사람의 섬유아세포인 GM10에서 glucose 농도에 따른 IGFBP-5의 존재와 발현에 미치는 영향을 살펴보고 당뇨병과 관련된 in vitro model system으로서의 활용 가능성을 검토하고자 하였다. 섬유아세포인 GM10 세포를 시용하여 glu-cose 배양 조건에 따른 IGFBP-5의 존재와 발현에 미치는 영향을 살펴보았다. 그 결과, IGFBP-5의 단백질 수준은 고농도 glucose 배양 조건에서 증가하였으나, IGFBP-5 mRNA 발현에는 아무런 영향을 나타내지 않았다. IGFBP-5 protease 활성은 고농도 glucose 배양 조건에서 높았다. IGF- I 과 인슐 린은 IGFBP-5 protease 활성에 관여하는 것으로 보여지며, GM10 세포에 있어서 IGFBP-5의 분해에는 serine protease 뿐만 아니라 metalloprotease가 관여하는 것으로 나타났다. 또한, gelatin zymography를 통한 protease 활성은 고농도 glucose 배양 조건에서 크게 나타났으며, 시간 의존적으로 증가하였다. 본 연구 결과를 바탕으로 IGFs와 같은 세포 성장인자에 대한 연구는 세포수준의 당뇨병과 관련된 in vitro model system이 가능하리라고 여겨지며 더 많은 연구가 진행되어야 할 것으로 보인다.
Insulin-like growth factors (IGFs), along with IGF-binding protein and IGF receptor, are well-known regulators in the growth and survival of vertebrates. In this study, we investigated the involvement of IGFs and protein variation during embryonic development of the olive flounder (Paralichthys olivaceus). Morphological stages were divided into six main developments as blastula, gastrula, cephalization, cranial regionalization, tail lift, and hatch. During embryonic development, protein variation was investigated using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry/mass spectrometry. In addition, the mechanism of signaling of IGF-I receptor was examined using immuno-blot analysis. We found marked changes in protein expression at four stages of embryonic development and identified proteins as belonging to the vitellogenin 2 family. As development progresses, expression of IGF-II, phosphotyrosine, and phospho-Akt increased, while expression of growth factor receptor-bound protein 2 (GRB2) and one of guanine-nucleotide-binding proteins (Ras) decreased. These results provide basic information on the IGF system in the embryonic development of the olive flounder.
Kita, K;Shibata, T.;Nagao, K.;Hwangbo, J.;Okumura, J.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제15권3호
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pp.406-409
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2002
The effect of refeeding with various single essential amino acids on the recovery of plasma insulin-like growth factor-I (IGF-I) concentration in fasted young chickens was examined. Young chickens (29 days of age) were divided into 15 experimental groups. Chickens in one group were fed on the commercial diet ad libitum for 4 days. The remaining 56 chickens in 14 experimental groups were fasted. After 2 days of fasting, 52 chicks in 13 fasted groups were refed with one of the following experimental diets for 2 days. Eleven experimental diets were protein-free diets supplemented with one of 11 essential amino acids (Arg, Gly, His, Ileu, Leu, Met, Phe, Lys, Thr, Trp, Val). The remaining 2 experimental diets were a protein-free diet containing 11 essential amino acids and a protein-free diet not supplemented with amino acids. Birds in the remaining fasted group continued to be fasted for 2 days. Fasting for 2 days markedly reduced plasma IGF-I concentration. When fasted chickens were refed the protein-free diet containing either Gly alone or all essential amino acids, plasma IGF-I concentration was recovered to the level similar to that of fed chickens. Protein-free diet alone, however, failed to restore the reduced IGF-I concentration in plasma. Body weight loss modulated by feeding with protein-free diets supplemented with various single essential amino acids was associated with changes in plasma IGF-I concentrations. We concluded that body weight loss by feeding with a protein-free diet was lower than that of fasted chickens and that body weight loss associated with the decrease in plasma IGF-I concentration was modulated by feeding with protein-free diets containing various single essential amino acids.
본 연구는 Wistar계 rat를 이용하여 포유기간 중 제한포유시기와 이유시기를 조절하여, 혈중 IGF- I 수준변화에 대해 검토하였다. NL군 (NL)은 포유자의 수를 8 마리로 조절하였으며, RL군 (RL)과 W군 (W)은 RL0, RL0, RL10, RLl5 및 RL20, 그리고 W0, W5, WI0, W15 및 W20으로 각각 5개 군으로 구분하여, RL군은 각 개시일에 포유자의 수를 8마리에서 4마리로 조절하였으며, W군은 각 개시일에 포유자의 수를 완전히 이유시켜 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. NL군의 혈중 IGF-I 농도는 분만직후 (Day 0) 750.59$\pm$3.52ng/$m\ell$ 을 나타내어 15일까지 일정한 수준을 유지하다가 그 후 포유 25일에 1,690.20$\pm$4.42ng/$m\ell$ 까지 증가되었다. 2. 포유초기 RL군 (RL0, RL5)의 IGF- I 농도는 포유 10일에 RL0군과 RL5군에서 각각 1,395.90$\pm$3.45 및 1,351.73$\pm$3.23ng/$m\ell$로서 NL 군의 745.96$\pm$2.24ng/$m\ell$ 보다 유의적 (P<0.05)으로 높게 나타났으나 포유 15일부터는 차이가 없었다. 3. 포유초기 W군의 IGF- I 농도는 이유 후 일주일 정도는 NL군에 비해 높은 수준 (P<0.05)을 나타내다가 10일경에 NL군과 같은 수준으로 감소하였다. 포유자극의 강약은 난소의 생리적 변화와 함께 혈중 IGF- I의 농도를 조절하는 것으로 사료된다.
To determine whether Insulin-like growth factor (IGF-I) treatment represents a potential means of enhancing the survival of cardiac muscle cells from adriamycin (ADR)-induced cell death, the present study examined the ability of IGF-I to prevent cell death. The study was performed utilising the embryonic, rat, cardiac muscle cell line, H9C2. Incubating cardiac muscle cells in the presence of adriamycin increased cell death, as determined by MTT assay and annexin V-positive cell number. The addition of 100 ng/mL IGF-I, in the presence of adriamycin, decreased apoptosis. The effect of IGF-I on phosphorylation of PI, a substrate of phosphatidylinositol 3-kinase (PI 3-kinase) or protein kinase B (AKT), was also examined in H9C2 cardiac muscle cells. IGF-I increased the phosphorylation of ERK 1 and 2 and $PKC{\;}{\zeta}{\;}kinase$. The use of inhibitors of PI 3-kinase (LY 294002), in the cell death assay, demonstrated partial abrogation of the protective effect of IGF-I. The MEK1 inhibitor-PD098059 and the PKC inhibitor-chelerythrine exhibited no effect on IGF-1-induced cell protection. In the regulatory subunit of PI3K-p85- dominant, negative plasmid-transfected cells, the IGF-1-induced protective effect was reversed. This data demonstrates that IGF-I protects cardiac muscle cells from ADR-induced cell death. Although IGF-I activates several signaling pathways that contribute to its protective effect in other cell types, only activation of PI 3-kinase contributes to this effect in H9C2 cardiac muscle cells.
Two experiments were carried out to study the effects of dietary energy level on nutrient digestion, nitrogen (N) utilization, growth performance, insulin-like growth factor-I (IGF-I), and insulin-like growth factor binding protein-3 (IGFBP-3) in plasma, liver and longissimus dorsi muscle in growing-finishing pigs. In experiment 1 (Exp 1), 15 castrated male pigs (Duroc${\times}$Landrace${\times}$Large White) (Body weight, BW, 55.6${\pm}$1.8 kg) were divided into three groups and fed rations containing 13.33, 14.87 and 17.35 MJ digestible energy (DE)/kg as treatments I, II and III, respectively, using soybean oil as an energy source. The experiment lasted 8 days and faecal and urinary samples were collected during the last 3 days. The results showed that the digestibility of dry matter (DM), energy and N was increased from treatments I to III (p<0.01). N-retention and N-retention rate were not influenced by dietary DE level (p>0.05). In experiment 2 (Exp 2), 36 female pigs (Duroc${\times}$Landrace${\times}$Large White) (BW 41.5${\pm}$3.8 kg) were divided into three groups. The pigs were fed with the same three rations used in Exp 1 for 60 days. At the end of Exp 2, eight pigs were selected from each group for blood sampling and 4 pigs for slaughter trial. The results indicated that average daily feed intake (ADFI) and N-intake were significantly decreased (p<0.01), and DE intake (p<0.01) and average daily gain (ADG) (p<0.05) were increased. IGF-I and IGFBP-3 in plasma were increased (p<0.05). No significant differences in IGF-I and IGFBP-3 in liver and longissimus dorsi muscle were found between different treatments. It was concluded that higher dietary DE level improved nutrient digestibility, ADG and feed/gain ratio when soybean oil was used as an energy source in the ration of growing-finishing pigs. No significant differences were found in Nretention and IGF-I and IGFBP-3 in liver and longissimus dorsi muscle between different treatments.
사람의 섬유아세포인 GM10을 사용하여 glucose의 배양조건에 다른 물질대사 및 IGFBP-3 발현을 살펴본 결과, glucose 농도에 따른 glucose 소비와 triglyceride 축적 수준은 고농도 glucose 배양 조건에서 증가한 반면, 총 단백질 함량은 고농도 glucose배양 조건에서 시간의 경과에 따라 감소하였다. 또한 고농도 glucose 배양 조건에서 5일 동안 배양한 세포 배양액내의 유리아미노산 함량은 저농도보다 고농도 glucose 배양 조건에서 높게 나타났다. IGFBP-3 단백질 수준과 mRNA수준은 저농도 glucose배양 조건에서 증가하였으나, IGFBP-3 단백질 분해효소에 따른 영향은 없었다. 이상의 결과에서 glucose 배양조건에 따른 물질대사는 부분적으로 세포를 이용한 당뇨병 모델 실험에서 in vivo와 같은 결과를 얻지 못하였지만, IGFs와 같은 세포 성장인자에 대한 연구를 통해 세포수준의 당뇨병 모델화가 가능하다고 여겨진다.
The ultimate goal of periodontal treatment has been to facilitate regeneration of diseased periodontal tissues, destroyed by inflammatory periodontal disease. For regeneration of the periodontium to occur, all of component tissues must be restored to their original position and architecture. Growth factors which were known to promote the cellular processes, ie, proliferation, migration and matrix synthesis, have been in the spotlight of current periodontics. Platelet-derived growth factor(PDGF) stimulates collagen and non collagen protein synthesis, migration and proliferation of periodontal ligament cells. Insulin-like growth factor(IGF) has potentials to induce collagen and bone matrix synthesis so that it regulates normal bone remodeling. Application of the combination have been known to facilitate formation of bone and cementum, and to synergistically interact to promote coronal migration and proliferation of periodontal ligament cells. These two growth factors have been reported to exhibit positive effect in the periodontally diseased teeth or class m furcation defects. The aim of the present study was to test the hypothesis that PDGF-BB alone or the combination of PDGF-BB and IGF-I can predictably enhance regeneration of the periodontium in the dehiscence defect. Following the resection of premolars, roots were embedded. After 12 weeks of healing period, standardized experimental $4{\times}4mm$ dehiscence defects were created on the mid-facial of the premolar roots in each of 4 young adult dogs. In control group, only methylcellulose gel was inserted in the defects. In experimental group I and II, gel with $2{\mu}g$ of PDGF-BB or $2{\mu}g$ of PDGF-BB and $1{\mu}g$ of IGF-I was inserted in the defects, respectively. At 8 weeks postsurgery, the dogs were sacrificed. The results were observed histologically and analyzed histomorphometrically.The results of this study were as follws. 1. The new cementum formation was $1.26{\pm}0.69mm$ in the control group, $1.80{\pm}0.84mm$ in the experimental group I, $1.93{\pm}0.51mm$ in the experimental group II. The experimental group III, the experimental group I, the control group were in the order of cementum formation without statistically significant differences between control and all experimental groups. 2. The new bone formation was $1.00{\pm}0.53mm$ in the control group, $1.53{\pm}0.63mm$ in the experimental group I, $l.33{\pm}0.45mm$ in the experimental group II. The experimental group I, the experimental group II, the control group were in the order of bone formation without statistically significant differences between control and all experimental groups. 3. The root resorption was $1.12{\pm}0.64mm$ in the control group, $1.34{\pm}0.73mm$ in the experimental group I, $0.79{\pm}0.59mm$ in the experimental group II without statistically significant differences between control and all experimental groups. These results suggested that the use of PDGF-BB alone or PDGF-BB and IGF-I in the dehiscence defects might facilitate periodontal regeneration in some degree, but has not shown statistically significant results.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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