Characterization of Immunogens of Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Isolated in Korea

전염성 조혈기 괴사 바이러스(IHNV)의 항원 유도 단백질 특성

To identify the immunogens of a PRT strain of Infectious Hematopoietci Necrosis Virus (IHNV) isolated from cultrued fish in Korea (Park et al, 1993). a panel of 4 monoclonal antibodies (MAbs) against IHNV-PRT strain and two polyclonal antisera from rainbow trout survived IHN disease were prepared. Proteins of purified IHNV-PRT strain were analysed on 10% SDS-PAGE and transferred onto NC paper and were incubated with the antibody solutions. With the polyclonal antibodies, four bands ($M_1$, $M_2$, G and 90Kd) were detected and the band density was in the order of $M_2$ > 90Kd > $M_1$ > G. However, with the MAbs, only two bands(G and 90Kd) were detected. The origin of 90Kd protein was not clear but maybe cell. All the results represented that among the five proteins of IHNV-PRT strain (Park et al., 1993), $M_2$, $M_1$ and G proteins were immunogens and $M_2$ protein was the strongest one.

우리나라에 존재하며 외국에서 분리된 것과 다른 특성을 보이는 IHNV를 대상으로 하여 이 바이러스의 면역유도단백질을 확인하고자 하였다. 먼저 우리나라에서 분리된 4종류의 IHNV를 미국에서 분리된 3종류의 IHNV(OSV, SRCV 및 RB-76)와 SDS-PAGE상에서 구조단백질의 크기와 혈청학적 특성 등을 비교하였다. 그 결과 우리나라에서 분리된 4종류의 IHNV중 2종류(PRT, MRT)의 IHNV는 미국에서 분리된 IHNV와 차이가 있었으며 (Park et al., 1993), IHNV-PRT를 대상으로 면역유도단백질을 확인하기 위해 IHNV-PRT에 대한 monoclonal antibodies(MAbs)를 만들었다. 이들 중 4종류의 hybridoma를 선택하여 hybridoma cell들이 분비하는 MAbs가 어떤 class인지를 ELISA 실험을 통하여 확인한 결과 4종류 모두 IgG class에 속하는 것으로 확인되었다. 이와같이 만들어진 4종류의 MAbs가 IHNV-PRT 구조단백질들 중 어떤 것에 대한 것인지를 western blotting 실험을 통해 확인한 결과, 2종류의 MAbs는 G단백질과 특이성이 있는 것들이었고, 나머지 2종류는 G보다 조금 큰 size의 단백질에 대한 것들이었다. 다음은 IHNV-PRT에 감염된 무지개송어의 혈청을 뽑아 여기에 존재하는 IHNV-PRT에 대한 항체를 western blotting 방법으로 분석을 한 결과 G, $M_1$, $M_2$ 및 G 보다 조금 큰 size의 단백질에 대한 항체가 존재하는 것으로 나타났다. 이상의 결과로부터 IHNV-PRT의 구조단백질들 중 G, $M_1$, $M_2$ 및 G 보다 조금 큰 size의 단백질들이 면역 유도 특성이 있음을 확인할 수 있었다.