Effects of the Oriental Medicinal Prescriptions, Jahyulyangeuntang and Yanghyuljangeunkeonbohwan, on Calcium Absorption in the Human Colon Carcinoma Cell Line (Caco-2 Cells)

Effects of the two oriental medicinal prescriptions, Jahyulyangeuntang (JH) and Yanghyuljangeunkeonbohwan (YH), on intestinal calcium absorption were examined in the human colon carcinoma tell line, Caco-2 cells. Intestinal calcium absorption was evaluated at the level of Ca uptake into the cells across the brush border membranes, as well as at the level of net Ca transport (implying the amount of intestinal Ca transported into the blood stream). When the Caco-2 cells were incubated for 4, 8, 16 and 24 days post seeding, the cells were differentiated continuously, and showed progressively increased activities of Ca uptake (1.13 $\pm$ 0.04, 1.19 $\pm$ 0.02, 1.94 $\pm$ 0.03, and 2.40 $\pm$ 0.12 nmole.mg protein$^{-1}$ .30 min$^{-1}$ , respectively). Pretreatment of confluent Caco-2 cells with 50 $\mu\textrm{g}$/ml of YH for 24 hours resulted in a 30% increase in Ca uptake (p < 0.07), while pretreatment of the cells with the same concentration of JH for 6 hours resulted in a 24% increase (p < 0.05) in Ca uptake, compared to the value for the control cells (2.34 $\pm$ 0.10 nmole.mg protein$^{-1}$ .30 min$^{-1}$ ). When the cells were pretreated with varied concentrations (5-100 $\mu\textrm{g}$/ml) of the test samples for 6 hours, maximal increases in Ca uptake were observed in the cells pretreated with 100 $\mu\textrm{g}$/ml of YH (a 23% increase), and 50 $\mu\textrm{g}$/ml of JH (a 28% increase), respectively : however, no influence was seen on the net Ca transport activity. These results show that pretreatment with JH or YH, the two oriental medicinal prescriptions commonly used for improvement of bone metabolism, could possibly increase Ca accumulation inside the cells. but not the intestinal Ca net transport in vitro.

자혈양근탕 및 양혈장근건보환이 인체 소장 상피세포주 (Caco-2) 모델에서 칼슘 흡수에 미치는 영향

본 논문에서는 자혈양근탕 (滋血養筋湯, JH) 및 양혈장 근건보환 (養血壯筋健步丸, YH) 처방제가 장내 칼슘흡수에 미치는 영향을 살펴보고자 인체 소장상피세포주 모델인 Caco-2 세포를 이용하여 칼슘 uptake와 net transport를 각기 평가하였으며. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 첫째, Caco-2 세포를 분주 후 4, 8, 16. 그리고 24일간 배양하면서 칼슘 uptake 활성을 측정 한 결과 분화가 진행될수록 uptake 활성이 증가하였다. 둘째. Caco-2 세포에 한약처방제를 50 $\mu\textrm{g}$/ml 농도로 일정시간 동안 전처리하여 칼슘 uptake 활성을 측정한 결과, YH 처방제는 24시간 전처리 시 (29.9% 증가), 그리고 JH처방제는 6시간 전처리 시 (23.9%증가) 한약처방으로 전처리하지 않은 대조세포에 비해 칼슘 uptake가 유의적으로 증가하였다. 셋째. 한약처방의 농도를 달리하면서 6시간 동안 전처리한 후 칼슘 Uptake활성을 측정한 결과, 대조세포에 비해 YH 또는 JH 처방제는 100 $\mu\textrm{g}$/ml (23% 증가) 및 50 $\mu\textrm{g}$/ml 농도 (28.3% 증가)에서 칼슘 uptake 활성을 각기 최대로 증가시켰다. 넷째, YH 또는 JH 처방제가 Caco-2 세포에 의한 칼슘 net transport에 미치는 영향을 평가하기 위해 5, 50, 100 $\mu\textrm{g}$/ml농도의 한약처방제로 6시간동안 Caco-2세포에 전처리한 결과, 두가지 한약처방제 모두 칼슘 net transport에 유의적인 변화를 초래하지 않았다. 이상의 in vitro연구결과는 양혈 및 양근작용에 관여하는 자혈양근탕 및 양혈장근건보환 처방제가 소장상피세포를 통한 칼슘 uptake 활성은 증가시킨 한편 칼슘 net transport 활성에 변화를 초래하지 않았고. 결과적으로 장내 칼슘 흡수에 유의적인 영향을 미치지 않았음을 제시하는 것이다