Effects of the two oriental medicinal prescriptions, Jahyulyangeuntang (JH) and Yanghyuljangeunkeonbohwan (YH), on intestinal calcium absorption were examined in the human colon carcinoma tell line, Caco-2 cells. Intestinal calcium absorption was evaluated at the level of Ca uptake into the cells across the brush border membranes, as well as at the level of net Ca transport (implying the amount of intestinal Ca transported into the blood stream). When the Caco-2 cells were incubated for 4, 8, 16 and 24 days post seeding, the cells were differentiated continuously, and showed progressively increased activities of Ca uptake (1.13 $\pm$ 0.04, 1.19 $\pm$ 0.02, 1.94 $\pm$ 0.03, and 2.40 $\pm$ 0.12 nmole.mg protein$^{-1}$ .30 min$^{-1}$ , respectively). Pretreatment of confluent Caco-2 cells with 50 $\mu\textrm{g}$/ml of YH for 24 hours resulted in a 30% increase in Ca uptake (p < 0.07), while pretreatment of the cells with the same concentration of JH for 6 hours resulted in a 24% increase (p < 0.05) in Ca uptake, compared to the value for the control cells (2.34 $\pm$ 0.10 nmole.mg protein$^{-1}$ .30 min$^{-1}$ ). When the cells were pretreated with varied concentrations (5-100 $\mu\textrm{g}$/ml) of the test samples for 6 hours, maximal increases in Ca uptake were observed in the cells pretreated with 100 $\mu\textrm{g}$/ml of YH (a 23% increase), and 50 $\mu\textrm{g}$/ml of JH (a 28% increase), respectively : however, no influence was seen on the net Ca transport activity. These results show that pretreatment with JH or YH, the two oriental medicinal prescriptions commonly used for improvement of bone metabolism, could possibly increase Ca accumulation inside the cells. but not the intestinal Ca net transport in vitro.
A strong constitutive $P_{JH}$ promoter from Bacillus was applied to overexpress the end oxylanase gene in Bacillus subtilis. The expression plasmid, pJHKJ4, was designed to contain the $P_{JH}$ promoter and endoxylanase promoter $(P_B)$, and introduced into Bacillus subtilis DB431 The total activities of the enzymes reached about 140 unit/ml by cultivation of B. subtilis DB431 harboring pJHKJ4 in LB glucose medium. Ultrafilteration is effective its yield is 70%.
A strong constitutive $P_{JH}$ promoter from Bacillus sp. was applied to overexpress the endoxylanase gene in Bacillus subtilis. The expression plasmid, pJHKJ4, was designed to contain the $P_{JH}$ promoter and open reading frame of endoxylanase including its own promoter. The plasmid was introduced into B. subtilis DB431 and the resulting transformant was grown on LB glucose medium. The endoxylanase activity in the culture supernatant reached about 140 unit/ml. The enzyme in the supernatant was efficiently concentrated to 70% by two-step treatments of ammonium sulfate saturation and ultrafiltration. The stabilization of concentrated enzyme solution at different storage temperatures was examined with various stabilizers such as NaCl, $CaCl_2$, sucrose, sorbitol, polyethylene glycol, and Tween-80.
The production of astaxanthin by Xanthophyllomyces dendrorhous mutant depended on the culture conditions. Therefore, a cultivation strategy, including effective chemical and light induction, for the high-level production of astaxanthin by X. dendrorhous mutant JH1 was explored. Effective chemicals such as ethanol, acetic acid, and hydrogen peroxide, which are known inducers or precursors of astaxanthin synthesis, were investigated for their increase of astaxanthin production. Each of 1.0% ethanol, 1.0% acetic acid, and 1.0% hydrogen peroxide increased the astaxanthin concentration to 49.77 mg/l, 46.33 mg/l, and 45.61 mg/l, respectively. Among these chemicals, 1.0% ethanol showed the best effect on increasing astaxanthin concentration after 48 h of cultivation. Under 1.0% ethanol feeding condition, high light intensity (2,400 lux) stimulated astaxanthin production to 59.67 mg/l, compared with that in the dark-grown cultivation.
Sampling of the ground beetles in four 'gotjawal' terrains of Jeju island was conducted from April to October, 2007, using pit-fall trap. Totally 2,887 individuals of 23 species belonged to 4 families were collected. The species diversity index was the highest at Aeweol gotjawal (AW), while it was the lowest in Hangyeong-Andeog gotjawal (HA). Clustering analysis revealed that the insect communities of four gotzawals were grouped in only one cluster. Jocheon-Hamdeog gotjawal (JH) formed a cluster with Gujwa-Sungsan gotjawal (GS) at the lowest chord distance (0.24). At the higher chord distance of 0.50, AW fused the cluster of JH and GS. HA fused with the rest three terrains, forming a single cluster at the highest chord distance of 0.98.
An extracellular protease was purified to homogeneity from the culture supernatant of psychrotrophic bacteria Bacillus sp. JH 108 using procedures including ammonium sulfate fractionation, anion exchange chromatography, gel filtration chromatography, and cation exchange chromatography. The enzyme exhibited a molecular weight of 36 kDa, an optimum pH of 8 to 9, and optimum temperature of $60^{\circ}C$. The enzyme preferentially hydrolyzed leucine at the N-terminus of peptides and thus can be classified as an aminopeptidase. It was strongly inhibited by metal chelating agents such as EDTA and l, l0-phenanthroline. The activity lost by EDTA was restored with $Zn^{2+}{\;}or{\;}Co^{2+}$. These divalent cations also stimulated the native enzyme. This suggests that the enzyme is a metalloprotease acting as a leucine aminopeptidase.
Juvenile honnone binding protein (JHBP) was identified in the last instar larval hemolymph of Lymantria dispar using dextran coated charcoal (DCC) binding assay and gel filtration. The p1 value of JHBP was estimated to be 5.3. JHBP was partially pudfied by polyethylene glycol(PEG) precipitation, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography and gel filtration, and was confirmed by DCC binding assay.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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