• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제48권5호
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• pp.699-708
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• 2000

배경 : 올리고누클레오티드 탐식자를 이용한 조직내교잡법은 감염성 질환의 진단에 이용되고 있는 분자병리학적 검사방법이다. 그러나 결핵균의 세포벽에는 다량의 지방 성분이 포함되어 있어 탐식자의 침투에 어려움이 있다. 따라서 본 연구에서는 탐식자의 침투력을 높일 수 있는 조건을 알아보고, 결핵의 조직학적 진단법으로써 조직내교잡법의 이용 가능성을 확인해 보고자 한다. 방법 : 결핵으로 진단된 환자의 인체조직 절편과 배양된 결핵균을 흰쥐의 간 조직 내에 인위적으로 주입하여 제작한 실험조직 절편을 실험대상으로 하고, 바이오틴을 부착시킨 올리고누클레오티드 탐식자를 이용하여 조직내교잡법을 시행하였으며, 탐식자의 효과적인 침투를 위해 전처리를 시도하였다. 결과 : 펩신-염산 (2 mg/ml, 0.1M) 혼합액을 이용한 전처리 과정 (5-6분) 후 조직내교잡법을 수행한 결과 배양된 결핵균을 주입한 실험조직에서 결핵균의 검출에 성공할 수 있었다. 간 조직이 주사바늘에 의해 기계적으로 손상된 자리를 따라 군데군데 위치하고 있는 배양액 내에서 불규칙하게 모여있는 점상 혹은 간상의 양성반응을 관찰할 수 있었으며, 민감도는 80-90% 수준이었다. 그러나 결핵환자의 조직절편에서는 조직내교잡법을 이용하여 결핵균을 검출할 수 없었다. 결론 : 이는 배양액 내에서 빠르게 증식하는 결핵균과는 달리 인체에 감염된 결핵균에서는 rRNA의 양이 적어, 바이오틴이 부착된 탐식자를 이용한 조직내교잡법의 민감도를 벗어났을 것으로 추정된다. 따라서 향후 조직내교잡법으로 인체조직 내의 결핵균을 진단하기 위해서는 제자리 중합효소연쇄반응 (in situ PCR) 법의도입이나, 보다 높은 민감도를 갖는 동위원소를 부착 시킨 탐식자의 사용이 필요하다고 생각된다.

• 대한소아치과학회지
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• 제34권2호
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• pp.299-308
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• 2007

Streptococcus mutans Ingbritt의 비수용성 글루칸을 합성하는 효소인 glucosyltransferase B 및 C의 mRNA 발현에 대한 각 당의 영향을 fluorescent in situ hybridization(FISH) 방법으로 관찰하여 다음의 결과를 얻었다. 1. 1% 설탕이 함유된 BHI 배지에서 S. mutans Ingbritt를 접종하여 배양할 때 배양 9시간 째 gtfB 및 gtfC유전자의 mRNA가 발현이 급격히 증가하였다. 2 BHI 액체배지에 설탕을 첨가한 경우 gtfB및 gtfC유전자의 mRNA가 발현되었으며, 10% 설탕을 첨가한 경우 1%와 5%보다 gtfB 및 gtfC 유전자의 발현이 감소되었다. 3. 1% 설탕이 첨가된 BHI 액체 배지에 당을 첨가한 경우 포도당은 10% 첨가하였을 때 gtfB 및 gtfC 유전자의 mRNA 발현이 감소하였고, 과당의 경우 1% 첨가한 경우 감소하여 5% 와 10%에서는 gtfB및 gtfC 유전자가 거의 발현되지 않았다. 4. 자일리톨의 경우 1%부터 gtfB및 gtfC유전자 mRNA 발현이 대조군보다 감소하였고, 5%와 10%에서는 두 유전자 모두 발현이 현저하게 감소하였다. 5. 유당의 경우 두 유전자의 발현에 거의 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었고, 솔비톨의 경우 각 농도에서 두 유전자의 발현이 대조군보다 감소하였다. 결론적으로 비수용성 글루칸 합성하는 gtfB및 gtfC 유전자의 mRNA 발현이 포도당, 과당 자일리톨 첨가에 의해 감소함을 알 수 있었다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권2호
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• pp.829-834
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• 2013

Background: MicroRNAs are noncoding RNA molecules that posttranscriptionally regulate gene expression. The aim of this study was to determine the role of microRNA-21 in cholangiocarcinomas and its relationship to cholangiocarcinoma RBE cell capacity for invasion and metastasis. Methods: MicroRNA-21 expression was investigated in 41 cases of cholangiocarcinoma samples by in situ hybridization and real-time PCR. Influence on cholangiocarcinoma cell line invasion and metastasis was analyzed with microRNA-21 transfected cells. In addition, regulation of reversion-inducing-cysteine-rich protein with kazal motifs (RECK) by microRNA-21 was elucidated to identify mechanisms. Results: In situ hybridization and real-time quantitative PCR results for patients with lymph node metastasis or perineural invasion showed significantly high expression of microRNA-21 (P<0.05). There was a dramatic decrease in cholangiocarcinoma cell line invasion and metastasis ability after microRNA-21 knockdown (P<0.05). However, overexpression significantly increased invasion and metastasis (P<0.05). Real-time PCR and Western-blot analysis showed that microRNA-21 could potentially inhibit RECK expression in RBE cells. Survival analysis showed that patients with higher expression levels of microRNA-21 more often had a poor prognosis (P<0.05). Conclusions: MicroRNA-21 may play an important role in cholangiocarcinoma invasion and metastasis, suggesting that MicroRNA-21 should be further evaluated as a biomarker for predicting cholangiocarcinoma prognosis.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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• pp.282-285
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• 2001

질산화 생물여과 시스템 내 생물막 안에 존재하는 ammonia oxidizers 및 nitrite oxidizers의 군집 구조 및 공간적 분포를 조사하였다. FISH 분석 결과 생물막 내 숫적으로 우점종을 이루는 미생물은 ammonia oxidizer인 Nitrosomonas spp.로 나타났으며 nitrite oxidizer 인 Nilrospira spp.에 비해 3 ${\sim}$ 5 정도 더 많이 존재하였다. 이는 실협 기간동안 완전한 질산화를 보였지만 반응기가 2 년 이상 nitrite 축적을 위해 높은 free ammonia 농도 빛 낮은 용존 산소 상태에서 운선되어 nitrite oxidizers에 저해를 주었기 때문인 것으로 사료된다. FISH와 결합된 CLSM 관찰 결과 생물막 전체에 걸쳐 ammonia oxidizer가 분포하는 반면 안쪽으로 갈수록 nitrite oxidizers가 분포함을 보였다. 이는 폐수의 ammonium 을 생물막 내 ammon ia oxidizer가 먼저 nitrite로 산화시키고 이를 nitrite oxidizers가 곧바로 nitrate로 산화시키기 때문이다.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제30권4호
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• pp.299-307
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• 2003

Objectives: The present study was conducted to evaluate the mobile transposon-like element, clone MTi7 (MTi7) expression in the mouse ovary and to determine its role(s) in the mouse oocytes by RNA interference (RNAi). Methods: MTi7 mRNA expression was localized by in situ hybridization in day5 and adult ovaries. Double stranded RNA (dsRNA) was prepared for c-mos, a gene with known function as control, and the MTi7. Each dsRNA was microinjected into the germinal vesicle (GV) stage oocytes then oocyte maturation and intracellular changes were evaluated. Results: In situ hybridization analysis revealed that MTi7 mRNA localized to the oocyte cytoplasm from primordial to preovulatory follicles. After dsRNA injection, we found 43-54% GV arrest of microinjected GV oocytes with 68%-90% decrease in targeted c-mos or MTi7 mRNA. Conclusions: This is the first report of the oocyte-specific expression of the MTi7 mRNA. From results of RNAi for MTi7, we concluded that the MTi7 is involved in the germinal vesicle breakdown in GV oocytes, and MTi7 may be implicated with c-mos for its function. We report here that RNAi provides an outstanding approach to study the function of a gene with unknown functions.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제4권5호
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• pp.361-367
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• 2000

Cocaine functions as indirect dopamine and serotonin (5-hydroxytryptamine, 5HT) agonists and induces genomic and behavioral alterations in the striatum. Previously we demonstrated that ritanserin, a 5HT2/1C receptor antagonist, is not responsible for cocaine-induced behavioral alterations and zif268 mRNA gene expression in the striatum (see the previous paper in this issue). In this study, it was hypothesized that dopamine and 5HT2/1C receptors are required for cocaine-induced behavioral alterations and c-fos and zif268 mRNA expression. This hypothesis was addressed by infusing amperozide which antagonizes both 5HT2/1C and dopamine receptors and was analyzed using the quantitative in situ hybridization histochemistry in vivo. Systemic injection of amperozide (5 mg/kg, s.c.) significantly blocked increase in behavior, c-fos and zif268 mRNA expression induced by 15 mg/kg cocaine, i.p., in the dorsal striatum. These data suggest that dopamine and 5HT2/1C receptors are necessary for cocaine-induced behavioral alterations and immediate early gene expression in the dorsal striatum.

• 대한수의학회지
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• 제40권2호
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• pp.229-236
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• 2000

The synthesis of steroid hormone starts from cholesterol. Steroidogenic acute regulatory protein (StAR) acutely transfers cholesterol from the outer mitochondrial membrane to the inner in the early step of steroidogenesis. Many kinds of steroid hormone are mainly synthesized in adrenal grand, ovary, and testis. Among the steroid hormone, testosterone is synthesized in Leydig cells of the testis, the production of testosterone significantly increases in adult testis after puberty onset. Therefore, we think that the expression of StAR mRNA in testis will change according to the testicular development. The aim of this study is to determine the distribution of StAR mRNA in immature and adult rat testes and to confirm the functions of StAR in these testes. Thus, in situ hybridization was used in rat testes of the 2, 4, and 10 weeks of age. StAR mRNA was expressed in Leydig cells. Positive signals of StAR mRNA were weakly detected in Leydig cells of the 2 weeks of age. But, StAR mRNA was strongly expressed in Leydig cells of the 4 and 10 weeks of age, where steroidogenesis actively occur. In our results, the pattern of StAR mRNA expression was similar to the pattern of testosterone production in immature and adult rat testes. In conclusion, we can suggest that StAR acts as an important factor to regulate the synthesis of testosterone in Leydig cells of the rat testis.

• 대한소아치과학회지
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• 제31권2호
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• pp.304-313
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• 2004

천연의 당알콜계 감미료인 자일리톨을 사용하여 자당으로부터 글루캔을 합성하는 효소인 glucosyltransferase(GTF)의 mRNA 발현에 미치는 영향을 Fluorescent in situ hybridization(FISH)과 유식세포측정기를 이용하여 분석하여 다음의 결과를 얻었다. 1. FISH분석결과 1% 자당이 함유된 BHI 배지에 1%, 5%, 10% 자일리톨을 첨가하였을 때 gtfB, gtfC 및 gtfD mRNA 발현이 농도 의존적으로 억제되었고, gtfB 보다는 gtfC 및 gtfD의 발현이 더 크게 억제되었다. 2. 유식세포측정기로 분석한 결과 자당의 농도가 0.1%, 0.5%, 1%로 증가함에 따라 gtfB, gtfC 및 gtfD mRNA 발현이 증가하였다. 3. 유식세포측정기로 분석한 결과 자당이 1%함유되었을 때 1%, 5%, 10% 자일리톨을 첨가한 경우 gtfB, gtfC 및 gtfD mRNA발현이 유사하게 억제되었으며, 10% 자일리 톨을 첨가한 경우 gtfB, gtfC 및 gtfD mRNA발현이 가장 크게 억제되었다. 이상의 결과를 종합하면 자일리톨은 자당첨가에 의한 Streptococcus mutars의 gtf mRNA 발현을 억제하여 항우식효과에 기여하는 것으로 생각된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권3호
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• pp.177-184
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• 1996

흰쥐의 폐조직 절편에서 실험적으로 유발시킨 폐포자충을 검출하고자 조직내교잡법 (in situ hybridization)을 수행하였다 흰쥐는 methylprednisolone(데포-메드롤)을 10 mg/kg의 양으로 주 1회 피하주사하여 면역억제시켰고. 6 8 및 9주에 희생시켜 폐를 적출한 후 포르말린에 고정하였다. 폐포자충의 5S rRNA에 상보적인 22 base길이의 oligonucleotide probe를 주문제작(한국 생공)하였고 3' 부위에 biotin을 부착하였다 조직내교잡법은 Microp「obi stainin료 system과 manual capillary action법을 이용하여 1시간 이내에 수행하였다 폐포자충은 주로 폐포세포의 내강면. 폐포내 삼출물 및 세기관지의 분비물 등에서 검출되었다 6주 면역억제시 양성반응은 주 로 폐단면의 가장자리 부위에서 부분적으로 간찰되었으나. 8 내지 9주에서는 전체적으로 관찰되었 나. Grocott의 methenamine silver 염색법에 비하여 조직내 교잡법은 폐포자충을 신속하게 검출 할 수 있호 영양형의 검출에는 특히 유리하며. 다른 알려진 병원성 진균 및 원충류와의 교차반응이 없어. 실험적으로 유발시킨 폐포자충에 의한 폐렴의 진단에도 유용하게 사용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제2권1호
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• pp.39-43
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• 1998

스테로이드 호르몬의 합성은 콜레스테롤로부터 시작되고 Steroidogenic acute regulatory protein(StAR)은 스테로이드의 합성과정에서 콜레스테롤을 미토콘드리아의 안으로 신속하게 운반하는 역할을 한다. 스테로이드 호르몬은 난소, 부신, 고환에서 합성되며 본 연구에서는 흰쥐 난소와 부신에서 StAr mRNA의 발현 양상을 in situ hybridization 기법을 이용하여 조사하였다. 난소의 경우 StAR mRNa는 프로게스테론을 분비하는 황체에서 강한 발현을 보였고 엔드로겐을 분비하는 난포막세포에서도 약한 발현을 보였으며 에스트로겐을 분비하는 과립막세포에서는 발현되지 않았다. 황체에서도 황체의 발달 저도에 따라 차이를 보였고 성장한 황체에서는 강한 발현을 보인 반면, 퇴화하는 황체에서는 약한 발현을 보였다. 부신에서 StAR mRNA는 피질에서 강한 발현을 보였고 수질에서는 발현되지 않았다. 특히, 피질의 토리층에서보다 다발층과 그물층에서 강한 발현을 보였다. 난소와 부신에서 StAR mRNA는 스테로이드 호르몬의 종류에 따라서 발현 양상이 달랐고 스테로이드 호르몬 합성의 초기 단계에 관여함을 알 수 있었다.