We have reported that water-extracted Korean mistletoe (KM-110) had various biological activities such as antitumor and immunomodulatory activity, and the pectin fraction (KML-C) of the extract was one of major factors related to its biological functions. In this paper, we produced murine monoclonal antibody (mAb) against KML-C. The cAbs obtained were largely classified into two groups according to specificity to KML-C and ML-I, a pectin from European mistletoe. One group mAbs (9H7-D10 and 3C2-lH4) strongly reacted with KML-C, but not ML-I. In contrast, another group cAbs (8Bll-2C5, BE12-3E9 and 5E10-Fl) reacted with both KML-C and ML-1. The subisotypes of these mobs were shown to be IgGl (9H7-lD10, 3C2-lH4 and 8Bll-2C5) or IgM (8E12-3E9 and 5E10-Fl). To develop an assay system for determination of the amount of KML-C, we established the sandwich ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) method using these mAbs and horse radish peroxidase (HRP)-labelled cAbs. In various combinations of the cAbs for coated antibody and detection antibody, the sandwich ELISA quantitatively detected KML-C, showing the detection limit ranging from 7-5,000 ng/ml. Especially reproducibility (C.V) of the sandwich ELISA, in which 8E12-3E9 was used for coating antibody and 8Bll-2C5-HRP for detection antibody, was 4.59-5.83 in intra assay, and 3.9-9.4 in inter assay.
Background: Defective or immature antibody responses to pathogens in children may explain the increased susceptibility to acute otitis media. However, there is no study in Korea patients whether a correlation exists between otitis media with effusion and the levels of serum immunoglobulins, IgG subclasses, IgA, IgM and IgE. Methods: 45 children with otitis media with effusion more than 4 episodes in 12 months or 3 episodes in 6 months, 62 children with otitis media with effusion less than 3 episodes in 12 months and 102 children for control group took part in the study at the Department of Otorhinolaryngology of the KyungHee University from May 2004 to Feburary 2007. Serum immunoglobulin levels were determined by nephelometry. And then the relationship between otitis media with effusion and serum immunoglobulin level was evaluated. Results: In otitis media prone group, serum IgG1, IgG2, IgG4, and IgA level was lower than those level of control group, it was significantly decreased (p<0.05). In otitis media group, serum IgA, IgE, and IgG4 level was lower than those level of control. But it was not statistically significant (p>0.05). Conclusion: Lower immunoglobulins in children with otitis media with effusion suggest a generalized decreased antibody responses. Lower levels of serum IgG1, IgG2, IgG4, and IgA may be related with chronicity or intractability of otitis media with effusion.
목적: 뎅기바이러스 감염 환자 발생은 해외 여행이 증가함에 따라 증가하고 있다. 최근 감염 경험이 없는 사람에게 백신을 접종하면 이후 야생 뎅기바이러스 감염 시 중증 뎅기열 증상을 보일 수 있다고 연구된 바 있다. 따라서, 본 연구는 한국의 다양한 연령군에서 뎅기바이러스에 대한 혈청역학을 연구하였다. 방법: 건강한 영아 98명(2개월-1세), 청소년 152명(13-19세), 성인 90명(20-50세) 및 노인 106명(65세 이상)에서 수집한 혈청 총 446명을 대상으로 하였다. 각 연령군의 뎅기바이러스 immunoglobulin G (IgG) 항체 검사를 ELISA을 통해 측정하였다. 또한 뎅기바이러스 IgG 항체 검사에서 양성 또는 equivocal을 보이는 혈청에 한하여 일본뇌염 바이러스의 IgG 항체를 검사하였다. 결과: 총 446명 검체 중, 청소년군에서 1명(0.2%)만 뎅기바이러스 항체 검사에서 양성으로 나왔다. Equivocal은 14명(3.1%)으로, 청소년군 10명과 노인군 4명이 해당하였다. 뎅기바이러스 IgG 양성이 나온 1명에서 일본뇌염 바이러스 또한 IgG 양성으로 나왔다. 뎅기바이러스 IgG equivocal이 나온 14명에서는 일본뇌염 바이러스 IgG 양성이 6명, equivocal이 3명이었고 음성은 5명이었다. 결론: 한국인에서 뎅기바이러스에 대한 항체 보유율은 매우 낮았다. 본 연구는 향후 뎅기열 예방을 위한 보건 정책 수립에 중요한 자료가 될 수 있을 것이며 향후 지속적인 혈청면역 평가도 필요할 것이다.
The present study evaluated the potential use of immunoglobulin prepared from egg yolk of chickens immunized with Escherichia coli K88 (IgY-Ec) in the control of E. coli K88 infection in RAW 264.7 murine macrophage. The binding activity of IgY-Ec against E. coli K88 surface protein was more specific and increased than control IgY. In infection assay of E. coli in macrophage, the specific IgY-Ec to E. coli K88 remarkably inhibited the phagocytic activity comparing to nonspecific IgY (p<0.001). In adherence assay, bacterial adhesion on macrophage cells was definitely reduced by preincubation of IgY-Ec compared with nonspecific IgY (p<0.05). These findings suggested that IgY-Ec have the protective effects against pathogens and IgY-based diets may have potential benefits for preventing or treating various infections in domestic animals.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Coffee is a complex chemical mixture, with caffeine being the most well-known bioactive substance. The immunomodulatory and anti-inflammatory properties of coffee and caffeine impact health in various aspects, including the respiratory system. The objective is to investigate the effects of coffee and caffeine on airway hyperresponsiveness and allergic reactions, as well as to analyze and compare associated cytokine profiles. MATERIALS/METHODS: BALB/c mice were intraperitoneally sensitized with ovalbumin (OVA) and given OVA inhalation to induce airway hypersensitivity. Two weeks after sensitization, they were intragastrically gavaged with coffee or caffeine, both containing 0.3125 mg caffeine, daily for 4 weeks. Control mice were fed with double-distilled water. Serum OVA-specific antibody levels were measured beforehand and 5 weeks after the first gavage. Airway hyperresponsiveness was detected by whole body plethysmography after gavage. Cytokine levels of bronchoalveolar lavage and cultured splenocytes were analyzed. RESULTS: Coffee effectively suppressed T helper 2-mediated specific antibody response. Airway responsiveness was reduced in mice treated with either coffee or caffeine. Compared to the control, coffee significantly reduced OVA-specific immunoglobulin (Ig) G, IgG1 and IgE antibody responses (P < 0.05). Caffeine also attenuated specific IgG and IgG1 levels, though IgE level was unaffected. Coffee significantly reduced interleukin (IL)-4 and increased IL-10 concentration in spleen cells and bronchoalveolar lavage fluid (P < 0.05). CONCLUSIONS: Coffee effectively attenuated airway hyperresponsiveness and systemic allergic responses induced by OVA food allergen in mice. As a complex composition of bioactive substances, coffee displayed enhanced immunomodulatory and anti-inflammatory effects than caffeine.
OVA를 항원으로 한 식품알레르기 마우스 모델을 이용하여 감태 물 추출물의 알레르기 억제 효과를 확인하였다. 먼저, OVA로 면역한 마우스의 비장세포에 감태 물 추출물을 첨가하여 배양한 후, 배양 상층액의 IgE antibody와 IL-4 및 IFN-$\gamma$ cytokine 분비량을 측정하였다. 그 결과, $10\sim100{\mu}g$/mL 농도의 감태 물 추출물 첨가로 비장세포의 IgE 분비량이 농도 의존적으로 감소하였고, IL-4 및 IFN-$\gamma$ 분비량도 감태 물 추출물 첨가 농도가 증가할수록 감소하였다. 감태의 알레르기 억제능을 in vivo 실험을 통해 확인하기 위해 OVA로 알레르기를 유발한 마우스에 감태 물 추출물을 복강주사 한 후 혈청과 비장세포의 IgE 분비능을 확인하였다. 혈청의 항체 분비량 측정 결과, 1, 5 및 10 mg/kg BW 농도의 감태 물 추출물 투여군이 PBS 투여군에 비해 유의적으로 낮은 OVA-specific IgE 분비량을 보였다. 반면, IgG1과 IgG2a 분비량은 추출물 투여군과 PBS 투여군 사이에 유의적인 차이를 보이지 않았다. 또한 비장세포의 IgE 분비량이 5 및 10 mg/kg BW 농도의 감태 물 추출물의 복강주사에 의해 감소함을 확인하였다. 이상의 결과를 통해 감태 물추출물이 IgE 분비량의 유의적인 감소 효과를 통해 식품알레르기 반응을 효과적으로 억제할 수 있을 것으로 사료된다.
윤충 감염시 증가되는 기생충 특이 IgE 항체는 항기생충 작용을 하는 것으로 알려져 있으나 총 IgE 항체의 90% 이상을 차지하는 비특이성 IgE 항체의 역할에 대해서는 잘 알려져 있지 않다 이 실험에서는 폐흡충 감염 마우스에 anti-lgE 단일크론 항체를 처치한 후 혈청내 IfgE. 비장 B 세포 의 $Fc{\varepsilon}RII/CD23$의 발현 및 충체수를 관찰하여 비특이성 IgE가 숙주의 방어면역에 미치는 역할을 알아보았다. Anti-lgE를 처치한 폐흡충 감염 마우스의 혈청내 총 IgE 항체의 양은 실험 기간 동안 억제되어(($<{\;}1{\;}{\mu\textrm{g}/ml}$) PBS로 처치한 감염군에 비해 유의한 수준(P < 0.05)으로 감소되었다 또 한 Anti-IgE를 처치한 폐흡충 감염 마우스에서의 $Fc{\varepsilon}RII/CD23$ 양성인 비장 B 세포수 및 그 발현도 PBS로 처치한 감염군에 비해 실험 기간 동안 유의한 수준(P < 0.05)으로 감소되었다. 충체 회수율에 있어서도 anti-lgE를 처치한 감염 마우스는 6주에 44%로 PBS로 처치한 감염군(75%)에 비해 유의한 수준(P < 0.05)으로 감소하였다. 이상의 결과를 종합할 때 폐흡충 감염 마우스에서 높게 증가되는 비특이성 IgE는 숙주의 방어면역을 방해하여 오히려 충체를 보호하는 역할을 하는 것으로 생각된다.
Background: Although a skin test is the primary option for detecting allergen-specific IgE in clinics, the serum IgE immunoassay is also important because it allows for the diagnosis of allergy without any accompanying adverse effect on the patient. However, the low detection limit of IgE levels by immunoassay may restrict the use of the method in some occasions, and improving its sensitivity would thus have a significant implication in allergy-immunology clinics. Methods: In this study, we attempted to detect specific serum IgE by using immuno-polymerase chain reaction (IPCR) which combines the antigen-antibody specificity of enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) with the amplification power of PCR. Results: Our results demonstrated that Blo t5-specific serum IgE can be detected by IPCR with a 100-fold higher sensitivity than ELISA, and cross-reactivity of serum IgE to other mite allergens is able to be analyzed by using only $0.3{\mu}l$ of serum sample. Use of real-time IPCR seemed to permit more convenient determination of specific serum IgE as well. Conclusion: We believe that IPCR can serve as a valuable tool in determining specific serum IgE, especially when the amount of serum sample is limited.
임상증상 없이 검변을 통하여 검출된 이질아메바 포낭양성자를 어떻게 다루어야 할지 오랫동안 논란이 있었으나 이중에서 병원성이 강한 이질아메바(E. histolytica)만 치료하고 병원성이 없는 동형아메바(E. dispar)는 치료하지 않는 것으로 의견이 모아져 있다. 따라서 이 두 종을 감별하는 것이 실제적으로 중요하게 되었고 이를 위하여 동위효소 분석 유전자 분석. 혈청학적인 검사가 가능하다. 그러나 앞의 두 분석법은 원충을 배양하여야 가능하기 때문에 적용하기 어려운 경우가 많아 혈청학적인 감별이 실제적으로 유용하다. 이 연구는 우리 나라에서 무균배양에 성공한 이질 아메바 YS-27의 항원성을 확인된 아메바 감염자 혈청과 면역이적법으로 검증하고. 이를 이용하여 무증상 포낭배출자에서 두 종의 감염을 감별하고자 하였다. 시스테인계 단백질분해효소 억제제인 E64를 첨가한 이질아메바의 항원은 117. 110. 99. 68. 66. 60. 54. 52 46. 45 kDa 분획이 이질아메바 감염이 확인된 사람의 혈청내 IgG 항체와 반응하였고 동형아메바 대장아메바 Beastnystis 및 대조군의 혈청과는 117 kDa 분획이 미약하게 반응하였다. 포낭양성자의 혈청내 IgA 항체와 많은 분획이 반응하였으나 두 종 양성자간에 차이가 없었고 혈청내 IgM과 IgE 항체와 반응하는 분획이 없었다. 동형아메바의 항원은 두 종 양성자 혈청내 모든 군의 항체와의 반응에서 두종을 감별하지 못하였다. 따라서 이질아메바의 항원과 혈청내 IgG 항체 반응이 두 아메바 감염 을 감별할 수 있었다. 증상이 없는 포낭배출자 24명의 혈청을 면역이적 반응시킨 결과 2명에서 46 과 45 kDa 분획을 제외한 다른 모든 분획과 반응하여 이질아메바 감염자로 확인하였고 22명은 동 형아메바 양성자로 확인하였다. 이 자료를 토대로 하면 우리 냐라에서 검출되는 단순 포낭배출자 의 90% 이상은 이질아메바가 아니라 동형아메바 감염자이고. 이에 따라서 포낭양성자 중 환자가 많지 않은 사실을 설명할 수 있을 것이다. 이질아베바 조항원을 이용한 면역이적법은 증상이 없는 아메바 포낭배출자 중 치료를 꼭 필요로 하는 사람을 찾아내는 방법으로 유용함을 확인하였다.
The generation of functional recombinant antibodies from hybridomas is necessary for antibody engineering. However, this is not easily accomplished due to high levels of aberrant heavy and light chain mRNAs, which require a highly selective technology that has proven complicated and difficult to operate. Herein, we attempt to use an alkaline phosphate (AP)-fused form of single-chain variable fragment (scFv) for the simple identification of a hybridoma-derived, functional recombinant antibody. As a representative example, we cloned the scFv gene from a hybridoma-producing mouse IgG against branched-chain keto acid dehydrogenase complex-E2 (BCKD-E2) into an expression vector containing an in-frame phoA gene. Functional recombinant antibodies were easily identified by conventional enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) by employing scFv-AP fusion protein, which also readily serves as a valuable immuno-detective reagent.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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