• 제목/요약/키워드: ITS rDNA

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대장균 Leucine-Responsive Regulatory Protein의 정제 및 형광분광학적 특성 분석 (Purification and Fluorometric Analysis of Leucine-Responsive Regulatory Protein from Escherichia coli)

  • 이찬용;김성철;서초희
    • 미생물학회지
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    • 제46권1호
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    • pp.104-108
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    • 2010
  • Leucine-responsive regulatory protein (Lrp)는 대장균 (Escherichia coli)에서 발견된 '글로벌 조절자(global regulator)'로서 Lrp-regulon이 leucine에 의하여 상이한 형태의 조절 양상을 나타낸다. 6XHis-tag 시스템으로 제조한 야생형 Lrp (Lrp Wt)와 돌연변이 Lrp (Lrp R145W) 단백질을 정제하여 그들의 생화학적 성질을 조사하였다. 이들은 gel retardation assay를 통하여 ilv 오페론의 프로모터 영역 consensus 염기서열인 21bp의 이중가닥 DNA와 결합하여 복합체를 형성하는 것을 확인 하였다. 형광성 아미노산인 tryptophan을 지닌 Lrp R145W은 단백질의 농도가 증가함에 따라 형광이 커졌으며, 아미노산 leucine에 의하여 형광성의 변화가 관찰되었다. 즉 1 ${\mu}M$의 Lrp R145W 단백질에 leucine을 첨가하여 결합시키면 약 20 ${\mu}M$까지는 형광이 증가하다가 그 이상의 농도에서는 감소하는 양상을 얻었다. 이들 실험 결과는 leucine과 Lrp의 결합 양상 및 구조변이에 관한 심층연구에 있어서 Lrp의 고유 형광성이 요긴하게 쓰일 수 있음을 시사한다.

조피볼락(Sebastes schlegeli) 선충(Nematode: Philometridae)에 대한 분자생물학적 동정 및 PCR 검출법 개발 (Molecular Identification and Development of a PCR Assay for the Detection of a Philometrid Nematode in Rockfish Sebastes schlegeli)

  • 서한길;서정수;류민경;이은혜;정승희;한현자
    • 한국수산과학회지
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    • 제48권5호
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    • pp.731-738
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    • 2015
  • Nematode infection in the epithelial tissue of cultured rockfish Sebastes schlegeli was first reported in 2012. Since then, nematode infections have caused serious economic losses in rockfish aquaculture on the west coast of Korea. Taxonomic and life cycle information for this parasite are currently unknown. In this study, 18S rRNA and cytochrome c oxidase subunit I (COI) genes were used for molecular identification and polymerase chain reaction (PCR) to detect the invisible stages of this parasite. Nucleotide sequences of the 18S rRNA of the rockfish nematode showed 98% identity with that of Philometra morii. Therefore, this rockfish nematode was classified to the Philometridae family. However, we could not identify it to genus level using 18S rRNA. Its COI nucleotide sequences shared 85% and 82% identities with those of Bursaphelenchus sinensis and Philometra overstreeti, respectively. In addition, two gene-specific primer sets were designed based on the 18S rRNA gene to detect the intermediate host and nematode larvae. These primers were specific to this rockfish nematode without cross-reacting to other pathogens. The detection limit of the PCR assay using these primers was 1,000 copies of nematoda plasmid DNA. Therefore, the PCR assay described here is suitable for the detection of nematode DNA within rockfish. In addition, this PCR assay could be used to detect nematode larvae and the intermediate host.

Deletion of xylR Gene Enhances Expression of Xylose Isomerase in Streptomyces lividans TK24

  • Heo, Gun-Youn;Kim, Won-Chan;Joo, Gil-Jae;Kwak, Yun-Young;Shin, Jae-Ho;Roh, Dong-Hyun;Park, Heui-Dong;Rhee, In-Koo
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제18권5호
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    • pp.837-844
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    • 2008
  • Glucose (xylose) isomerases from Streptomyces sp. have been used for the production of high fructose corn syrup for industrial purposes. An 11-kb DNA fragment containing the xyl gene cluster was isolated from Streptomyces lividans TK24 and its nucleotide sequences were analyzed. It was found that the xyl gene cluster contained a putative transcriptional repressor (xylR), xylulokinase (xylB), and xylose isomerase (xylA) genes. The transcriptional directions of the xylB and xylA genes were divergent, which is consistent to those found in other streptomycetes. A gene encoding XylR was located downstream of the xylB gene in the same direction, and its mutant strain produced xylose isomerase regardless of xylose in the media. The enzyme expression level in the mutant was 4.6 times higher than that in the parent strain under xylose-induced condition. Even in the absence of xylose, the mutant strain produce over 60% of enzyme compared with the xylose-induced condition. Gel mobility shift assay showed that XylR was able to bind to the putative xyl promoter, and its binding was inhibited by the addition of xylose in vitro. This result suggested that XylR acts as a repressor in the S. lividans xylose operon.

ITS 염기서열분석에 의한 한국산, 중국산 및 러시아산 가시오갈피의 유연관계 분석 (Comparative Analysis of Acanthopanax senticosus Harms from Korea, China and Russia Based on the ITS Sequences of Nuclear Ribosomal DNA)

  • 한효심;김두영;이갑연;박완근;조인경;정재성
    • 한국자원식물학회지
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    • 제19권1호
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    • pp.54-58
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    • 2006
  • 한국, 중국, 러시아에서 자생하고 있는 가시오갈피에 대한 유전적 유연관계를 파악하기 위해 ITS (internal transcribed spacer)의 염기서열을 분석하였다. Universal primer를 사용하여 PCR로 증폭시킨 후 염기서열을 결정한 결과 ITS의 길이는 162 bp의 5.8S rRNA 유전자를 포함하여 한국산과 중국산은 608 bp 그리고 러시아산은 611 bp로 나타났다. ITS영역의 G+C 함량은 한국산과 중국산이 60.20%이고 러시아산이 60.06%였다. 한국산과 중국산의 ITS영역은 100% 동일하였으며, 러시아산은 한국산과 비교했을 때 3 bp의 염기삽입과 2 bp의 염기치환이 존재하여 99.2%의 상동성을 나타내었다. 따라서 한국산 가시오갈피는 러시아산보다 중국산과 유전적 유연관계가 더 가까운 것으로 추정된다. 또한 동일 속내에서는 오갈피나무보다는 음나무와 ITS 염기서열이 유사한 것으로 나타났다.

유기물 문화재 보존환경의 효율적 미생물 제거를 위한 표준화 연구 (Standard Research for an Anti-Bacterial Effectivity in Conservational Environment of Organic Cultural Properties)

  • 서민석;정용재;홍정기;송지애
    • 한국문화재보존과학회:학술대회논문집
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    • 한국문화재보존과학회 2005년도 제22회 학술대회 발표 논문집
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    • pp.252-254
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    • 2005
  • 박물관 수장고와 전시실 내의 유기물 문화재는 실내공기에 부유하고 있는 먼지와 곰팡이로 인해 생물적 피해를 받는다. 미생물로 인한 피해를 줄이기 위하여 박물관에서는 환경 조절법을 시행하거나 수장고와 전시실 내에 보존약제를 놓거나 또는 훈증 처리를 통한 방균 방제처리를 시행하고 있다. 미생물의 발생은 문화재 표면의 착색, 재질 분해, 변질 등을 야기한다. 본 연구는 위에 제시된 방법 외에 공기청정기를 이용하여 실내 부유 미생물 수를 줄여 유기물 문화재의 피해를 줄일 수 있는지를 알아보았다. 국립문화재연구소 내 생물과학실의 실험실 한 곳을 임의로 지정하여 공기청정기를 설치하기 전 곰팡이의 수를 측정하고, 공기청정기를 설치한 후의 곰팡이 변화를 4일 간격으로 측정하였다. 또한, 공기 중의 ???r성분 분석을 위하여 가스크로마토그래피(Gas Chromatography)를 이용하였다. 측정결과 곰팡이의 수는 대체적으로 감소하였으며, 채취한 곰팡이를 배양하여 동정을 실시하였다. 곰팡이 동정은 현미경을 통한 형태학적 분류와 ITS(Internal Transcribed Sequence)를 이용한 rDNA(Ribosomal DNA) PCR(Polymerase Chain Reaction)분석 두 가지 방법을 이용하여 동정하였다.

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New Record of $Mariannaea$ $elegans$ var. $elegans$ in Korea

  • Tang, Longqing;Hyun, Min-Woo;Yun, Yeo-Hong;Suh, Dong-Yeon;Kim, Seong-Hwan;Sung, Gi-Ho
    • Mycobiology
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    • 제40권1호
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    • pp.14-19
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    • 2012
  • A $Mariannaea$ fungus was isolated during investigation of an elm tree infested with unidentified beetles. Based on morphological characteristics and molecular analysis of the internal transcribed spacer rDNA sequence, the fungus was identified as $Mariannaea$ $elegans$ var. $elegans$. Fungal growth was better on malt extract agar than on potato dextrose agar and oatmeal agar. Optimal temperature and pH for growth of the fungus were $30^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. The fungus was found to have the ability to produce extracellular enzymes such as amylase, ${\beta}$-glucosidase, cellulase, and protease. This is first report on $M.$ $elegans$ var. $elegans$ in Korea.

Three New Recorded Species of the Physalacriaceae on Ulleung Island, Korea

  • Park, Ki Hyeong;Kim, Changmu;Kim, Minkyeong;Kim, Nam Kyu;Park, Jae Young;Eimes, John A.;Cho, Hae Jin;Han, Sang-Kuk;Lim, Young Woon
    • Mycobiology
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    • 제45권1호
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    • pp.9-14
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    • 2017
  • Most known species in the Physalacriaceae are saprotrophs that grow on decaying leaves and wood, and approximately 21 genera in the Physalacriaceae have been reported worldwide. During an ongoing survey of indigenous fungi in Korea, four specimens belonging to the Physalacriaceae were collected on Ulleung Island. These specimens were identified as three species based on morphological characteristics and molecular analysis of rDNA-internal transcribed spacer sequences. Three species in three genera were shown to be new records in Korea: Hymenopellis orientalis, Paraxerula hongoi, and Ponticulomyces orientalis. The latter two are the first records of these genera in Korea. In this study, we provide detailed morphological descriptions of these species and describe their phylogenetic position within the Physalacriaceae.

눈측백(Thuja koraiensis Nakai)에서 분리한 내생균의 다양성 (Diversity of Endophytes Isolated from Thuja koraiensis Nakai in the Korean Peninsula)

  • 어주경;이봉형;엄안흠
    • 한국균학회지
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    • 제44권2호
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    • pp.113-117
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    • 2016
  • 화악산, 설악산, 함백산에 서식하는 눈측백의 잎에서 내생균을 분리하여 다양성을 조사하였다. 숙주식물로부터 총202개의 균주를 분리하였고, 이 균주들의 ITS rDNA 염기서열을 분석한 결과 32개의 분류군으로 동정되었으며, Diaporthe nobilis, Mycosphaerella handelii, Pestalotiopsis cocculi 3종이 국내 미기록종으로 확인되었다. 분리된 균주 중 61.5%는 Dothideomycetes였으며, 27.0%는 Sordariomyetes, 11.5%는 Leotiomycetes에 속하였다. 눈측백에 서식하는 내생균에서 우점종은 Dothideomycetes에 속하는 Phyllosticta spinarum인 것으로 조사되었으며 이 종에 대한 후속연구가 필요한 것으로 생각된다.

표주박이끼(Funaria hygrometrica)에서 분리된 2종의 국내 미기록 내생균 (Two Unrecorded Endophytic Fungi Isolated from Funaria hygrometrica in Korea)

  • 최현숙;박혁;엄안흠
    • 한국균학회지
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    • 제47권4호
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    • pp.313-318
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    • 2019
  • 표주박이끼의 헛뿌리(rhizoid)에서 내생균을 분리하였다. 분리된 균주는 형태적 특성 및 internal transcribed spacer, large subunit rDNA 영역의 분자적 분석을 토대로 동정하였다. 연구 과정에서 2종의 국내 미기록종 내생균 균주를 확인하였고, 확인된 종은 Curvularia protuberata, Didymella anserina이다. 미기록종 내생균 균주의 형태적 특성 및 계통 분석 결과에 대해 기술하였다.

Regulation of Ascorbate Peroxidase Gene Expression in Response to Stresses and Phytohormone in Rehmannia glutinosa

  • Park Myoung Ryoul;Park Moon Hee;Yoo Nam Hee;Yu Chang Yeon;Yun Song Joong
    • 한국작물학회지
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    • 제50권4호
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    • pp.286-290
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    • 2005
  • Ascorbate peroxidase (APX) plays a crucial role in the detoxification of hydrogen peroxide. APX activity is maintained significantly higher in the paraquat­treated leaves of the paraquat-tolerant Rehmannia glutinos. This study was conducted to understand structural and regulatory characteristics of APX gene in R. glutinosa. A putative APX cDNA clone (RgAPX1) was isolated from a leaf cDNA library using a partially sequenced expressed sequence tag clone. RgAPX1 is consisted of 1148 bp nucleotides and contains an open reading frame encoding a 250 amino acid-long polypeptide. Deduced RgAPX1 amino acid sequence shares higher sequence similarity to cytosolic APXs. RgAPX1. expression was higher in the leaf than in the flower and root. Southern blot result indicates the presence of one or two RgAPX1-related genes in R. glutinosa genome. RgAPX1 transcription was affected differentially by various stresses and phytohormone. The results indicate that RgAPXl is constitutively expressed in most tissues and its expression is modulated for the immediate and efficient detoxification of $H_2O_2$ under normal and stress conditions.