In the present study, we determined the effect of $18{\beta}$-glycyrrhetinic acid ($18{\beta}$-GA) in the mice model bearing xenografts of HT-29 human colon cancer cell line. Data from the cytotoxicity assay displayed that $18{\beta}$-GA induced cell death in HT-29. The cytotoxicity was enhanced as the $18{\beta}$-GA treatment was prolonged. In case of 72 hrs treatment, $LD_{50}$ of $18{\beta}$-GA was approximately $90{\mu}M$, and the efficacy at $100{\mu}M$ of $18{\beta}$-GA appeared to be equivalent to that of doxorubicin at $1{\mu}M$. Based on the in vitro data, we tested the anti-tumor effect of $18{\beta}$-GA in thymic mice (Balb/c strain). Xenograft tumors were generated by subcutaneous injection of HT-29 ($3{\times}10^6cells/mouse$) to mice and the mice were treated intraperitoneally with $18{\beta}$-GA ($50{\mu}g/time/mouse$) every other day for 4 times. The tumor volumes were measured for a period of 14 days. Data displayed that the $18{\beta}$-GA treatment reduced the tumor volumes (P < 0.05) as compared to control mice. However, this activity was demolished when athymic mice (Balb/c nu/nu) were used instead of thymic mice. This observation appeared that T lymphocyte played an important role in the anti-tumor activity. In conclusion, our results indicate that $18{\beta}$-GA has anti-tumor activity in HT-29 tumor-bearing mice, which may be associated with T cells.
본 연구는 대향고의 자실체로부터 중성염용액, 열수 및 메탄올을 이용하여 조다당류를 추출하여 이를 ICR mice에 주사하여 항암 및 면역증강 효과를 조사하였다. Sarcoma 180, HepG2, RAW 309 Cr.1 등의 세포주에 대한 독성 실험결과, 각각의 세포주는 $10{\sim}2000\;{\mu}g/ml$ 조다당류 농도에서 세포독성을 나타내지 않았으나, NIH3T3 세포의 경우에는 열수와 중성염용액에서 추출한 조다당류 $10{\sim}2000\;{\mu}g/ml$의 농도에서 약간의 독성을 나타내었고, 메탄올에서 추출한 조다당류 $2000\;{\mu}g/ml$의 농도에서는 독성을 나타내지 않았다. 각각의 조다당류가 투여된 실험군은 대조군에 비해 수명이 각각 $14.3{\sim}67.5%$ 연장되었다. 중성염용액으로 추출한 조다당류는 B 임파구의 alkaline phosphatase 활성을 $50{\sim}200\;{\mu}g/ml$의 농도에서 대조군에 비해 약 $1.53{\sim}1.68$배 내외의 증가율을 나타냈다. 중성염추출 조다당류를 50 mg/kg body weight의 농도로 투여한 생쥐의 총 복강 세포 수는 대조군에 비하여 최고 7.7배 증가하였으며, 메탄올 추출물을 50 mg/kg body weight의 농도로 투여하였을 때 혈액 중 백혈구의 수도 대조군에 비하여 약 1.6배 증가하였다. 또한 면역에 관련된 장기인간, 비장 및 흉선의 체중이 대조군에 비하여 소폭으로 증가된 것을 확인하였다. 따라서 대향고 자실체에서 추출한 조다당류의 Sarcoma 180에 대한 항암작용은 이들 조다당류의 면역 증강효과에 의한 것으로 사료된다.
These experiments were conducted to investigate the effects of glycyrrhizin(GL) and glycyrrhetinic acid(GA) on histamine synthesis, lymphocyte blastogenesis in C57BL/6J mice splenocytes, IL-1 production, $Ca^{2+}$ uptake by macrophage-like P388D$_{1}$ cells and plaque forming cell assay against SRBC. Histamine contents, lymphocyte blastogenesis, IL-1 activity, $Ca^{2+}$ uptake and plaque forming cell were determined by enzyme isotope method, [sup 3/H]-thymidine incorporation, C3H/HeJ mouse thymocytes proliferation, the addition of 5 $\mu$Ci/ml $^{45}$Ca$^{2+}$ to P388D$_{1}$, cell suspension and assay to sheep red blood cell, respectively. Cytotoxicity, which was expressed as 50% mortality, was occurred by the addition of GL(10$^{-3}$M) and GA(10$^{-4}$M). Histamine production in mouse spleen cell culture was significantly increased by the addition of 0.25 $\mu\textrm{g}$/ml of Con A, after 48 hour incubation. Con A dependent T-lymphocyte proliferation was also enhanced by the addition of 0.25 .mu.g/ml of Con A. The effects of GL on histamine contents and T-lymphocyte proliferation were significantly decreased at high dose (10$^{-5}$M), while IL-1 activity was remarkably suppressed by 10$^{-8}$~10$^{-4}$M of GL. $Ca^{2+}$ uptake was not changed, but antibody production was increased by GL(10 mg/kg). GA inhibited histamine contents at 10$^{-9}$~10$^{-7}$ and depressed Con A (0.25 $\mu\textrm{g}$/ml) dependent T-lymphocyte proliferation at 10$^{-7}$~10$^{-5}$M of GA, but increased suboptimal dose (Con A 0.1 $\mu\textrm{g}$/ml) at 10$^{-9}$~10$^{-7}$M of GA. IL-1 activity was suppressed by 10$^{-8}$~10$^{-4}$M of GA and $Ca^{2+}$ uptake was enhanced by 10$^{-9}$~10$^{-6}$ of GA, but antibody production was not changed by GA. From the above results, it is suggested that GL and GA have immuno-regulatory action. GL decreased cell-mediated immune response, and increased humoral immune response at high dose. On the other hand, low dose of GA enhanced cell-mediated immune response, while high doses of GA decreased humoral immune reaction.
Fomitella fraxinea의 자실체로부터 열수 추출법에 의하여 다당류를 추출한 뒤, 분획정제하여 다당류에 대한 물리화학적 특성 및 항암 면역 활성을 조사하였다. 정제된 다당류에서 소량의 uronic acid가 측정되었으며, 주 구성당으로서 glucose, fucose, galactose, 및 mannose 가 존재하였고, 소량의 xylose, arabinose, 및 rhamnose가 검출되었다 . FHW-Ib에서 단백질은 측정되지 않았으며, FHW-Ia는 분자량이 19,000인 fuco-gluco-mannogalactan으로 FHW-Ib는 분자량 15,000인 gluco-fuco-mannogalactan으로 각각 동정되었다. FHW -IIa 및 FHW-IIb에서는 소량의 단백질이 측정되었고, 아미노산 분석 결과 threonine, glutamic acid, serine, alanine 및 aspartic acid의 양이 비교적 높게 존재하였다. FHW-IIa 및 FHW- IIb 는 galacto-mannogIucan 이며 분자량은 각각 31,000 및 9,000이었다. FHW-Ib 와 FHW-IIb 의 IR spectrum분석 결과 이 두 다당류는 ${\beta}-type$이 아님이 밝혀졌다. 항암 면역 활성은 FHW-Ia, FHW-Ib, 및 FHW-IIa에서는 거의 없었고 FHW-IIb에서는 높았다.
Trifoliate orange seed extracts (TSEs) were made using either distilled water (TW), ethanol (TE), or n-hexane (TH), to measure total polyphenol contents, DPPH and ABTS radical scavenging activities, and anti-complementary activity. The results showed that the total polyphenol content showed higher value at TE (235.24 ${\mu}g/mL$, p<0.05) than those of TW (132.65 ${\mu}g/mL$) and TH (165.44 ${\mu}g/mL$) at 10 mg/mL and TE exerted the highest DPPH radical scavenging activity (61.77%, p<0.05), which occurred in the following order: TE TW (56.87%)>TH (39.78%). The results of ABTS radical scavenging activity showed that TW (34.26%) and TE (31.81%) showed similar activities, which were higher than TH (12.74%, p<0.05). Anti-complementary activity of TE (61% at 500 ${\mu}g/mL$) showed a higher activity when compared with the positive control (60% at 1,000 ${\mu}g/mL$) polysaccharide-K (PSK), a known immuno-active polysaccharide from Coriolus versicolor. Consequently, among TSEs, TE is a byproduct from trifoliate orange and could be an important source of dietary polyphenolic antioxidant compounds and immunopotentiating activity, including complement activation.
참당귀(Angelica gigas Nakai)를 기능성 식품소재 및 의약품의 원료로 활용하기 위하여 참당귀 methanol 추출물에 대한 항산화, 항암 및 면역활성을 조사한 결과는 다음과 같다. 참당귀의 항산화력을 알아보기 위하여 0.1, 0.5 및 1 mg/mL의 농도로 당귀의 methanol 추출물을 처리한 후 수소 공여능, 환원력 및 hydroxyl radical 활성을 측정하였다. 그 활성은 모두 추출물의 농도에 의존적으로 높게 나타났으며, 특히 수소공여능은 1 mg/mL에서 대조군과 비교했을때 50% 정도의 활성을 나타내었다. 참당귀 methanol 추출물을 SW480세포에 처리한 결과 대조군에 비하여 농도 의존적으로 암세포의 성장을 억제하였으며, 암세포에 참당귀 methanol 추출물을 24시간 처리하여 hoechst 염색한 후 형광현미경으로 관찰한 결과 핵의 응축 및 DNA 분절이 관찰되었다. 또한 참당귀 methanol 추출물이 처리된 암세포에서는 대조군에 비하여 농도에 의존적으로 caspase-3의 활성이 증가하였다. 참당귀의 methanol 추출물은 생쥐의 비장으로부터 분리한 면역세포에 대하여 대조군과 비교하여 상이한 차이를 보이지 않았으며, 또한 대식세포인 RAW 264.7에서도 $NO_2$(Nitrite)를 함량이 증가되지 않았다. 따라서 이들 결과는 참당귀 methanol 추출물은 약한 항산화 활성을 가지며, 면역 활성에는 큰 관련이 없지만, SW480 암 세포에서 caspase dependent pathway에 의한 apoptosis를 유도함으로서 암세포의 사멸하는 것으로 판단되어진다.
Immunonutrition is the provision of specific nutrients that modulate the activity of the immune system. Several nutrients including arginine, glutamine, nucleotides, omega-3 fatty acids, vitamins, minerals, and prebiotics can be provided to enhance immunity in critically ill patients. Supplying immunonutrition to critically-ill children, better prognosis and shortening of the hospital stay are expected from its immuno-modulating effects. Therefore, immune-enhancing enteral and parenteral formulas can be recommended in children with severe illness.
The purpose of this research was to investigate the effects of 50% ethylalcohol extracts of Lespedeza cuneata G. Don (LE) on the activity of murine immune cells. LE was administered orally once a day for 7 days at the dose of 250 mg/kg. LE increased the cell viability of thymocytes, splenocytes and peritoneal macrophages in vitro and in vivo system, but decreased the cell viability of thymocytes and splenocytes in the presence of concanavalin A in vivo system. Also, the administration of LE was increased the production of ${\gamma}$-interferone, but did not affect the production of interleukin-2 and interleukin-4. Furthermore, LE decreased the phagocytic activity of peritoneal macrophages in vitro and in vivo system, but enhanced the production of nitric oxide. These results suggest that LE has a immuno-regulative action via stimulation of immune cells proliferation.
백수오의 국내 재배활성화와 함께 농가소득을 높이기 위한 기능성 식품소재로서의 우수성을 산업적으로 응용하고자 백수오 추출물의 면역증진 활성을 평가하였다. 낮은 온도에서 액체상태의 추출물을 효과적으로 농축하고 정제하기 위하여 비열처리 공정인 한외거르기를 통해 분자량(MWCO)이 30 kDa인 여과막을 이용하여 고분자 분획물(CWUF>30) 및 저분자 분획물(CWUF<30)을 얻었으며 이를 큰포식세포 활성화를 통한 면역 증진 효과를 알아보기 위해 RAW 264.7 세포를 이용하여 면역활성의 지표가 되는 산화질소(II) 생성량 및 사이토카인인 TNF-${\alpha}$, 인터루킨-6의 생성량을 측정한 결과, 정상대조군(CON)에 비해 CWUF>30을 처리하였을 때 농도 의존적으로 유의하게 증가하였다. 세포실험을 통해 면역증강활성이 높은 CWUF>30은 정상동물모델에서 면역기관인 비장 및 흉선의 무게를 증가시켰고 비장세포 유래 림프구 증식도 유의하게 증가시켰다. 이는 CWUF>30의 투여가 비장세포를 증식시키는 mitogen 활성이 있음을 보여주며 외부의 항원에 노출 시 항원에 대한 면역반응을 유도하는 면역세포의 수를 증가시켜 항원에 대한 효과적인 방어에 도움을 줄 것으로 보여진다. 또한 CWUF>30을 투여한 마우스 비장세포(splenocyte)의 Yac-1 세포 살해 정도를 측정한 결과, 200 mg/kg BW의 농도로 CWUF>30을 투여한 마우스의 비장세포는 정상대조군(CON)에 비하여 effector 세포와 target 세포의 비율이 10:1에서 유의적으로 증가하였으며 이는 양성대조군(PC)과 유사한 높은 활성을 보이는 것을 확인 할 수 있었다. 이와 같은 결과를 통해 백수오 고분자 분획물(CWUF>30)이 강력한 면역활성 증진효능을 갖고 있으며 각종 바이러스 등 외부 항원들에 대응하여 초기 면역세포를 자극하고 면역매개물질을 생성함으로써 인체의 비특이적 면역반응을 증가시키는데 중요한 역할을 할 수 있을 것으로 기대된다.
녹차 성숙잎으로부터 새로운 면역 활성 다당 소재를 개발할 목적으로 녹차잎을 pectinase로 처리하여 조다당 GTE-0을 분리하고 이들의 면역증진 활성과 화학적 특성에 대해 조사하였다. GTE-0은 중성당 54.9%, 산성당 45.1%로 이루어져 있었으며, 구성당 분석 결과 주로 glucose(14.2%), arabinose(12.2%), rhamnose(11.1%) 및 galactose(7.3%)로 구성되어 있었다. 한편 GTE-0은 비특이적 면역계에 있어 중요한 역할을 담당하고 있는 보체계에 대하여 양성대조군 PSK에 준하는 우수한 활성이 농도 의존적으로 나타났다. 또한 GTE-0을 처리하고 검경 시 형태적으로 구분이 가능한 활성화된 대식세포의 숫자가 증가되는 경향을 보였다. 대식세포의 NO, ROS 및 $H_2O_2$ 생산에 미치는 GTE-0의 효과를 검토한 결과 ROS와 $H_2O_2$는 모두 농도 의존적으로 생산량을 증가시키는 우수한 활성을 나타낸 반면, NO의 생산능은 1,000 mg/mL의 고농도에서보다 오히려 100 mg/mL의 저농도에서 더 우수한 활성을 나타내었다. 또한 GTE-0으로 자극한 대식세포는 무처리 대조군에 비해 IL-6, IL-12 및 TNF-${\alpha}$와 같은 다양한 cytokine들의 생산이 농도 의존적으로 증가되는 경향을 보였다. 대식세포의 식작용 활성을 측정한 결과 무처리 대조군에 비해 GTE-0 100 mg/mL 농도이상 처리하였을 때 우수한 활성을 나타내었다. 또한 활성화된 대식세포의 YAC-1 종양세포주에 대한 치사 활성을 ex vivo로 측정한 결과 100 mg/mL의 농도에서 무처리군 대비 유의적으로 높은 치사 활성을 보였다. 이상의 결과로부터 녹차 성숙잎으로부터 분리된 효소 처리 조다당 GTE-0은 강력한 면역 활성 증진 효과를 갖고 있음을 결론지을 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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