연구방법: 미성숙 백서 난소의 과배란 유도를 위해 PMSG를 주사하고, 배란을 위해서 hCG를 주입하였다. RGS-2의 유전자 발현양상을 조사하기 위하여는 Northern blot 분석과 in situ hybridization 분석을 시행하였다. 결 과: 미성숙 백서에 성선자극호르몬인 PMSG를 복강내 주사했을 때 RGS-2 mRNA 발현에 영향을 미치지 않음을 Northern blot analysis로 확인할 수 있었으나, hCG를 주입했을 때는 1시간에서 3시간 내에 발현이 증가됨을 알 수 있었다. In situ hybridization으로 살펴본 RGS-2 mRNA의 발현세포는 난포의 크기에 관계없이 난자였으나, hCG로 처리한 후에는 배란 전 난포와 성장중인 난포의 과립막 세포이었다. 그러나, RGS-2 단백의 발현은 hCG 처치와 관계없이 난포막 세포이었다. 상기 생체 실험과 마찬가지로 시험관에서도 배란 전 난포의 과립막 세포에 대한 LH 처리는 RGS-2 유전자 발현을 1시간 내에 촉진하였다. 또한, 성선자극호르몬 분비호르몬 2 길항제도 이러한 LH의 촉진작용을 증진시켰다. 결 론: 본 연구로 배란 전 과립막 세포에서 성선자극호르몬인 LH/hCG와 성선자극호르몬 분비호르몬 길항제에 의해 RGS-2의 발현이 증진되는 양상으로 보아 RGS-2가 배란과정 동안에 Gq protein 신호전달을 조절할 것으로 추정된다.
The use of dental implants has increased tremendously in recent years and is expected to increase even more in the future. The successful outcome of any implant procedure is surely dependent on interrelationship of the various components of an equation that includes biocompatibility of implant material, macroscopic and microscopic nature of the implant surface, the status of implant bed, surgical technique, undisturbed healing phase and subsequent prosthetic design and long-term loading phase. The purpose of this study was to clarify the effects of adrenalectomy on the osseointegration of pure titanium implants. Seventy rats, 11 weeks of age, were divided into two groups : an adrenalectomized group and a control group. Titanium screw implant(diameter, 2.0mm; length, 3.5mm) was placed into left tibia of 70 rats, 35 in control group and 35 in the experimental group. The rats were sacrificed at different time interval (1, 2, 3, 4, 6, 8, and 12 weeks after implantation) for histopathologic observation, histomorphometric analysis and immunohistochemistry with fibronectin and CD44 antibody. The results obtained from this study were as follows: 1. Histopathogically, findings, newly formed bone was seen at 3 weeks control group and became lamellar bone at 12 weeks. At 6 weeks, lipocytes were observed in bone marrow space. Thickness of regenerated trabecular bone increased till 6 weeks after then, that decreased gradually. 2. By histomorphometric analysis, marrow bone density and contact ratio of marrow bone to implant decreased significantly from 8 to 12 weeks in experimental group compared to control group and also total bone to implant contact ratio decreased significantly from 4 to 12 weeks in experimental group compared to control group. 3. Fibronectin immunoreactivity was very strong at 3 and 4 weeks control group. And after that reduced gradually. But it was continuously strong from 1 to 12 weeks experimental group. 4. CD44 immunoreactivity was very strong in the newly formed osteoblasts at 3 and 4 weeks control group. But it reacted minimally later. However, it reacted continuously strong from 3 to 12 weeks experimental group. From these results, bone to implant contact ratio decreased gradually from 4 weeks in adrenalectomized group compared to control group. CD44 and fibronectin immunoreactivities were strong at all times in adrenalectomized rats. Therefore, it could be stated that immature bone remained continuously for a long time and not readily proceeded into mature status.
옥천대 내에서 옥천층군을 관입하고 있는 보은 화강섬록암은 그화학적 성질이 과알루미나질이며, 칼크-알칼리 계열을 따르는 화강암류이다.그리고 보은 암체를 형성한 마그마가 생성되고 관입한 환경은 활동성 대륙 주변부일 가능성이 있다. 한편, 옥천대의 보은암체를 동시대의 경기육괴의 인제-홍천암체와 비교하면 보은암체 ?이 인제-홍천암체 보다 성숙도가 낮은 대륙호의 환경에서 형성된 것임을 알 수 있다. 주성분원소, 미량원소 및 회토류원소의 함량 변화에 있어서 결정분화를 지시하는 경향성이 결여되어 나타나는 것은 화강암류의 화학적 성질을 지배하는 마그마과정이 단순한 분별작용의 모델 만으로는 설명되지 않음을 나타낸다. 또한 보은 화강암체를 형성시킨 마그마과장에 대해서 레일리 분별 및 주성분원소 함량변화에 따른 분별과정을 모델 계산을 통해 검토해 보았으나, 어느것도 보은암체이 지구화학적 경향성을 효과적으로 설명해 주지 않는다. 반면, 결정작용과 동시성 혼염작용(AFC)에 대한 모델 계산에서는 보은 화강섬록암을 형성시킨 화강암질 마그마는 옥천층군을관입하기 이전에 퇴적기원의 지각물질과의 혼염과정을 거쳤을 가능성이 제기되고, 그 때이 조건으로는 혼염되는 주변암석이 성분과 마그마의 성분이 유사하고 또한 혼염작용의 속도가 결정작용의 속도와 비슷하여 혼염되는 질량은 마그마 전체 질량의 10% 내외인 경우이다. 한편, 분별과정과 AFC모델 계산의 결과는 규장질암맥이 보은 화강섬록암으로 파생된 것이 아니라 다른 성인의 마그마로부터 유래되었을 가능성을 제시한다.
시기별 병귤 추출물의 항산화 활성은 시기적으로 미숙과 시기인 9월에 가장 높았으며, 이 시기에 총 폴리페놀 함량이 가장 높았다. 특히 rutin, hesperidin, nobiletin의 함량이 높았으며, 이는 항염 활성에 영향을 미치는 것으로 여겨진다. 항염 활성에서는 NO의 생성을 억제하였으며 염증성 cytokine인 TNF-${\alpha}$의 생성 억제 활성이 가장 높았다. 또한 NO 생성을 억제하는 단백질로 알려진 iNOS 단백질의 발현 역시 억제하는 것을 확인 할 수 있었다. 항염 활성에 영향을 미칠 것으로 여겨지는 nobiletin 함량의 경우 12월에 70%이상 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 시기별 플라보노이드 함량 분석결과는 병귤을 천연 소재로 활용하기 위한 수확시기를 확립할 수 있을 것으로 여겨진다.
수지상세포(DCs)는 항원을 섭취하여 말초조직에서 lymphoid 기관으로 이동하는 특화된 항원제시세포(APCs)로서 미성숙 T 세포를 자극함으로서 일차적 면역반응에 중심적인 역할을 하기 때문에 DC의 성숙에 대한 조절은 면역학적 치료 접근에 매우 중요한 부분이다. 본 연구에서는 서목태 발효 산물이 주 원료인 사리장에 의한 DC의 성숙 유도 가능성을 조사하기 위해 GM-CSF와 IL-4를 이용하여 골수 유래 수지상세포(BMDCs)를 대상으로 DC의 성숙에 관여하는 주요 인자들의 발현에 미치는 영향을 LPS 처리군과 비교하였다. 사리장은 처리농도 의존적으로 표면 수용체인 CD80 및 CD86의 발현을 증가시켰으나, CD80 발현 증가에 더 유의적이었다. 또한 사리장은 MHC I 보다 MHC II의 발현을 현저하게 증가시켰으며, 이러한 결과는 사리장이 DC의 성숙을 위한 적용에 매우 유의적으로 사용될 수 있을 가능성과 면역활성 효능을 가질 수 있음을 의미하는 것이다.
맥주의 숙성기간을 단축시키기 위해 네 종류의 고정화용 담체를 활용한 고정화 효모 반응기를 시험하였다. 전발효가 끝난 Green Beer (GB)를 효모를 제거하고 열처리할 경우 처 리온도가 높을수록 전구체인 $\alpha$-acetolactate의 diacety 1로의 전 환율이 낮고 전환속도도 빨라 $70^{\circ}C$이상의 온도에서는 4분이면 충분하였다 GB 중의 산소농도는 전구체에서 DA로의 변환율에 매우 큰 영향을 끼쳤는데 그 농도가 낮을수록 전환율이 낮았으며 0.1 ppm 이하의 농도에서는 거의 대부분의 전 구체가 DA이외의 물칠로 전환되었다. 열처리한 전발효 맥주 를 HAN, G-2, FLO, GDC 담체 column에 $\alpha$, 체류시간 80-150분으로 통과시킬 경우 diacety I 농도를 상품 맥주의 품질로 적합한 0.1 ppm이하로 떨어뜨릴 수 있어서 시험한 담체 모두 맥주 숙성용 효모고정화용 답체로의 실용화 가능 성이 있었다. 이 때 세라믹 담체 column의 경우 GDC 담체 column에 비해 미발효된 잔당의 발효에 의한 새로운 DA 전 구체의 생성이 많았다. 위와 같은 방법으로 생산한 맥주를 공장에서 기존의 방법으로 생산한 맥주와 맛을 비교한 결과 미세한 차이가 있으나 불쾌한 느낌을 주는 이취등은 발견되지 않아 고정화 효모 반응기에 의한 고속 숙성공정의 현장적 용 가능성이 높음을 확인할 수 있었다.
아플라톡신 B$_1$과 4-NQO의 돌연변이 유발성에 미치는 녹황색 채소류의 메탄올 추출물과 쥬스들의 항돌연변이 효과를 검토하였다. Salmonella typhimurium TA98과 TA100을 이용한 Ames실험계를 사용하였는데 아플라톡신 B$_1$에 대해 채소류의 메탄올 추출물 중에는 들깻잎, 상치, 브로콜리, 쑥갓, 미나리, 들미나리, 붉은고추, 고추잎, 비름, 시금치, 무 등이 큰 항돌연변이성을 나타내었다 (p< 0.01). 이 경우 시험시료 중 약 50% 정도가 저해 효과를 나타내었지만, direct mutagen인 4-NQO에서는 실험 시료 27종중 25종류(93%)에서 항돌연변이성이 관찰되었다 (p<0.01, 0.05). 이중 60%이상 저해효과를 나타낸 시료는 양배추, 케일, 상치, 브로콜리, 갓, 풋고추, 피망, 시금치, 비름, 콩나물, 애호박이었다. 한편 쥬스로 부터 아플라톡신 B$_1$에 대해 항돌연변이 효과를 나타낸 채소류는 들깻잎, 들미나리, 시금치, 양배추로써 각각 용량 의존적으로 (50~500${\mu}\ell$/plate)농도의 증가에 따라 그 저해도가 크게 증가하였다. 한편 오이와 당근은 농도를 높여도 큰 저해효과는 관찰되지 않았다.
고구마 위축병의 병원해부학적 변화상과 myco-plasma 병원상의 식물체내 이동 관계를 조사하여 경단분열조직에서의 조직학적 방어기작을 연구하고저 고구마 수원 147 호 (Ipomoea batatas (L.) Lamm. Suwon 147) 를 재료로 하여 광학 및 전자현미경으로서 조직관찰 및 무병주 생산을 위한 조직배양 실험을 하였다. Mycoplasma 의 감염경로의 조사를 위하여 나병주의 경단분열조직을 부위별로 조직배양을 하여서 mycoplasma의 상승한계를 측정하고 아울러 mycoplasma 의 세포내의 변화상과 이동상을 살핀 결과는 다음과 같다. 1. Mycoplasma 는 원시 및 제 l 기 분열조직을 포함한 경단에서는 존재하지 않음을 확인하였고 그 밑의 유관속 분화층에서는 존재하고 있으며 분화조직으로 갈수록 그의 크기가 커지고 미분화 조직에 갈수록 소형이며 미숙한 mycoplasma 가 존재함을 관찰하였다. 2. 경단분열조직속에 mycoplasma 가 존재하지 않는 것은 미숙 mycoplasma가 통과 할 수 있는 사역 및 원형질연락계와 같은 통과구조가 미분화되기 때문에 통과되지 못하는 것으로 인정된다. 3. 조직배양에서 경단 $1.0{\sim}1.5mm$ 부위를 배양하여 얻어진 식물은 이병되지 않았으며 경단 $2.0{\sim}3.0mm$ 부위의 것에서는 이병이 됨을 볼 수 있었다. 이것은 배양온도에서는 미숙한 mycoplasma 가 퇴화되며 소실된다는 사실을 알 수 있다.
Supplementation of maturation medium with additional granulosa cells has beneficial effect on in vitro maturation of bovine follicular oocytes and their subsequent cleavage and development in vitro. However, maturation system using granulosa cells have some disadvantages that collection of granulosa cells is cumbersome and metabolic activity of the cells is variable according to ovarian cycle or follicular size. We hypothesized that bovine immsture oocytes matured without granulosa cell coculture can fertilize and develop normally if the medium volume per oocyte is reduced during in vitro maturation. Immature oocytes were matured for 24 hours in a TCM199 containing 10% fetal calf serum, anterior pitultary hormone (0.02 AU /ml Antrinⓡ) and estradiol with or without granulosa cells in vitro. In Group 1, 35 to 40 oocytes were matured in a well of 4-well plastic dish containing 500 $\mu$l of maturation medium and granulosa cells, and 9 to 10 oocytes were matured in a 50-$\mu$l drop of maturation medium without granulosa cells in Group 2. After maturation, oocytes were coincubated with sperm for 30 hours in a modified Tyrode's medium (IVF). Inseminated oocytes were cultured in a microdrop (30 $\mu$l) of a synthetic oviduct fluld medium (SOFM) containing BSA, Minimum Essential Medium essential and non-essential amino acids for 9 days. As a preliminary experiment, we investigated the beneficial effect of granulosa cells during maturation on subsequent cleavage and development using the same type of culturedishes (4-well dish). Granulosa cells could not increase embryo cleavage after fertilization but significantly improved (p<0.05) embryo development to expanding blastocyst (Table1 and 2). In Group 1, 68 and 80% of inseminated oocytes have cleaved at 30 hours and 2 days after IVF, respectively, which is similar (p>0.05) to the result of Group 2 (69% at 30 hours and 78% at 2 days after IVF). The oocytes in Group 2 showed 21 and 11% of developmental rates to expanding and hatching blastocysts, respectively, which was not significantly different (p>0.05) from those (20 and 10%, respectively) of oocytes in Group 1. In conclusion, it has been clarified that a microdrop culture system without granulosa cells for in vitro maturation can support bovine embryonic development to blastocyst in vitro as readily as a granulosa cell coculture system.
This study was carried out to establish the system of OPU derived embryo production, management of recipients as well as offspring production. OPU derived embryo production system was carried out of aspiration of immature oocytes 2 times per week, total 24 times for 3 months by an ultrasonographic guided follicular aspiration system and then produced in vitro-produced blastocysts by in vitro maturation, fertilization and culture system. This work was collected total 13,866 oocytes, average $8.2{\pm}4.5$ oocytes per session and 8,170 G1 + G2 grade oocytes, average 4.8 oocytes per session by 1,692 times session of total 71 donors for 4 years from 2010 to 2013. The rate of cleavage and blastocyst developmental competence were obtained 11,825 (85.3%) and 5,032 (36.3%) that was $7.0{\pm}3.8$ cleaved embryos and $3.0{\pm}2.5$ blastocysts per session. OPU derived embryo transfer were taken place in 2, 4, 6 and 7 local governments at 2010, 2011, 2012 and 2013 for 4 years and pregnancy rate were obtained 41.2, 43.9, 46.5 and 49.7% in each years. It means that pregnancy rate was continuously improved according of every year for 4 years. Pregnancy rate was significantly different according to individual local government in which was 62.7% in B, but 24.2% in F at 2012. Paternity identification was carried out total 26 offspring in C local government of 2012 and then confirmed 100% agreement of its analysis. In conclusion, the results obtained the possibility of mass production of elite cow embryos as well as offspring by OPU derived embryo production system, of which could be decreased the required time of genetic improvement.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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