• 한국어병학회지
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• 제23권1호
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• pp.1-8
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• 2010

무지개 송어 발안란의 이동 이력과 IHNV G gene 염기서열의 계통학적 분석에 의해 IHNV의 국내 이동에 대해서 처음으로 조사되었다. IHNV RtWanju09 분리주는 IHNV RtPy91과 RtJe00의 JRt Shizuoka lineage에 속하는 것으로 나타났으며, 강원도에서 분리된 IHNV RtPy91과 RtWanju09 사이의 G gene의 유전적 차이는 1.77%였고, 약 20년간 우리나라의 JRt Shizuoka lineage에 속하는 한국 분리주들은 최대 3.03%의 유전적 차이를 나타내 계속적으로 바이러스가 진화하는 것을 알 수 있었다. 또한 전라북도 지역에서 분리된 IHNV RtWanju09 분리주는 IHNV가 오염된 강원도 지역산 발안란이 전라북도에 전파되었을 것으로 사료된다.

• 한국어병학회지
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• 제7권1호
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• pp.13-22
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• 1994

우리나라에 존재하며 외국에서 분리된 것과 다른 특성을 보이는 IHNV를 대상으로 하여 이 바이러스의 면역유도단백질을 확인하고자 하였다. 먼저 우리나라에서 분리된 4종류의 IHNV를 미국에서 분리된 3종류의 IHNV(OSV, SRCV 및 RB-76)와 SDS-PAGE상에서 구조단백질의 크기와 혈청학적 특성 등을 비교하였다. 그 결과 우리나라에서 분리된 4종류의 IHNV중 2종류(PRT, MRT)의 IHNV는 미국에서 분리된 IHNV와 차이가 있었으며 (Park et al., 1993), IHNV-PRT를 대상으로 면역유도단백질을 확인하기 위해 IHNV-PRT에 대한 monoclonal antibodies(MAbs)를 만들었다. 이들 중 4종류의 hybridoma를 선택하여 hybridoma cell들이 분비하는 MAbs가 어떤 class인지를 ELISA 실험을 통하여 확인한 결과 4종류 모두 IgG class에 속하는 것으로 확인되었다. 이와같이 만들어진 4종류의 MAbs가 IHNV-PRT 구조단백질들 중 어떤 것에 대한 것인지를 western blotting 실험을 통해 확인한 결과, 2종류의 MAbs는 G단백질과 특이성이 있는 것들이었고, 나머지 2종류는 G보다 조금 큰 size의 단백질에 대한 것들이었다. 다음은 IHNV-PRT에 감염된 무지개송어의 혈청을 뽑아 여기에 존재하는 IHNV-PRT에 대한 항체를 western blotting 방법으로 분석을 한 결과 G, $M_1$, $M_2$ 및 G 보다 조금 큰 size의 단백질에 대한 항체가 존재하는 것으로 나타났다. 이상의 결과로부터 IHNV-PRT의 구조단백질들 중 G, $M_1$, $M_2$ 및 G 보다 조금 큰 size의 단백질들이 면역 유도 특성이 있음을 확인할 수 있었다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제8권3호
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• pp.122-127
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• 2005

A DNA chip that rapidly and accurately detects the viral genes in rhabdovirus-infected fish was developed. The N, Ml, and G proteins of three rhabdovirus strains, infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), and flounder rhabdovirus (HIRRV), were selected for use as probes. The sequences of the corresponding genes were obtained, and probes were prepared by PCR using specific primer sets. The specificity of the probes was confirmed by cross PCR. The prepared probes were spotted on poly-L-lysine- or aminosilane-coated glass slides and hybridized with target DNA under several different conditions in order to determine the optimal hybridization temperature, glass-slide coating, and target cDNA concentration.

• 한국어병학회지
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• 제33권2호
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• pp.163-169
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• 2020

Snakehead rhabdovirus (SHRV) is different from other fish novirhabdoviruses such as viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), and hirame rhabdovirus (HIRRV) in that it replicates at high temperatures. Therefore, the delivery of foreign proteins to fish living at high water temperature would be possible by using recombinant SHRVs. In the present study, to evaluate the possible use of SHRV as a vehicle for foreign proteins delivery, we generated a recombinant SHRV that contains an enhanced-GFP (eGFP) gene between nucleoprotein (N) and phosphoprotein (P) genes (rSHRV-A-eGFP), and another recombinant SHRV expressing two heterologous genes by inserting an eGFP gene between N and P genes, and mCherry gene between P and M genes (rSHRV-AeGFP-BmCherry). Epithelioma papulosum cyprini (EPC) cells infected with the recombinant SHRVs showed strong fluorescence(s), suggesting the possible availability of recombinant SHRVs for the development of combined vaccines by expressing multiple foreign antigens.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제1권2호
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• pp.187-191
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• 1998

Chemotherapy can not be applied for the control of fish viral diseases because viruses depend on host machinery for their replication. Although new control strategies including vaccination are under development, avoidance of virus introduction by rapid and correct diagnosis is the best way of fish viral disease control. Although observation of virus particles with an electron microscope is an easy method for virus detection, it take a few days for the sample preparation. In order to shorten the sample preparation time, microwave radiation was applied in the procedure. With this method, 15 seconds was enough for fixation of virus infected fish samples or cultured cells inoculated with infectious hematopoietic necrosis virus, which takes 2-4 hours with routine methods. Also four minutes was enough for polymerization of embedding resin which takes 24-48 hours with routine methods. Samples prepared with microwave were good enough for direct electron microscopic observation and immunogold labeling assay.

• 한국어병학회지
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• 제34권2호
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• pp.123-131
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• 2021

IHNV는 국내 연어 양식업에서 경제적 손실을 발생시켜왔으며, 연어과 어류에 높은 폐사율을 초래한다. 본 연구에서는 강원도의 연어과 어류로부터 분리된 IHNV 분리주의 계통발생적 분류와 병원성을 조사하였다. 계통발생학적 분석은 IHNV의 303bp를 해당하는 mid-G 영역을 염기 분석하여 수행되었다. 바이러스주 모두 J 유전자형으로 RTDH1709, RTJS1709, MSOK1711, RTYK1711, RTCC1801 그리고 RTHC1802는 J-Nagano형이며, RTYK1801는 J-Shizuoka형에 속하는 것으로 확인되었다. 이러한 결과는 이전 연구와 일치하게 강원도에서는 두 가지 유전형이 분포한다는 것을 시사한다. 또한, 6개 분리주를 무지개송어 치어의 복강에 주사하여 병원성을 시험한 결과, J-Nagano형인 RTCC1801와 RTJS1709 바이러스주로 주사된 그룹은 100%의 폐사율을 나타냈다. 그 뒤로, J-Nagano형인 RTHC1802, RTDH1709 그리고 MSOK1711 분리주가 주사된 그룹들은 50%, 30% 그리고 20%의 폐사율을 나타났다. 그러나 J-Shizuoka형인 RTYK1711 분리주와 대조군에서는 폐사가 발생하지 않았다. 이러한 결과는 J-Shizuoka형이 J-Nagano형 바이러스 분리주보다 높다고 보고한 기존의 연구결과와 상반되며 J 유전자형 내에서 유전자형과 병원성간의 상관관계가 없는 것을 시사한다. 하지만 본 연구에서는 1개의 J-Shizuoka형 분리주만이 분석되었기 때문에 J 유전자형 내에서 유전자형과 병원성간의 상관관계를 확실하게 알기 위해서는 J 유전자형의 병원성에 대한 추가 조사가 필요할 것으로 보인다.

• 한국어병학회지
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• 제32권2호
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• pp.59-67
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• 2019

본 연구에서는 넙치(Paralichthys olivaceus)로부터 분리한 바이러스성출혈성패혈증바이러스(viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV, genotype IVa)에 대한 단클론 항체(monoclonal antibody, MAb)를 개발하였다. VHSV에 대한 항체를 생산하는 총 5개의 hybridoma clone을 생산하였다. 4개의 MAbs (2C10, 18H4, 23H6, 30B7)는 glycoprotein을 인식하였고, MAb 15E10은 nucleocapsid protein을 인식하였다. 5개의 MAbs는 western blot 상에서 VHSV에 감염된 세포와 넙치시료에 반응하였으나, 정상 세포와 넙치시료에는 반응하지 않았다. 또한 ELISA상에서 VHSV에만 반응하였고 6종의 어류바이러스(IHNV, HIRRV, SVCV, IPNV, MABV, NNV)에는 반응하지 않았다. 이상의 결과, 본 연구에서 제작된 MAbs는 VHSV에만 특이적으로 반응하는 것이 확인되어 VHSV를 검사하는데 사용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국어병학회지
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• 제25권3호
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• pp.257-262
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• 2012

본 연구에서는 어체내 IHNV 모니터링에 LAMP법의 사용이 가능 하는지를 검토하기 위해 IHNV를 무지개송어에 인위적으로 감염시킨 후 시간 경과에 따라 LAMP법과 어류세포를 사용한 분리배양법을 이용하여 IHNV 검사를 실시하였다. IHNV를 $10^{6.5}\;TCID_{50}$/fish, $10^{5.5}\;TCID_{50}$/fish, $10^{4.5}\;TCID_{50}$/fish로 복강 주사한 결과, 40%, 0%, 0%의 누적폐사율이 관찰되었다. 폐사어 및 IHNV 접종 후 16일과 28일째에 각 실험구에서 채집한 생존어 5마리를 대상으로 한 IHNV 검사 결과, 폐사어에서 IHNV가 100% (8/8 마리) 분리되었고 (감염가: $10^{4.3}-10^{6.8}\;TCID_{50}/ml$), RT-LAMP법에서도 100% 검출되었다. 16일째 생존한 개체를 대상으로 한 IHNV 검사 결과에서는 $10^{6.5}\;TCID_{50}$/fish, $10^{5.5}\;TCID_{50}$/fish, $10^{4.5}\;TCID_{50}$/fish의 IHNV로 접종한 실험구에서 각각 60% (3/5 마리, 감염가: $10^{2.8}-10^{5.05}\;TCID_{50}/ml$), 20% (1/5 마리, $10^{1.05}\;TCID_{50}/ml$), 60% (3/5 마리, $10^{1.05}-10^{4.8}\;TCID_{50}/ml$) 의 검출율을 보였으나 LAMP법에서는 20% (1/5 마리), 0% (0/5 마리), 20% (1/5 마리) 의 검출율을 나타내었다. 28일째 생존한 개체 및 대조구의 어류에서는 IHNV가 분리 검출되지 않았다. 이상의 연구결과로 LAMP법은 IHNV-생존어에서 바이러스를 모니터링 하는데 한계가 있으나 병어로부터 IHNV를 검출하는데 유용하게 사용될 수 있을 것으로 사료되었다.

• 한국어병학회지
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• 제37권1호
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• pp.9-15
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• 2024

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with two Novirhabdovirus antigens (viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV and infectious hematopoietic necrosis virus, IHNV) was used to detect specific antibodies against VHSV from olive flounder (Paralichthys olivaceus) sera. In ELISA plates with VHSV culture supernatants (VHSV-Ag plate), optical density (OD) values for sera from olive flounder with VHS history (VHS sera) ranged from 0.64±0.36, and those of sera from fish without VHS history (non-VHS sera) ranged from 0.26±0.26. In IHNV-Ag plate, the OD values (0.43±0.28) for VHS sera were quite low compared to those in VHSV-Ag plates, while the OD values for non-VHS sera were almost similar. When the OD values for each serum were calculated by subtracting the OD values in the IHNV-Ag plate from those in the VHSV-Ag plate, the corrected OD values were significantly different between VHS sera and non-VHS sera. The results were completely in line with fish histories of VHS epizootics. It was considered that the corrected OD values may represent the true values recognized by VHSV-specific antibodies.

• 한국어병학회지
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• 제28권2호
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• pp.113-116
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• 2015

A $0.45-{\mu}m$ membrane filter is generally used to remove bacterial contamination during virus extraction from fish samples. However, the number of fish viruses is drastically reduced after filtration with a $0.45{\mu}m$ filter. In this study, we investigated the effect of filters on virus infectivity titer and the change in virus titer and bacterial number following different centrifugation conditions to determine a suitable procedure for virus extraction from fish samples. $10^{4.05}$ and $10^{5.05}TCID_{50}/ml$ of infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) and $10^{4.05}$ and $10^{4.55}TCID_{50}/ml$ of Oncorhynchus masou virus (OMV) were not detectable after filtration with two types of $0.45-{\mu}m$ filters, except the IHNV titer was reduced by about 10 fold after filter use (company A). No significant difference was found in the virus titer following centrifugation at $880{\times}g$ (30 min) or $3,500{\times}g$ (30 min), whereas IHNV and OMV titers were reduced by about 10 and 10-1000 fold by centrifugation at $14,000{\times}g$ (30 min) and $14,000{\times}g$ (10 and 30 min), respectively. A total of 97.7-99.9% Escherichia coli were eliminated by centrifugation at $880 {\times}g$ (30 min) and $3,500{\times}g$ (30 min). These results show that fish viruses were affected by filtering, even though the effect differed by virus species and filter type. Therefore, centrifugation at $3,500{\times}g$ (30 min) and use of medium with antibiotics may be useful for virus extraction along with a reduction in bacteria.