• Molecules and Cells
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• 제45권3호
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• pp.148-157
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• 2022

Hepatitis C virus (HCV) is a major cause of chronic liver disease and is highly dependent on cellular proteins for viral propagation. Using protein microarray analysis, we identified 90 cellular proteins as HCV nonstructural 5A (NS5A) interacting partners, and selected telomere length regulation protein (TEN1) for further study. TEN1 forms a heterotrimeric complex with CTC and STN1, which is essential for telomere protection and maintenance. Telomere length decreases in patients with active HCV, chronic liver disease, and hepatocellular carcinoma. However, the molecular mechanism of telomere length shortening in HCV-associated disease is largely unknown. In the present study, protein interactions between NS5A and TEN1 were confirmed by immunoprecipitation assays. Silencing of TEN1 reduced both viral RNA and protein expression levels of HCV, while ectopic expression of the siRNA-resistant TEN1 recovered the viral protein level, suggesting that TEN1 was specifically required for HCV propagation. Importantly, we found that TEN1 is re-localized from the nucleus to the cytoplasm in HCV-infected cells. These data suggest that HCV exploits TEN1 to promote viral propagation and that telomere protection is compromised in HCV-infected cells. Overall, our findings provide mechanistic insight into the telomere shortening in HCV-infected cells.

• Clinical and Experimental Vaccine Research
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• 제12권1호
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• pp.47-59
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• 2023

Purpose: The development and study of hepatitis C virus (HCV) vaccine candidates' individualized responses are of great importance. Here we report on an HCV DNA vaccine candidate based on selected envelope (E1/E2) epitopes. Besides, we assessed its expression and processing in human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and in vivo cellular response in mice. Materials and Methods: HCV E1/E2 DNA construct (EC) was designed. The antigen expression of EC was assayed in PBMCs of five HCV-uninfected donors via a real-time quantitative polymerase chain reaction. Serum samples from 20 HCV antibody-positive patients were used to detect each individual PBMCs expressed antigens via enzyme-linked immunosorbent assay. Two groups, five Swiss albino mice each, were immunized with the EC or a control construct. The absolute count of lymph nodes' CD4⁺ and CD8⁺ T-lymphocytes was assessed. Results: Donors' PBMCs showed different levels of EC expression, ranging between 0.83-2.61-fold in four donors, while donor-3 showed 34.53-fold expression. The antigens expressed in PBMCs were significantly reactive to the 20 HCV antibody repertoire (all p=0.0001). All showed comparable reactivity except for donor-3 showing the lowest reactivity level. The absolute count % of the CD4⁺ T-cell significantly increased in four of the five EC-immunized mice compared to the control group (p=0.03). No significant difference in CD8⁺ T-cells % was observed (p=0.89). Conclusion: The inter-individual variation in antigen expression and processing dominance was evident, showing independence in individuals' antigen expression and reactivity levels to antibodies. The described vaccine candidate might result in a promising natural immune response with a possibility of CD4⁺ T-cell early priming.

• Pediatric Gastroenterology, Hepatology & Nutrition
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• 제4권2호
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• pp.207-212
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• 2001

목적: Mycoplasma pneumoniae 폐렴은 소아과 영역에서 비교적 흔한 질환인데 동반되는 다양한 폐외 소견에 대해서는 많은 보고들이 있었으나 간염에 대해서는 연구된 바가 적으며 특히 국내에서는 이에 대한 연구가 아직 없는 실정이다. 따라서 저자들은 M. pneumoniae에 의한 간염의 전반적인 임상적 특성들을 조사하여 보고하고자 한다. 방법: 1999년 1월 1일부터 2000년 12월 31일까지 서울적십자병원 소아과에 입원한 143명의 마이코플라스마 폐렴 환아들 중 AST와 ALT 수치가 각각 50 IU/L 이상 증가된 환아로서 hepatitis A, B, C 및 cytomegalovirus와 Ebstein-Barr virus가 음성인 19명을 대상으로 계절 분포, 연령 및 성별 분포, 주요 임상증상 및 이학적 소견, 혈액학적 검사, 간기능 검사, 방사선학적 검사, 재원기간, 회복기간 등을 전향적으로 조사하였다. 결과: 1) 마이코플라스마 감염 중 13.3%에서 발생하였으며 가을과 겨울에 호발하였고 평균연령은 4.86세였고 남녀비는 2.2 대 1이었다. 2) 소화기 증상들 중 구토는 21.1%, 설사는 36.8%이었으며 간종대는 21.1%에서 관찰되었고 비장종대는 한 명에서도 관찰되지 않았다. 3) 백혈구가 $10,000/mm^3$이상으로 증가된 경우는 21.1%이었으며 $4,000/mm^3$ 미만으로 감소된 경우는 없었고 호산구증이 15.4%에서 나타났다. 혈색소가 10 g/dl 이하로 감소된 경우는 10.5%이었으며 혈소판이 $450,000/mm^3$ 이상으로 증가된 경우는 5.3%이었고 $150,000/mm^3$ 미만으로 감소된 경우는 없었다. C-반응성 단백은 0.5 mg/dl 이하가 15.4%이었으며 가장 높은 수치는 16.2 mg/dl이었고 평균 $6.34{\pm}4.82$ mg/dl였다. 4) 고빌리루빈혈증을 보인 경우는 없었으며 알부민이 3.5 g/dl 미만으로 감소된 경우는 42.1%이었다. AST의 평균은 $214.05{\pm}183.22$ IU/L였으며 가장 증가된 경우는 630 IU/L였고 ALT의 평균은 $284.16{\pm}286.84$ IU/L였으며 가장 증가된 경우는 1,089 IU/L였다. 5) 흉부 방사선 쵤영상 대엽성 또는 소엽성 형태로 폐침윤을 보인 경우는 73.7%이었고 기관지성 형태의 폐침윤을 보인 경우는 26.3%이었으며 흉막삼출액은 31.6%에서 나타났다. 6) 재원 기간은 평균 7.9일이었으며 간기능 회복 시기는 평균 8.8일 이내였고 모든 환아에서 2주 이내에 간기능이 완전히 정상으로 회복되었다. 결론: Mycoplasma pneumoniae 간염은 대부분 2주 이내에 회복되는 양성 경과를 취하나 그 빈도가 낮지 않으므로 마이코플라스마 폐렴시 간기능 검사 소견에 주의를 기울여야 한다.

• IMMUNE NETWORK
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• 제1권1호
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• pp.77-86
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• 2001

Background: Hepatitis C virus(HCV), a family of Flaviviridae, has a host cell-derived envelope containing a positive-stranded RNA genome, and has been known as the maj or etiological agent for chronic hepatitis, hepatic cirrhosis, and hepatocellular carcinoma. There remains a need to dissect a molecular mechanism of pathogenesis for the development of therapeutic and effective preventive measure for HCV. Identification of cellular receptor is of central importance not only to understand the viral pathogenesis, but also to exploit strategies for prevention of HCV. This study was aimed at identifying peptide mimotopes inhibiting the binding of E2 protein of HCV to MOLT-4 cell. Methods: In this study, phage peptide library displaying a random peptides consisting of 7 or 12 random peptides was employed in order to pan against E2 protein. Free HCV particles were separated from the immune complex forms by immunoprecipitation using anti-human IgG antibody, and used for HCV-capture ELISA. To identify the peptides inhibiting E2-binding to MOLT-4 cells, E2 protein was subj ect to bind to MOLT-4 cells under the competition with phage peptides. Results: Several phage peptides were selected for their specific binding to E2 protein, which showed the conserved sequence of SHFWRAP from 3 different peptide sequences. They were also able to recognize the HCV particles in the sera of HCV patients captured by monoclonal antibody against E2 protein. Two of them, showing peptide sequence of HLGPWMSHWFQR and WAPPLERSSLFY respectively, were revealed to inhibit the binding of E2 protein to MOLT-4 cell efficiently in dose dependent mode. However, few membrane-associated receptor candidates were seen using Fasta3 programe for homology search with these peptides. Conclusion: Phage peptides containing HLGPWMSHWFQR and WAPPLERSSLFY respectively, showed the inhibition of E2-binding to MOLT-4 cells. However, they did not reveal any homologues to cellular receptors from GenBank database. In further study, cellular receptor could be identified through the screening of cDNA library from MOLT-4 or hepatocytes using antibodies against these peptide mimotopes.

• 미생물학회지
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• 제43권3호
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• pp.159-165
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• 2007

C형 간염바이러스(hepatitis C virus; HCV)증식을 효과적이며 특이적으로 제어할 수 있는 유전산물을 개발하기 위하여 HCV 중식조절이자인 NS5B RNA replicase 존재에 의해 allosteric하게 그 활성 이 조절될 수 있는 HCV internal ribosome entry site (IRES) 표적 hammerhead 리보자임을 개발하였다. 우선 HCV IRES 염기서열 중+382 nucleotide(nt) 부위가 리보자임에 의해 가장 잘 인식되었음을 관찰하였다. 이러한 allosteric 리보자임은 NS5B RNA replicase와 특이적으로 결합하는 RNA aptamer 부위, aptamer와 NS5B와의 결합에 의해 리보자임 활성을 유도할 수 있도록 구조적 변이를 전달할 수 있는 communication module부위 및 HCV IRES의 +382 nt를 인지하는 hammerhead 리보자임 등으로 구성되도록 설계하였다. 특히 in vitro selection기법을 활용하여 NS5B 의존적으로 리보자임 활성을 증가시킬 수 있는 communication module 염기서열을 밝혀내었다. 이러한 리보자임은 단백질이 없거나 대조 단백질인 bovine serum albumin이 존재할 때에는 절단반응을 유도하지 못하였으나 HCV NS5B 단백질이 존재할 매에만 효과적으로 NS5B 농도 의존적으로 절단 반응을 유도할 수 있음을 관찰하였다. 이러한 allosteric 리보자임은 HCV중식의 효과적인 증식 억제 선도물질 뿐만 아니라 HCV 치료선도물질의 스크리닝용 도구 및 HCV 조절 인자를 탐색할 수 있는 HCV 진단용 리간드로서도 활용될 수 있을 것이다.

• 미생물학회지
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• 제44권3호
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• pp.186-192
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• 2008

C형 간염바이러스(hepatitis C virus; HCV) 복제를 효과적이며 특이적으로 제어할 수 있는 유전산물을 개발하기 위하여 특정 리간드 존재에 의해 allosteric하게 그 활성이 조절될 수 있는 HCV 유전체 표적 trans-splicing 리보자임(trans-splicing aptazyme)을 발굴하였다. 이러한 trans-splicing aptazyme은 특정 리간드와 특이적으로 결합하는 RNA aptamer 부위, aptamer와 리간드와의 결합에 의해 리보자임 활성을 유도할 수 있도록 구조적 변이를 전달할 수 있는 communication module부위 및 HCV IRES의 +199 nt를 인지하는trans-splicing리보자임 등으로 구성되도록 설계하였다. 특히 trans-splicing 리보자임의 catalytic core의 P6과 P8 부위에 aptamer와 communication module을 삽입하였을 때 가장 allosteric하게 리보자임 활성이 유도되었다. 이러한 리보자임은 리간드가 없거나 대조 리간드가 존재할 때에는 trans-splicing 반응을 유도하지 못하였으나 특정 리간드가 존재할 때에만 효과적이며 특이적으로 trans-splicing 반응을 유도하여 표적 RNA를 변형시킬 수 있음을 관찰하였다. 이러한 aptazyme은 HCV 증식에 대해 특이적이며 효과적인 억제를 위한 선도물질로 이용 가능할 뿐 아니라 HCV 치료선도 물질의 스크리닝용 도구로서도 활용될 수 있을 것이다.

• 한국가금학회지
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• 제38권1호
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• pp.13-19
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• 2011

2010년 2월 전남 지역의 인접한 두 곳의 오리농가에서 급성 폐사가 발생하여 병성감정을 실시한 결과, DHV와 살모넬라균의 혼합 감염으로 판정되었다. A 농장의 경우 폐사 전에 몸을 떨고 머리와 다리 부위를 뒤로 뻗치는 등 전형적인 후궁반장 등의 신경 증상을 보였으며, 부검 소견 상 총 10수 중 3수에서 간의 출혈 반점과 소장 내 출혈이 관찰되었다. 하지만 B 농장은 임상 증상이 없었으며, 또한 부검소견 상 총 10수 중 2수에서 선위 궤양이 관찰된 것을 제외하고 아무런 육안 병변이 관찰되지 않았다. 간에 대한 조직학적 소견으로 두 농장에 공통적으로 간세포의 다발성 괴사 및 정상 배열 소실, 담세관의 증식, 림프구의 침윤, 섬유소성 괴사 및 세균 집락이 관찰되었고 전반적인 출혈 소견이 확인되었다. 분자생물학적 검사 결과, 두 농장 모두 DHV와 살모넬라균의 유전자 양성으로 확인되었다. 본 논문은 오리에서 DHV와 S. typhimurium의 혼합 감염의 병리학적 특성을 보고하는 증례이며, 또한 국내에 A형과 C형 DVH가 동시에 존재하고 있음을 밝혔다.

• Annals of Laboratory Medicine
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• 제38권6호
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• pp.578-584
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• 2018

Background: Accurate, rapid, and cost-effective screening tests for hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV) infection may be useful in laboratories that cannot afford automated chemiluminescent immunoassays (CLIAs). We evaluated the diagnostic performance of a novel rapid automated fluorescent lateral flow immunoassay (LFIA). Methods: A fluorescent LFIA using a small bench-top fluorescence reader, Automated Fluorescent Immunoassay System (AFIAS; Boditech Med Inc., Chuncheon, Korea), was developed for qualitative detection of hepatitis B surface antigen (HBsAg), antibody to HBsAg (anti-HBs), and antibody to HCV (anti-HCV) within 20 minutes. We compared the diagnostic performance of AFIAS with that of automated CLIAs-Elecsys (Roche Diagnostics GmbH, Penzberg, Germany) and ARCHITECT (Abbott Laboratories, Abbott Park, IL, USA)-using 20 seroconversion panels and 3,500 clinical serum samples. Results: Evaluation with the seroconversion panels demonstrated that AFIAS had adequate sensitivity for HBsAg and anti-HCV detection. From the clinical samples, AFIAS sensitivity and specificity were 99.8% and 99.3% for the HBsAg test, 100.0% and 100.0% for the anti-HBs test, and 98.8% and 99.1% for the anti-HCV test, respectively. Its agreement rates with the Elecsys HBsAg, anti-HBs, and anti-HCV detection assays were 99.4%, 100.0%, and 99.0%, respectively. AFIAS detected all samples with HBsAg genotypes A-F and H and anti-HCV genotypes 1, 1a, 1b, 2a, 2b, 4, and 6. Cross-reactivity with other infections was not observed. Conclusions: The AFIAS HBsAg, anti-HBs, and anti-HCV tests demonstrated diagnostic performance equivalent to current automated CLIAs. AFIAS could be used for a large-scale HBV or HCV screening in low-resource laboratories or low-to middle-income areas.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제6권3호
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• pp.331-337
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• 1993

In order to understand the effect of duck hepatitis B virus (DHBV) on the economic performance of ducks, Three groups (DHBV congenitally infected, experimentally infected and DHBV negative) Brown Tsaiya ducks (Anas platyrhyncha) were used for experimental animals. Artificial insemination and pedigree hatching were applied in the propagation of ducklings, and the efficiency of vertical transmission and experimental infection was analyzed through the detection of DHBV DNA in the sera of 8-week-old offspring. The observation of the records of the first year indicated that the persistent infection had no significant effects on the performance of ducks, except the egg number of survival ducks up to 40 week of age. Thus DHBV infection did not appear to give ill effects to the economic performance of ducks in first laying year. A higher infection rate (85.3%) was obtained in congenital transmission than that (75.5%) of experimental infection. Both modes of infection did not reach 100% infectious rate, although some ducks developed transient viraemia in a tracing of DHBV DNA for 24 weeks to 11 challenged ducklings.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권6호
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• pp.699-703
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• 1992

본 연구에서는 간염치료제로 효과가 있는 민간제제(NS-P)의 성분 분석 및 항균 활성과 항산화 활성을 연구하였다. 이 NP-S는 그람 양성균인 Staphylococcus aureus와 그람 음성균인 Salmonella typhimurium 그리고 진균인 Candida albcans에 항균 활성을 보여 주었을 뿐만 아니라, 지질의 과산화를 억제하는 항산화 활성을 나타냈다. 이러한 NP-S는 C/H/N/S의 원소비가 15.5/4.8/11/10으로 황(S)이 상당히 많이 존재하고 있으며, 휘발성 물질인 암모니아를 2.11M 함유하고 있었다. 이 외에도 6.7의 펩타이드, 0.3의 유리 아미노산, 0.1의 무기 인산염을 함유하고 있으며, 미량 원소로서 Cl, Si, Mg, Zn도 함유하고 있다.