. Comparison of opsins by amino acid sequence alignment indicated the closest similarity between P. olivaceus and H. hippoglossus (94%), A. japonica and A. anguilla (98%), and C. carpio and C. auratus (95%), respectively.
Edwardsiella tarda는 그람 음성의 장내세균과의 주요 어병세균으로 어류에 edwardsiellosis를 유발하는 전신감염성 병원체이다. 최근 병원성 세균의 외막 단백질들은 세균성 감염에 있어서 숙주와 반응하여 면역반응을 유도하는 것으로 여겨져 연구가 되고 있다. 일본의 연구팀은 어류에서 에드워드병의 원인체인 E. tarda의 37 kDa 단백질이 넙치에서 높은 항원성을 제시하는 것을 보고하였다. 또한 그 연구자들은 37 kDa 단백질의 N-말단 아미노산 서열이 GAPDH와 대응하는 것을 밝혔다. 본 연구에서는 다른 세균에서 알려진 N-말단 서열을 기반으로 primer를 제작하여 이에 상응하는 E. tarda DNA를 증폭하고 클로닝하였다. 이 DNA단편의 염기서열은 예상한 바와 같이 세균의 GAPDH유전자인 gapA와 높은 상동성이 있고, E. tarda GAPDH (etGAPDH)의 아미노산 서열은 다른 장내세균의 GAPDH와 70% 이상의 상동성을 보이는 것을 확인하였다. E. tarda의 외막단백질에 특이적으로 반응하는 항체를 이용하여 E. tarda의 GAPDH가 외막에 존재한다는 것을 증명하였고, gapA의 염기서열을 바탕으로하여 재조합 GAPDH를 과발현 시켰다. 과발현된 재조합단백질 GAPDH는 GAPDH 특이적인 항체를 제조하는데 사용되었고, 또한 넙치에 면역시켜 단일 단백질 백신으로서의 활용도를 모색하였다. 비록 재조합 GAPDH가 면역된 넙치에서 GAPDH에 특이적인 항체가 증가하였음에도 불구하고, E. tarda로 공격실험을 하였을 때 면역된 넙치의 생존율이 12.5%로 측정되어 면역된 그룹과 면역되지 않은 그룹간에 큰 차이가 없는 것이 확인되었다.
Gonadotropin-releasing hormone receptor (GnRHR) gene is expressed at the anterior pituitary gland and plays a key role in gonad development. This study aimed to investigate molecular genetic characteristics of the GnRHR gene and elucidate the effects of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of GnRHR gene on sex steroid level in Japanese flounder (Paralichthys olivaceus). We used polymerase chain reaction single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) and sequencing of the GnRHR gene in 75 individuals. We identified three SNPs in the GnRHR gene: P1 locus (C759A and C830T) in the coding region of exon2 which were both linked together and P2 locus (G984T) in the coding region of exon3, which added a new transcript factor (ADR1) and a new methylation site (CG). Only C830T of P1 leads to amino acid changes Thr266Ile. Statistical analysis showed that P1 was significantly associated with $17{\beta}$-estradiol ($E_2$) level (p<0.01) and gonadosomatic index (GSI) (p<0.05). Individuals with genotype BB of P1 had significantly higher serum $E_2$ levels (p<0.01) and GSI (p<0.05) than those of genotype AA or AB. Another SNP, P2, synonymous mutation, was significantly associated with GSI (p<0.05). Individuals with genotype AB of P2 had significantly higher GSI (p<0.05) than that of genotype AA. In addition, there was a significant association between one diplotype based on three SNPs and reproductive traits. The genetic effects for both serum $E_2$ level and GSI of diplotype D4 were super diplotypes (p<0.05). These results suggest that the SNPs in Japanese Flounder GnRHR are associated with $E_2$ level and GSI.
This study was performed both to explore the host of nervous necrosis virus (NNV) between mariculturing fish species and to examine the phylogenic position of the NNV in Korea. NNV was confirmed on the basis of histopathological and molecular biological examination, then VNN infection was Preyed from either moribund or dead fishes including red drum, Sciaenops ocellatus; oblong rock fish, Sebastes oblongus and flounder, Paralichthys olivaceus. As a result of sequencing for a part of ms, virus from red drum was showed $98\%, $97\%, $86\% and $74\% homology with oblong rock fish, grouper, Japanese flounder and striped jack, respectively. On the other hand, NNV from oblong rock fish was demonstrated $96\%, $85\% and $72\% homology with grouper, Japanese flounder and striped jack, respectively. NNV from red drum and oblong rock fish was exhibited phylogenically distant from the representative NNV, SJNNV originated from striped jack. On the contrary, the viruses appeared to be similar species with Taiwan NNV isolated from culturing grouper.
Kim, Wi-Sik;Jung, Sung-Ju;Kim, Jong-Oh;Kim, Du-Woon;Kim, Jeong-Ho;Oh, Myung-Joo
한국어병학회지
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제24권1호
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pp.1-9
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2011
Viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) is an epidemic virus in olive flounder Paralichthys olivaceus farms in Korea, since the virus have first isolated in 2001. In the present study, partial glycoprotein (G) gene nucleotide sequences of seven Korean VHSV from cultured olive flounder and wild marine fishes in coastal areas of Korea were analyzed to evaluate their genetic relatedness to worldwide isolates. Phylogenetically, all Korean VHSV formed only one minor cluster including Japanese isolates, in genotype IVa, while the North America isolates formed a different minor cluster in genotype IVa. These results suggest that Korean VHSV could be an indigenous virus in Korean and Japanese coastal areas, but have not been introduced from North America.
1998년 12월에서 1999년 3월에 걸쳐 바이러스의 감염에 의한 넙치 치어의 대량 폐사가 일어났다. 감염어 샘플을 CHSE-214에 접종한 3일 후부터 세포의 구형화, 용해를 특징으로 하는 CPE가 나타났으며, 전자현미경 관찰에서는 크기가 52-56 nm의 구형의 바이러스입자가 세포질 내에서 관찰되었다. RT-PCR에 의한 버나바이러스 특이적 검출의 결과 양성이었다. 어류주화세포를 이용한 바이러스 배양 특성을 확인한 결과 분리바이러스는 MBV와 유사한 세포선택성을 나타내었으나 IPNV와는 세포내 배양특성이 다르게 나타났다. 바이러스 중화 시험에서 항MBV Y-6혈청과 완전히 중화되었으나, IPNV Ab, Sp, VR-299치 항혈청과는 중화 항체가가 낮게 나타나났다. 본 바이러스는 한국의 넙치에서 분리된 IPNV와 다른 새로운 버나바이러스로서 marine birnavirus(MBV)에 속한다.
The withdrawal time of erythromycin in cultured olive flounder was investigated to ensure the food safety of the fish treated with erythromycin. The oral administration of erythromycin was carried out using the experimental diet containing erythromycin (200 mg/kg) daily dose of 40 mg/kg body weight. The 45 day experimental period was broken into 7 days of habituation, 8 days of medication and 30 days of additional feeding without antibiotics. The erythromycin concentration in the flounder muscle had been increased gradually with medication. After 5 days of medication, the concentration increased to its maximum level of 6.05 mg/kg. After discontinuing the antibiotic, the erythromycin concentration decreased drastically and day 9 was below 0.1 mg/kg. The erythromycin concentration had slowly declined from the 6th to the 20th day after medication and disappeared completely after 25 days. From these results, the time needed to reduce the erythromycin level to the 0.2 mg/kg limit adopted by the ED and Japan was suspected to be 4-6 days. Therefore, a reasonable withdrawal time following ED and Japanese regulatory guidelines for erythromycin in the cultured flounder could be estimated to be 10 days.
In Paralichthys olivaceus and Nibea japonica, response to live air (5hr) or ship (25hr) transportation was assessed, by determining the levels of plasma cortisol, glucose, lactic acid and osmolality, as well as hematological parameters namely hematocrit (Ht), red blood cell (RBC) count, hemoglobin (Hb), corpuscular volume (MCV), corpuscular hemoglobin (MCH) and corpuscular hemoglobin concentration (MCHC). In the experimental series I, the olive flounder was subjected to stress or no stress for 1hr, prior to its air transportation for 5hr. The stress suffered by the flounder prior to air transportation resulted in significant reduction in Ht, but increases in MCH and MCHC. Air transportation led to increases in MCV and MCH in both the stressed and non stressed groups. In the non stressed group it led to significant increase in Ht but decrease in MCHC. In the stressed group, the air transportation led to significant increases in osmolality and plasma cortisol from 5 to 38.5ng/$m\ell$. Non stressed groups did not show significant differences in this before and after transportation. In the experiment II, the red blood cell (RBC) count ranged from 2.5$\times$10$^{6}$ /${mu}ell$ to 2.7$\times$10$^{6}$ /${mu}ell$ in the flounder and 1.9$\times$10$^{6}$ /${mu}ell$ to 2.1$\times$10$^{6}$ /${mu}ell$ in the croaker during the pre- and post-transportation, respectively. In the croaker the shipping led to significant increase in plasma cortisol from 26 to 35ng/$m\ell$ but decrease in glucose from 91.0 to 26.4mg/㎗. For glucose the reverse (39.0 to 51.0mg/㎗) was true for the flounder.
한국산(통영, 여수)과 일본산(나가사키) 넙치(Paralichthys olivaceus)의 체지방량 및 혈청지질을 분석한 결과, 표준체장과 체중의 평균치는 각각 유의한 차이가 없었다. 체장을 제외한 상대적인 체중에서는 나가사키산>여수산>통영산 넙치의 순위로, 일본산 넙치가 한국산 넙치에 비해 체중이 많았으며, 어체 밀도의 평균치에서는 국가간, 지역간에 유의한 차이가 없었다. 각 체구성 성분은 일본 나가사키산의 넙치가 한국의 여수, 통영산 넙치에 비해 체수분량이 적었고, 체지방량과 체단백질량은 많았다. 그러나 체장의 요인을 제외하고 비교하면, 체수분량, 체지방량, 체단백질량은 각각 나가사키산>여수산>통영산 넙치의 순서로 많았고, 일본산이 한국산에 비하여 근육량도 많은 특징을 나타내었다. 혈청중의 지질량에서, cholesterol양은 여수산 넙치가 많았고, triglyceride 양은 나가사키산 넙치에서 많았다. 또한, 혈청중의 lipoprotein은 전기영동상에서 나가사키산 넙치가 통영산 넙치에 비하여 LDL이 더 많았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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