상황버섯에 대한 다양한 추출방법별 항산화 활성과 항돌연변이성, 세포독성 등의 생물학적 활성을 S. typhimurium과 인체암세포주들을 이용하여 측정하였다. DPPH free radical scavenging 활성을 통한 항산화 효과를 조사한 결과 열수로 추출한 것보다ethanol로 처리한 것이 높게 나타났으며, ethanol 추출과 열수 후 ethanol 추출 시 각각 17.14, $17.79\;{\mu}g/ml$로 매우 높은 항산화 활성을 나타내었다. S. typhimurium TA97과 TA100을 이용한 Ames test에서는 직접변이원 물질인 MNNG와 4NQO에 대한 돌연변이 억제효과를 조사한 결과는 2가지 변이원 물질에 대한 억제율은 추출물의 농도와 양이 증가함에 따라 비례적으로 증가함을 보여주었고, MNNG에 대해서는 ethanol 추출물이 70.7%로 가장 높은 억제율을 보였고, 열수후 ethanol 추출 시에도 50% 이상의 억제율을 보였다. 4NQO에 대해서는 ethanol 추출물이 62.9%, 열수후 ethanol 추출물이 52.9%로 50% 이상의 억제율을 나타내었다. 간접변이원 물질인 $B({\alpha})P$에 대한 항돌연변이 효과는 TA98과 TA100 두 균주 모두 ethanol 추출물이 가장 높은 억제율을 보였다. 즉 TA98 균주는 ethanol 추출물 61.5%, 열수후 ethanol 추출물이 50% 이상의 항돌연변이 효과를 나타내었으며, TA100 균주에서는 ethanol 추출물과 열수 후 ethanol 추출물이 50% 이상의 억제율을 보였다. 상황버섯 추출물에 의한 암세포 성장 억제효과를 사람의 결장암 세포인 HT-29와 간암세포인 HepG2에 미치는 영향으로 검토한 결과 각 추출물들이 추출농도에 따라 증가함을 보여주었고, ethanol 분획물이 열수 분획물보다 상대적으로 높은 억제율을 보였다. 반면 시료 0.5 mg/ml 투여 시 HT-29 세포에 대해서 ethanol 추출물 59%, 열수 추출물 54%, 열수후 ethanol 추출물 57%로 50% 이상의 억제율을 나타내었고, 특히 ethanol 추출물과 열수 후 ethanol 추출물에서는 0.25 mg/ml 농도에서 50% 이상의 암세포 증식 억제효과를 나타내었다. 그리고 간암세포 HepG2의 경우 ethanol 추출물이 30%로 결장암세포인 HT-29에 비해 비교적 낮은 활성을 나타내었다. Ethanol 추출물과 열수추출물은 다양한 pH 조건에서 아질산염 소거증을 보여주었으며, 대체로 ethanol 추출물이 열수추출물 보다 높은 효과를 보여주었다.
고려인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)을 70% EtOH 수용액으로 저온 추출한 뒤, 감압 농축한 추출물을SiO2, ODS column chromatograph 및 중압분취(MPLC) 장비를 반복 실시하여 4종의 인삼 사포닌 화합물을 분리 및 정제하였다. NMR 및 고분해능 질량분석 장비를 이용하여 malonyl ginsenoside Rd (1), Rc (2), Rb2 (3), 및 Rb1 (4)로 구조 동정하였다. 분리한 4종의 화합물에 대하여 UPLC-MS/MS 질량분석기를 이용하여 수삼의 5년 및 6년근 뿌리의 동체를 정량분석 하였으며, malonyl ginsenoside의 총 함량의 합은 각각 6.62 및 2.34 mg/g으로 5년근이 약 2.8배 높은 것을 확인하였다. 인삼으로부터 분리된 화합물 중 malonyl ginsenoside Rd의 경우, 알코올에 의해 저해된 HepG2세포에 대해서 간세포를 보호하는 효과가 있음을 확인하였다.
The MeOH extract of the fruits of Melia toosendan was selected for futher study by its cytotoxicity and effect on the human breast cancer cell line, MCF-7. The active principle obtained by activity guided fractionation followed by purification gave rise to a needle crystal. The structure was deduced by employing NMR and was determined to be identical with 28-deacetyl sendanin by comparison with published data. This compound induced morphological change of MCF-7 to be rounded with tubule at concentrations between $50\;{\mu}g/ml$ and $0.025\;{\mu}g/ml$. This compound, however, showed strong cytotoxic effect on Hepalclc7 and HepG2, and their $GI_{50}$ on the hepatoma cell lines were $0.238\;{\mu}g/ml$ and $0.805\;{\mu}g/ml$, respectively. Its effect on lymphocyte of mouse was stronger than hepatoma cell lines, and their $ED_{50}$ of polyclonal antibody response was $0.011\;{\mu}g/ml$, and $ED_{50}$ of cell viability was $0.039\;{\mu}g/ml$.
Seven essential oils were tested for in vitro cytotoxicity against the cancerous cell lines A-549, HEp-2 and DLA and normal BRL-3A, NRK-49F and Vero cell lines using standard MTT, SRB and dye exclusion techniques. The A-549 cell line was found to be the most susceptible to all the essential oils. The essential oils of A. nilagirica, A. calamus and O. sanctum were found to be the more active against these cells with mean $CTC_{50}$ values of 17.75, 19.00 and $24.37\;{\mu}g/ml$, respectively. The essential oil of Acorus calamus was found to be the most potent with low $CTC_{50}$ values against the cancerous and comparatively higher $CTC_{50}$ values against the normal cell lines. Artemisia pellens and Pelargonium graveolens oils also showed potent activity. These oils merit further investigation to identify the active principles and nature of the anti tumor activity in animal models.
To examine if the molecular chaperone DnaK operon proteins of Streptococcus suis type 2 (SS2) are involved in adhesion to host cells, the abundance values of these proteins from the surface of two SS2 strains of different adhesion capability were compared. Their roles in growth and adhesion to human laryngeal epithelial cell line HEp-2 cells were investigated on SS2 strain HA9801 and its mutants with DnaK operon genes partially knocked-out (PKO mutant) under heat stress. The major difference was that DnaJ was more abundant in strain HA9801 than in strain JX0811. Pretreatment of the bacteria with hyperimmune sera to DnaJ, but not with those to other proteins, could significantly reduce SS2 adhesion to HEp-2 cells. PKO of dnaJ g ene resulted in decreased SS2 growth at 37℃ and 42℃, and reduced its adhesion to HEp-2 cells. The wild-type strain stressed at 42℃ had increased expression of DnaJ on its surface and elevated adhesion to HEp-2 cells, which was also inhibitable by DnaJ specific antiserum. These results indicate that the DnaJ of S. suis type 2 is important not only for thermotolerance but also for adhesion to host cells. Because DnaJ expression is increased upon temperature upshift with increased exposure on the bacterial surface, the febrile conditions of the cases with systemic infections might help facilitate bacterial adhesion to host cells. DnaJ could be one of the potential candidates as a subunit vaccine because of its good immunogenicity.
Nicotine is one of the major hazardous components in cigarettc smoke. Nicotine deals a harmful effect to smokers and passive smokers due to its rapid conversion to various carcinogenic metabolites. Nitrosamine-4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK) is believed to cause lung cancers among the nicotine-derived carcinogens. Recent studies report that NNK synthesis can be inhibited by the metabolism pathway to produce a stable metabolite cotinine from nicotine. Tea polyphenols have been known to contain factors to prevent cancers and to retard progression of cancers. This study aims to correlate tea polyphenol's potential for cancer prevention with an accelerated formation of cotinine. The conversion from nicotine to cotinine in the presence of tea extracts or three polyphenols (Catechin, epicatechin gallate, epigallocatechin gallate) was measured in established cell lines and in Xenopus oocytes. Among three lines of cell used, PLC/PRF5 and HEK293 cells showed a fast turnover from nicotine to cotinine while HepG2 cell line showed a marginal difference between groups treated and non-treated with tea polyphenols. When Xenopus oocytes were microinjected with nicotine, tea polyphenols appear to accelerate the conversion of nicotine to cotinine. Among the polyphenols tested in this study, (+)-catechin showed the best efficiency overall in accelerating conversion from nicotine to cotinine both in the cell lines and in the oocytes. In summary, the present study indicated that tea polyphenols have a positive effect on conversion of nicotine to cotinine.
북해도산 오징어 간의 유효이용을 목적으로 자가소화물과 Protamex 가수분해물을 제조하고 이들의 식품학적 특성과 몇 가지 기능성을 조사하였다. 자가소화를 위한 최적 조건은 간의 함량 93.5%, pH 6.4, 항온온도 $47^{\circ}C$였으며, Protamex 가수분해의 최적 조건은 오징어 간에 대한 Protamex의 첨가비율 0.33%, pH 6.0, 가수분해온도 $55^{\circ}C$이었다. Promatex 가수분해물의 총 아미노산 조성에서 proline, cysteine 및 methionine이 검출되지 않았으나, 유리아미노산 조성에서는 검출되었다. 오징어 간, 자가소화물 및 Promatex 가수분해물의 카드늄 함량은 건조 중량으로 각각 $8.32{\pm}0.03$ mg/100 g, $3.56{\pm}0.02$ mg/100 g, $13.26{\pm}0.04$ mg/100 g으로서 식품안전 규정 이하의 농도로 감소시키기 위한 별도의 공정이 필요하다. 자가소화물의 주요 저분자 물질의 분자량은 1.0~1.5 kDa인 반면, Protamex 가수분해물은 210~470 Da이었다. 자가소화물과 Protamex 가수분해물 간에 표면 소수성, 유화활성 지표, 유화안정성, 지방 및 수분 흡착능은 큰 차이를 보이지 않았으며, 높은 ACE 효소 저해효과가 관측되었다. 한편 HepG2 세포주에 대한 독성은 200 ${\mu}g/mL$까지 관측되지 않았다.
$Elfvingia$$applanata$, a medicinal mushroom belonging to Basidiomycota, has been used in the effort to cure cancers of the esophagus and stomach, and is also known to have inhibitory effects on hepatitis B virus infection. The hot water soluble fraction (as Fr. HW) was extracted from fruiting bodies of the mushroom. $In$$vitro$ cytotoxicity tests showed that hot water extract was not cytotoxic against cancer cell lines such as Sarcoma 180, HT-29, HepG2, and TR at concentrations of 10-2,000 ${\mu}g/mL$. Intraperitoneal injection with Fr. HW resulted in a life prolongation effect of 45.2% in mice previously inoculated with Sarcoma 180. Treatment of Fr. HW resulted in a 2.53-fold increase in the numbers of murine spleen cells at a concentration of 50 ${\mu}g/mL$, compared with control. Incubation of murine spleen cells with Fr. HW at a concentration of 500 ${\mu}g/mL$ resulted in improved immune-potwntiating activity of B lymphocytes through an 8.3-folds increase in alkaline phosphatase activity, compared with control. Fr. HW generated 12.5 ${\mu}M$ of nitric oxide (NO) when cultured with RAW 264.7, a mouse macrophage cell line, at the concentration of 50 ${\mu}g/mL$, while lipopolysaccharide, a positive control, produced 15.2 ${\mu}M$ of NO. Therefore, the results suggested that antitumor activities of Fr. HW from $E.$$applanata$ might, in part, be due to host mediated immunostimulating activity.
Objectives : Myocardial infarction is caused by heart cell death in a region where coronary arteries supplying blood to the region are occluded. In the present study, we determined whether ethanol extract of Cortex fraxini (HY5053) could attenuate heart injury by inhibiting apoptosis. Methods : Improvement of survival of HepG2 cells, a human hepatocellular carcinoma cell line, and reduction of apoptosis under hypoxic conditions (3% $O_2$) were assessed by trypan blue staining and DNA fragmentation assay, respectively. To assess the impact of HY5053 on the heart injury, Sprague-Dawley rats underwent 1 day of the left anterior descending coronary artery occlusion. HY5053 was given by intraperitoneal injection (200 mg/kg) 1 hr prior to the occlusion. Subsequently, the heart were harvested, excised into 4 slices, and the slices were stained with 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride. Finally, the extent of heart injury represented as ischemic index (%) was assessed. Results : Addition of HY5053 (400 ${\mu}g$/mL) into the culture medium for 1 day under ischemic conditions improved the cell survival by 50%, compared with control (0 ${\mu}g$/mL), consequently delayed apoptosis in 6 hr difference. Also, HY5053 (200 mg/kg) reduced the ischemic index by 44%, compared with control (0 mg/kg). Conclusions : These findings suggested that HY5053 attenuated myocardial infarction by inhibiting apoptosis. Thus, Cortex fraxini could be developed as a novel cardioprotectant to complement a currently available treatment, coronary angioplasty.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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