이 연구에서는 해산 연체동물의 폐사를 유발하는 기생성 원생동물인 Perkinsus를 신속하고 특이적으로 검출하기 위하여 PCR 진단법을 개발하였다. 이를 위해 Perkinsus 속 4종을 공통적으로 증폭하거나 P. atlanticus만을 특이적으로 증폭할 수 있는 두 가지의 primer를 제작하였다. PCR분석은 기존 Perkinsus 진단법인 fluid thioglycollate medium (FTM) 방법과 2 M NaOH 기법을 병행하여 실시하였다. 실험구로서 전라남도 완도산, 제주도 김녕산, 제주도 서귀포산, 제주도 성산산 바지락과 in vitro 배양된 바지락포자충이 이용되었으며, 대조구로서 전라남도 강진에서 채집된 꼬막, T. granosa을 사용하였다. 실험 결과 Perkinsus특이성 DNA band가 전남 완도산과 제주도 성산산 바지락, in vitro 배양된 바지락 포자충에서 확인되었으나, 대조구였던 꼬막과 제주도 서귀포산, 제주도 김녕산 바지락에서는 나타나지 않았다. 이같은 진단 결과는 FTM과 2M NaOH 진단 결과와 일치하였다. 한편 P. atlanticus에 특이적인 primer에 의해 증폭된 band가 확인됨에 따라 국내산 바지락에서 검출되는 바지락포자충은 P. atlanticus와 동일 종임이 확인되었다. 결론적으로, 본 연구를 통하여 개발된 PCR을 이용한 진단법은 해산 연체동물내 Perkinsus 속 기생충과 P. atlanticus의 감염을 신속하고도 종 특이적으로 진단할 수 있어 수ㆍ출입 수산물의 검역과 바지락 포자충의 생태학적 특성을 규명하는데 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
이 연구에서는 해산 연체동물의 폐사를 유발하는 기생성 원생동물인 Perkinsus를 신속하고 특이적으로 검출하기 위하여 PCR 진단법을 개발하였다. 이를 위해 Perkinsus 속 4종을 공통적으로 증폭하거나 P. atlanticus만을 특이적으로 증폭할 수 있는 두 가지의 primer를 제작하였다. PCR분석은 기존 Perkinsus 진단법인 fluid thioglycollate medium (FTM) 방법과 2 M NaOH 기법을 병행하여 실시하였다. 실험구로서 전라남도 완도산, 제주도 김녕산, 제주도 서귀포산, 제주도 성산산 바지락과 in vitro 배양된 바지락포자충이 이용되었으며, 대조구로서 전라남도 강진에서 채집된 꼬막, T. granosa을 사용하였다. 실험 결과 Perkinsus특이성 DNA band가 전남 완도산과 제주도 성산산 바지락, in vitro 배양된 바지락 포자충에서 확인되었으나, 대조구였던 꼬막과 제주도 서귀포산, 제주도 김녕산 바지락에서는 나타나지 않았다. 이같은 진단 결과는 FTM과 2M NaOH 진단 결과와 일치하였다. 한편 P. atlanticus에 특이적인 primer에 의해 증폭된 band가 확인됨에 따라 국내산 바지락에서 검출되는 바지락포자충은 P. atlanticus와 동일 종임이 확인되었다. 결론적으로, 본 연구를 통하여 개발된 PCR을 이용한 진단법은 해산 연체동물내 Perkinsus 속 기생충과 P. atlanticus의 감염을 신속하고도 종 특이적으로 진단할 수 있어 수ㆍ출입 수산물의 검역과 바지락 포자충의 생태학적 특성을 규명하는데 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
In this study, nuclease-resistant RNA aptamers that are specific for Jurkat T leukemia cells were selected by a subtractive systemic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) method. A randomized nuclease-resistant RNA library was incubated with normal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in each round to preclude RNAs that recognize the common cellular components on the surface of normal and cancer cells. The precluded RNAs were used for the selection of Jurkat T cell-specific aptamers, and the specific RNAs were then gradually enriched from start to the following selections. After 16 rounds of the subtractive SELEX, the selected aptamers were found to preferentially bind to Jurkat T cells, but not to the normal PBMC, evidenced by fluorescence-activated cell sorting analysis. Thus, the subtractive SELEX can be used to identify ligands to cancer-specific biological markers without prior knowledge of the nature of markers. The aptamers could be applied to specific cell sorting, tumor therapy, and diagnosis, and moreover, to find cancer cell-specific markers.
Objective : This study was designed to investigate the interrelationship and clinical usefulness of sperm morphology by strict criteria (SM), acrosome reaction following ionophore challenge test (ARIC) and sperm penetration assay (SPA) using zona-free hamster ova as prognostic factors in in vitro fertilization. Materials and Methods: Semen samples were provided by 83 patients undergoing IVF. We first evaluated the differences between normal fertilization group and poor fertilization group on three andrologic tests. Secondly, we analyzed the relationship between the three andrologic tests and in vitro fertilization on IVF settings. Finally, we evaluated the effectiveness of the three andrologic tests as the prognostic indicators for fertilizing ability. Results: The fertilization rate of all men in the poor fertilization group was less than 30%; but there was no evidence that this poor fertilization was due to oocyte defects. The results of three andrologic tests were significatly higher in normal fertilization group. Fertilization rate (%) in vitro was highly correlated (p<0.001) with % normal sperm by SM, ARIC value (%), and SPA result. By using Receiver-Operator-Characteristic curve (ROC), we evaluated the effectiveness of these three tests. The sensitivity and specificity of SM, ARIC test and SPA in predicting fertilization potential in IVF setting were 76% and 75%, 84% and 90%, and 76% and 95%, respectively. Conclusion: Our data suggest that the three andrologic tests can be reliable tools as prognostic factors of sperm fertilizing ability. Among these test, ARIC test and SPA gave more accurate information on fertilizing capacity. ARIC test was shown to have a predictive value for fertilizing ability comparable to that of SPA that appears to be a simple and cost-effective addition to current andrology laboratory. Combined application of these three tests may give more information on predicting sperm fertilizing capacity.
Heterotopic pregnancy is named when an extrauterine (ectopic) pregnancy coexists with an intrauterine pregnancy simultaneously by many causes such as PID (pelvic inflammatory disease), endometriosis, IUD (intrauterine device), previous pelvic surgery and others. This is very rare in general population, with a range of occurrence estimated between 1:7963 and 1:30000. But recently the incidence has increased as the uses of ARTs (assisted reproductive technologies) including ovulation induction, IVF-ET (in-vitro fertilization and embryo transfer) and GIFT (gamete intrafallopian transfer) increase. Because this has high maternal morbidity, mortality and fetal loss, early diagnosis and proper management is very important. We report a case of heterotopic pregnancy following IVF-ET with a brief review.
Pregnancy and delivery are the God's blessing as well as the right of all married women. But, these are agonizing events for the infertile women. Therefore, supportive nursing care for the infertile women is crucial in the process of diagnosis and treatment of infertility. The introduction of In Vitro Fertilization is a solution for infertility. But we take it serious that such socio-cultural factors as patriarchism, sex role, and motherhood are negatively influencing infertility women's experiences. Thus, nurses who take care of the infertile women need to have feministic perspectives as well as medical information, and expertise so that they could reach a comprehensive understanding on infertile women's experiences.
Targeting of complex system such as human cells rather than biochemically pure molecules will be a useful approach to massively identify ligands specific for the markers associated with human disease such as cancer and simultaneously discover the specific molecular markers. In this study, we developed in vitro selection method to identify nuclease-resistant nucleic acid ligands called RNA aptamers that are specific for human cancer cells. This method is based on the combination of the cell-based selection and subtractive systematic evolution of ligands by exponential enrichment (SELEX) method. These aptamers will be useful for cancer-specific ligands for proteomic research to identify cancer-specific molecular markers as well as tumor diagnosis and therapy.
Objective: The effects of cryopreservation with or without coculture on the in vitro development of blastomere-biopsied 8-cell mouse embryos were investigated. This experimental study was originally designed for the setup of a preclinical mouse model for the preimplantation genetic diagnosis (PGD) in human. Methods: Eight-cell embryos were obtained after in vitro fertilization (IVF) from F1 hybrid mice (C57BL(표현불가)/CBA(표현불가)). Using micromanipulation, one to four blastomeres were aspirated through a hole made in the zona pellucida by zona drilling (ZD) with acid Tyrode's solution (ATS). A slow-freezing and rapid-thawing protocol with 1.5M dimethyl sulfoxide (DMSO) and 0.1M sucrose as cryoprotectant was used for the cryopreservation of blastomere- biopsied 8-cell mouse embryos. After thawing, embryos were cultured for 110 hours in Ham's F-10 supplemented with 0.4% bovine serum albumin (BSA). In the coculture group, embryos were cultured for 110 hours on the monolayer of Vero cells in the same medium. The blastocyst formation was recorded, and the embryos developed beyond blastocyst stage were stained with 10% Giemsa to count the total number of nuclei in each embryo. Results: The survival rate of embryos after cryopreservation was significantly lower in the blastomere-biopsied (7/8, 6/8, 5/8, and 4/8 embryos) groups than in the non-biopsied, zona intact (ZI) group. Without the coculture, the blastocyst formation rate of embryos after cryopreservation was not significantly different among ZI, the zona drilling only (ZD), and the balstomere-biopsied groups, but it was significantly lower than in the non-cryopreserved control group. The mean number of cells in embryos beyond blastocyst stage was significantly higher in the control group ($50.2{\pm}14.0$) than in 6/8 ($26.5{\pm}6.2$), 5/8 ($25.0{\pm}5.5$), and 4/8 ($17.8{\pm}7.8$) groups. With the coculture using Vero cells, the blastocyst formation rate of embryos after cryopreservation was significantly lower in 5/8 and 4/8 groups, compared with the control, 7/8, and 6/8 groups. The mean number of cells in embryos beyond blastocyst stage was also significantly lower in 4/8 group ($25.9{\pm}10.2$), compared with the control ($50.2{\pm}14.0$), 7/8 ($56.0{\pm}22.2$), and 6/8 ($55.3{\pm}25.5$) groups. Conclusion: After cryopreservation, blastomere-biopsied mouse embryos have a significantly impaired developmental competence in vitro, but this detrimental effect might be prevented by the coculture with Vero cells in 8-cell mouse embryos biopsied one or two blastomeres. Biopsy of mouse embryos after ZD with ATS is a safe and highly efficient preclinical model for PGD of human embryos.
지난 세기부터 MEMS 제작 기술을 이용하여 만들어진 시스템들을 의학이나 생물학적인 용도로 응용하기 위한 많은 연구가 활발히 이루어져 왔다. 기술적인 측면에서 이러한 연구들은 MEMS 분야의 초창기에 강조되어 온 표면 및 몸체 미세 가공 기술(surface & bulk micromachining)과 같은 미세 구조물 제작 기술의 발전에 힘입은 바 크다. 그러나 MEMS 기술이 점차 발전되어 오면서, 가공 기술이 고도화되고 미세 시스템의 구조가 점차 복잡해짐에 따라, 많은 연구들이 단순한 가공기술을 넘어 미세 시스템을 조립하고 집적화할 수 있는 기술, 접합 (bonding) 기술, 패키징 (packaging) 기술, 3차원 형상의 제작 기술, 실리콘(silicon)이나 유리(glass)가 아닌 다른 재료를 이용한 미세 가공 기술 등의 개발을 중심으로 이루어지고 있다.(중략)
최근 반려동물 시장의 급격한 성장으로 인해 동물용 질병 진단키트의 개발이 이루어지고 있다. 이에 동물 분자진단 개발을 위한 바이오마커의 도입으로 효용성을 재평가하고 있다. 좋은 바이오 마커는 정확하고 신뢰할 수 있어야 하고, 정상 상태와 질병 상태를 구별하고, 다른 질병을 구별해야 한다. 최근 보고된 유전마커나 세포유리 DNA, 순환종양세포, granzyme, 피부종양에 관한 종양마커의 개발이 활발히 이루어지고 있으며, 기타로는 브루셀라증, programmed death receptor-1, symmetric dimethylarginine, periostin, cysteinyl leukotrien이 활발히 도입되고 있다. 따라서 바이오마커는 위험 예측에 사용되거나 질병 진행의 스크리닝, 진단 및 모니터링에 사용된다. 관련 바이오 마커에 대한 가장 중요한 기준은 질병 특이성이며 많은 잠재적 바이오 마커가 실험실 및 시험 연구에서 출현했지만, 독립적인 실험이나 대규모 임상 연구에서 검증이 부족하다. 후보 바이오 마커는 질병과 연관성을 평가하고, 조기 발견, 질병 진행에 대한 바이오 마커의 유효성을 검증하여서 인간 및 동물에게 접목하게 된다. 향후 잘 구조화 된 바이오마커 기반 연구의 효용성을 재평가하고 동물 질병 진단에 도입되는 추세에 맞춰 현장검사에서 활용될 수 있는 키트의 개발에 대한 연구가 요구돼야 할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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