본 실험에서는 외래 유전자의 효율적인 발현을 위하여 GFP 표지유전자를 이용하여 여러 종류의 promoter를 검정하였다. 또한, retrovirus vector에 WPRE 서열을 도입함으로써 GFP 유전자의 발현 증가 여부를 확인하였다. 모든 표적 세포에 있어서 UbC와 β-actin promoter에 비해 RSV와 CMV promoter 통제하의 GFP의 발현이 더 강하게 나타났으며, 특히 CEF 세포에서는 RSV promoter가 가장 우수한 것으로 확인되었다. WPRE의 도입으로 인한 발현율의 증가는 CEF를 제외한 세포주에서 promoter의 종류에 관계없이 확인되었다. 이상의 결과로 각 세포주는 promoter에 따라 발현 양상이 약간의 차이를 보이고 있으나 RSV와 CMV promoter에서 유전자의 발현이 보다 효율적이며, WPRE 서열이 도입된 경우에 HeLa와 PFF 세포에서 발현이 현저히 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과는 효율적인 유전자의 발현 체계를 확립하는데 기여함으로써 더 나아가 유전자 치료나 형질전환 동물생산에 적극적으로 활용되어질 수 있을 것이다.
Integrins are transmembrane receptor proteins that mediate cell-cell adhesion and cell-extracellular matrix (ECM) adhesion. The deregulation of cell-ECM adhesion and the abnormal expression of beta1 (${\beta}1$) integrins (ITGB1s) are involved in tumor development and metastasis. In the liver, the expression of integrins and ECM proteins can be a cause of hepatocellular carcinoma (HCC) development. We performed direct DNA sequencing of 24 individuals, and identified 23 sequence variants of ITGB1 polymorphisms. Among these 23 variants, 7 common variants were selected based on frequencies and linkage disequilibrium, and then genotyped in a larger-scale group of subjects (n=1,103). The genetic associations of ITGB1 polymorphisms with the clearance of HBV and HCC outcome of HBV patients were analyzed using logistic regression models and Cox relative hazard models. Although there was no significant association observed between the polymorphisms and the HCC outcome of HBV patients, the second most common haplotype (ITGB1 haplotype-2 [C-C-C-C-T-C-T]) was putatively associated with HBV clearance (OR=0.75, p=0.008 and $P^{corr}=0.05$). The minor allele frequency (MAF) of ITGB1 haplotype -2 of the spontaneously recovered (SR) group was significantly higher than that of the chronic carrier group (CC) (freq. = 0.248 vs. 0.199). The information derived from this study could be valuable for understanding the genetic factors involved in the clearance of HBV.
E6AP (E6-associated protein)는 C형 간염바이러스(hepatitis C virus, HCV)의 코어 단백질 유비퀴틴화와 프로테오좀 분해를 유도하여 캡시드 조립을 저해함으로써 HCV 복제를 억제하는 것으로 알려져 있다. 반면에 HCV 코어 단백질은 숙주의 항바이러스 방어계에 대항하고 자신의 유비퀴틴-의존적 프로테아좀 분해를 막기 위하여 DNA 메틸화를 통하여 E6AP 발현을 저해하는 전략을 진화과정에서 획득하였다. 본 연구에서는 HCV 코어 단백질이 E6AP 발현을 저해하는 기전을 밝혀내고자 하였다. HCV 코어 단백질은 HepG2 세포에서 DNA 메틸화 효소들인 DNMT1, 3a 및 3b의 단백질 수준과 효소 활성을 증가시켜 프로모터 과메틸화를 통하여 E6AP 발현을 저해하였지만 p53를 발현하지 않는 Hep3B 세포에서는 이러한 효과들이 관찰되지 않았다. 흥미롭게도 Hep3B 세포에 p53만 과발현시키면 HCV 코어 단백질이 없더라도 DNMT가 활성화되고 프로모터 과메틸화를 통하여 E6AP 발현이 저해되었다. 또한 p53 녹다운 및 과발현 실험을 통하여 p53 활성화가 HCV 코어 단백질의 효과에 필수적임을 알 수 있었다. 이로 인하여 Hep3B 보다 HepG2 세포에서 낮은 수준의 유비퀴틴화된 HCV 코어 단백질이 검출되었다. 따라서 HCV 코어 단백질은 p53-의존적으로 자신의 유비퀴틴-매개성 프로테아좀 분해를 저해한다.
IVIG 제재 투여시 HCV 전파 여부와 anti-HCV 검사의 의의를 알아보기 위하여, IVIG를 투여 받았던 36례를 대상으로 조사한 결과 전례에서 IVIG 투여 후 1주일에 anti-HCV 양성을 보였으나 3개월 후까지 양성이었던 경우는 8례이었다. 이들에 대한 PCR검사를 실시한 결과 한 례에서도 바이러스가 검출되지는 않았다. 이것으로 보아 anti-HCV 양성 반응은 단순한 항체의 전이로 생각되며 HCV의 전파로 인한 감염을 의미하지는 않는 것으로 생각된다. 그러나 IVIG 투여 후 HCV 감염의 례가 보고되고 있고 본 연구에서는 많은 환자를 대상으로 여러시기에 제조된 IVIG 제품으로 장기간 조사해 보지 않았으므로 IVIG 제재의 제조 과정에서의 HCV 불활성화가 완전하지 못할 가능성을 배제할 수는 없다. 그리고 IVIG 제작을 위한 공혈자의 HCV screening은 철저하게 해야될 것으로 생각되며 앞으로 IVIG 제재 투여시 약제의 Lot No.를 기록하여 문제점의 발생을 신중히 살펴볼 필요는 있다고 생각된다.
In order to find out the status of routine-immunization in a rural area, this study was performed, through analyzing the data which was obtained from the immunization register of infants who was born at Su-Dong myun in 1996 and 1997, managed by Su-dong Myun health subcenter. The results are as follows. 1. B.C.G immunization rate was the highest such as 52.2% within 1 month and next order such 34.8% at 2 month in 1996. In 1997, the highest such as 73.8%, almost all, within 1 month. 2. D.P.T immunization rate in 1996 showed, almost all, the highest at 3 month(79.4%) for 1st dose and at 5 month(78.4%) for 2nd dose. However, the rate for 3rd dose showed the highest at 7 month(51.4%), and next order at 8 month(35.1%) and at 6 month(13.5%). D.P.T immunization rate in 1997, similarly showed the highest at 3 month(81.8%) for 1st dose, at 5 month(71.2%) for 2nd dose and at 7 month(71.4%) for 3rd dose. 3. Hepatitis B immunization rate showed the highest at birth at once or within one week(87.0%) for 1st dose in 1996 and (94.7%) in 1997. The rate for 2nd dose showed the highest at 2 month(51.7%) in 1996 and (50.0%) in 1997, and next order at 1 month(44.8%) in 1996 and (34.4%) in 1997. The rate for 3rd dose showed the highest at 3 month(54.8%) in 1996 and 5 month(54.8%) in 1997, and next order at 5 month(25.8%) in 1996 and at 3 month(26.0%) in 1997. 4. Measles immunization rate was 76.1% in 1996. The rate(76.1%) by the kind of vaccine was the highest with measles-MMR(34.8%), and with MMR(32.6%) and next order with measles(8.7%). The rate by measles immunization time(month) was the highest such as 35.0% at 9 month and 10 month respectively and the rate by MMR was the highest at 16 month(35.5%), and 15 month(22.5%), 13 month (12.9%) and 14 month(12.9%) in next order.
The nonstructural protein 5A (NS5A) encoded by the human hepatitis C virus (HCV) RNA genome is a multifunctional phosphoprotein. To analyse the influence of NS5A on apoptosis, we established an Hep-NS5A cell line (HepG2 cells that stably express NS5A) and induced apoptosis using tumour necrosis factor $(TNF)-{\alpha}$. We utilised the MTT assay to detect cell viability, real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot to analyse gene and protein expression, and a luciferase reporter gene experiment to investigate the targeted regulatory relationship. Chromatin immunoprecipitation was used to identify the combination of $NF-{\kappa}B$ and miR-503. We found that overexpression of NS5A inhibited $TNF-{\alpha}$-induced hepatocellular apoptosis via regulating miR-503 expression. The cell viability of the $TNF-{\alpha}$ induced Hep-mock cells was significantly less than the viability of the $TNF-{\alpha}$ induced Hep-NS5A cells, which demonstrates that NS5A inhibited $TNF-{\alpha}$-induced HepG2 cell apoptosis. Under $TNF-{\alpha}$ treatment, miR-503 expression was decreased and cell viability and B-cell lymphoma 2 (bcl-2) expression were increased in the Hep-NS5A cells. Moreover, the luciferase reporter gene experiment verified that bcl-2 was a direct target of miR-503, NS5A inhibited $TNF{\alpha}$-induced $NF-{\kappa}B$ activation and $NF-{\kappa}B$ regulated miR-503 transcription by combining with the miR-503 promoter. After the Hep-NS5A cells were transfected with miR-503 mimics, the data indicated that the mimics could reverse $TNF-{\alpha}$-induced cell apoptosis and blc-2 expression. Collectively, our findings suggest a possible molecular mechanism that may contribute to HCV treatment in which NS5A inhibits $NF-{\kappa}B$ activation to decrease miR-503 expression and increase bcl-2 expression, which leads to a decrease in hepatocellular apoptosis.
인체의 바이러스 감염 방어기전에서 T 림프구는 중요한 역할을 한다. 하지만, 만성 C형 간염 바이러스의 일차적 복제장소인 간염 환자의 간에서 분리된 HCV 특이 T 림프구는 심각한 기능결핍을 보인다. 이러한 T 림프구 기능결핍의 이유로는 PD-1, CTLA-4 등 면역억제 물질의 발현, 또는 간에서 특이적으로 유도되는 면역내성(immune tolerance)이 있으나, 간세포(hepatocytes)와 HCV 특이 T 림프구의 상호작용에 대해서는 명확하게 확립되어 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 HLA(human leukocyte antigen) A2+ 간암세포주(human hepatoma cell line; huh7.5)가 항원제시(antigen presentation)를 통해 효과적으로 HCV 특이 T 림프구를 활성화시키며 간암세포주(huh7.5) 표면의 PD-L (program death ligand) 1 발현은 T림프구의 활성을 감소시켜 면역조절의 가능성이 있음을 시사하였다. 또한, HCV 특이 tetramer 반응은 T 림프구의 과도한 활성으로 자기사멸(apoptosis)의 경로에 있음을 caspase 3 활성으로 확인하였고, 역시 PD-L1의 발현이 T 림프구를 자기사멸(apoptosis)로부터 구제하여 caspase 3 활성이 감소하는 것을 확인하였다. 이는 PD-L1과 간성(liver) T 림프구 표면의 PD-1 결합이 T 림프구의 자기사멸을 막고, 또한 그 기능을 회복시켜 만성 C형 간염 치료에 응용될 수 있음을 시사한다.
목 적 : A형 간염은 수년동안 거의 발생 보고가 없었으나 최근 경인지역에서 A형 간염 발생이 증가하였다고 보고되고 있으며, 소아에서도 대전에서 집단 발생이 보고된 바가 있다. 이는 사회경제적으로 발전하고 주거환경이 좋아지면서 소아에서의 A형 간염에 대한 항체 보유율이 낮아진 결과, 감염원에 노출된 연장아와 성인에서 현증 감염이 증가된 것으로 추측된다. 이에 저자들은 경인 지역에서 건강한 소아의 A형 간염 항체 보유율을 조사하여 A형 간염의 역학적 특성을 이해하는데 도움이 되고자 이 연구를 시행하였다. 방 법 : 경인 지역의 l세 76명의 유아와 3세 78명 및 5세 58명의 유아원생과 11세, 13세, 15세, 17세의 초중고생 각각 100명씩을 채혈하였고 혈청을 분리하여 $-80^{\circ}C$에 보관하였다가 Abbott사의 AxSYM$^{(R)}$ HAVAB(Microparticle Enzyme Immunoassay : MEIA)를 이용하여 anti-HAV를 측정하였다. 결 과 : 1) 전부 612명을 검사하였고 남아 316, 여아 296명으로 남녀의 비는 1.1 : 1이었다. 2) 1세군에서는 10.5%(남아 6례, 여아 2 례)에서 anti-HAV가 양성이었고, 3, 5, 11, 13세 군에서는 전부 anti-HAV가 음성이었으며, 15세 군에는 6%(남학생 4례, 여학생 2례)에서 anti-HAV가 양성이었고, 17세 군에서는 11 %(남학생 7례, 여학생 4례)에서 양성이었으며 남녀간의 차이는 없었다. 결 론 : 경인 지역의 유아 및 학동기 소아에서 A형 간염 항체가 거의 형성되어 있지 않으므로 감염자와의 접촉이나 오염된 음식들을 통해 학동기 소아에서의 현증 환자 발생의 위험이 있어, A형 간염에 대한 관심을 가지고 진료에 임하는 것이 필요하며 예방 방법에 대한 지침이 만들어져야 될 것으로 생각된다.
Sato Shigeaki;Shiraki Takashi;Inoue Yoshiki;Takeshita Tatsuya;Morimoto Kanehisa
대한예방의학회:학술대회논문집
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대한예방의학회 1999년도 제51차 추계 학술대회 연제집
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pp.1-15
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1999
In a case-control study to evaluate the factors involved in the development of hepatocellular carcinoma, polymorphisms of the p53 gene were compared in 68 cases mostly infected with hepatitis C virus (HCV) and 68 controls matched for sex and age: DNA from peripheral blood leukocytes was analyzed by the polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism method and direct sequencing. Polymorphisms analyzed were those in exon 4 (CCC vs. CGC, Pro vs. Arg at codon 72, Al allele vs. A2 allele), intron 2 (C vs. G at nucleotide 38, Al vs. A2), intron 3 (C vs. A at nucleotide 65, Al vs. A2; absence and presence of 16 base pair repeat at nucleotides 24 to 39, Al vs. A2), intron 6 (A vs. G at nucleotide 62, Al vs. A2) and intron 7 (C and T vs. T and G at nucleotides 72 and 92, Al vs. A2). A significantly higher frequency of the allele for CCC (Pro, Al) at codon 72 of exon 4 was found in cases (39%) than in controls (26%) (p<0.05). Highly significant linkage of the polymorphisms in exon 4, intron 2, intron 3 and intron 7, and between the intron 3-16 bp duplication and polymorphism in intron 6 also was found. Matched Fair analysis showed significantly higher frequencies of certain haplotypes (1-1-1-1-2-2 or 1-1-2-1-2-1 for exon 4, intron 2, intron 3, the intron 3-16 bp duplication, intron 6 and intron 7) in cases than in controls (p=0.014, OR=2.27, 95% CI= 1.08-5.12). No preference of specific p53 polymorphisms for specific HCV genotype was detected. These findings suggest that in hepatocarcinogenesis mainly due to HCV infection, genetic factors may be involved and that genetic markers can serve as predictors of a high-risk group for hepatocarcinogenesis.
목 적 : 소아 신증후군에서 알부민을 비롯한 단백들과 IgG 치의 감소가 관찰된다. 신증후군에서 관찰되는 IgG 감소에서 IgG 아군간에 차이가 있는 지와 B형 간염 및 홍역 항체의 양성률이 대조군과 차이가 있는지를 알아보았다. 방 법 : 가톨릭대학교 대전성모병원 소아과에 신증후군으로 입원하였던 21명과 같은 연령대의 건강한 환아 25명을 대상으로, 혈청에서 IgG, IgM, IgA, IgE 및 IgG subclasses(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4), B형 간염 표면 항체(anti-hepatitis B suface IgG, anti-HBs IgG) 및 항홍역 IgG 항체(anti-measles IgG)를 측정하였다. 결 과 : 신증후군 환아들의 평균 연령 $6.9{\pm}3.0$세로, 면역글로불린 평균값은 IgG $390{\pm}187\;mg/dL$, IgG1 $287{\pm}120\;mg/dL$를 보였다. 대조군의 평균 연령은 $7.5{\pm}3.4$세로, IgG $1,025{\pm}284\;mg/dL$, IgG1 $785{\pm}19\;mg/dL$이었다. IgE 값에서 250 IU/mL 이상을 보인 경우는 신증후군에서 11명(52.4$\%$), 대조군에서 7명(28$\%$)이 있었다(.P=0.01). 신증후군 환아에서 IgG 및 IgG 아군 모두에서 유의한 감소를 보였으며(P<0.001), IgM 값은 증가($251{\pm}183\;mg/dL\;vs.\;153{\pm}55\;mg/dL$, P=0.02)를 보였으나 IgA 값은 차이를 보이지 않았다. 한편 Anti-HBs의 양성률은 신증후군 환아군에서 42.9$\%$(21명 중 9명), 대조군에서 52$\%$ (13/25명)를, 항홍역 항체 양성률은 각각 76$\%$ (16/21명)와 92$\%$ (23/25명)를 보였으나 통계학적으로 두 군간에 차이는 없었다. 결 론 : 소아 신증후군 환아에서 IgG 및 모든 IgG 아군의 감소를 보였다. 예방접종에 의한 B형 간염 및 홍역 항체 양성률의 감소가 관찰되었으나 통계학적인 차이는 보이지 않았다. IgG 감소의 기전에 대한 후속 연구가 필요할 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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