The toxicitiy of organic sludge such as municipal sewage sludge (MSS), industrial sewage sludge (ISS), alcohol fermentation processing sludge (AFPS) and leather processing sludge (LPS) were evaluated with three environmental biomarkers as acetylcholinesterase, cytochrome P450, and heat shock protein 70 extracted from earthworm (Eisenia fetida). Their toxicities were compared with those of pig manure compost (PMC). MSS, ISS, LPS, and AFPS did not significantly affect the acetylcolinesterase activity, whereas only the elutriate of PMC slightly was increased the activity. MSS, AFPS, and PMC tended to slightly inhibit the cytochrome $P_{450}$ activity, but ISS and LPS showed significantly the inhibitory effect on cytochrome $P_{450}$. The hsp70 expression began to increase after treatments and showed high induction at 6 hour, followed by zero level at around 12 hour. The quantity of the hsp70 expressed by elutriate treatments of PMC, AFPS, MSS, ISS, and LPS was 1.9, 3.0, 3.3, 4.4, and 4.7 fold higher than that of distilled water. These results indicate that in toxicity tests of five organic waste materials, four kinds of sludge materials appeared more toxic than PMC. Results of AChE, P450, and hsp70 of earthworm might be useful for expecting or assessing an effect by exposure of organic wastes to earthworms in soil.
Heat shock protein (HSP) expression is unregulated in tumor cells and, HSP expression is likely marker of the malignant potential of oral epithelial lesion. Furthermore, the 70kDa HSP is implicated in the degree of tumor differentiation, the rate of tumor proliferation and the magnitude of the anti-tumor immune response. Accordingly, the distribution and intensity of HSP 70 and HSP 47 expression was assessed in the DMBA induced oral carcinogenesis in hamster. Golden Syrian hamsters which were 3 months-age and 90-120g were collected. 9,10-dimethyl-1,2-benzanthracene (DMBA) in a 0.5% solution in mineral oil was painted on the buccal pouch mucosa 3 times per week in the study group. In each control and experimental groups of 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 weeks, specimen were sectioned for immunohistochemical study with anti-HSP47 and anti-HSP70 antibody. The following results were obtained. 1. HSP47 positive cells were rare or negative of normal oral mucosa, increased mildly in basal and suprabasal basal layer, and spinous cell layer after experimental 6 weeks (dysplastic or CIS stage). In CIS stage, HSP47 expression is prominent in dysplastic free or normal adjacent epithelium. 2. HSP 47 positive cells in connective tissue were mainly inflammatory cells, which is gradually increased from control to precancerous and cancer stage. But HSP47 positive cells after 14 weeks were decreased, especially normal and cancer adjacent epithelium. 3. The positive staining cells of HSP70 in control, dysplastic, and CIS stage were not seen. But they were mild findings in basal layer and moderate findings in spinous layer after experimental 14 weeks (cancer stage). 4. HSP70 positive cells were increased in precancerous and cancer stage than control group in connective tissue. After experimental 16 weeks, we could not find the HSP expression in cancer cells according to cancer differentiation or cancer stage. It is concluded that HSP70 or HSP47 expression is not a definitive marker of oral malignancy or malignant potential. However, with further development, HSP immunoreactivity may be valuable as an adjunct to conventional histology for assessing the malignant potential of oral mucosal lesions.
Kim, Won-Seok;Im, Byeong-Hyeon;Hong, Cheol;Choi, Seung-Won;Park, Kiyun;Kwak, Ihn-Sil
Korean Journal of Ecology and Environment
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v.50
no.3
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pp.305-313
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2017
We investigate that the impact of freshwater organism exposed to the salinity environment by the frequent rainfall following climate change. To evaluate the stress response following salinity exposure, we assessed the survival rate, molting success rate, the developmental period and mouthpart deformities in Chironomus riparius. In addition, we measured the molecular responses of biomarker gene, gene expression of heat shock protein 70 (HSP70) in C. riparius exposed to salinity after 96 hour. The C. riparius survival rates were showed on time dependent manner and not observed survival organisms above 15 psu at day 4. The pupation and emergence of C. riparius were not seen above 15 psu, and the molting success rate was less than 20% at 10 psu. The developmental retardation of C. riparius was well observed in the pupation and emergence period and was delayed by 4 days at 10 psu compared to the control and 5 psu. The mouthpart deformities after salinity exposure at 96 or 72 hour were observed at 10 psu and 15 psu. The expression of C. riparius HSP70 level was significantly increased exposure to 5 psu and 10 psu. Thus, salinity has been caused to be various ecotoxicological and molecular stress responses on freshwater organisms similar to harmful substances such as EDCs and so on.
Lee, Yong Keun;Shin, Hyo-Keun;Kwon, Woon Yong;Suh, Gil Joon;Youn, Yeo Kyu
Journal of Trauma and Injury
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v.21
no.1
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pp.59-65
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2008
Purpose: The aim of this study was to evaluate the effect of overexpression of heat shock protein 70 (HSP70) on the expression of inducible nitric oxide synthase and on the concentration of nitric oxide and to determine the mechanism for the relationship between HSP70 and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in sepsis. Methods: Experiments were performed on male Sprague-Dawley rats, and sepsis was induced by using cecal ligation and puncture (CLP). Glutamine (GLN) or saline was administered 1 h after initiation of sepsis. We acquired serum and lung tissues from the rats 12 h or 24 h after initiation of sepsis. We analyzed the concentration of nitric oxide, the expression of HSP70 in the lung, and the gene expression of iNOS in the lung. Results: In CLP+GLN, glutamine given after initiation of sepsis enhanced the expression of HSP70 in the lung at 12 h (CLP+GLN vs. CLP:: $47.19{\pm}10.04$ vs. $33.22{\pm}8.28$, p = 0.025) and 24 h (CLP+GLN vs. CLP: $47.06{\pm}10.60$ vs. $31.90{\pm}4.83$, p = 0.004). In CLP+GLN, glutamine attenuated the expression of iNOS mRNA in the lung at 12 h (CLP+GLN vs. CLP: $4167.17{\pm}951.59$ vs. $5513.73{\pm}1051.60$, p = 0.025) and 24 h (CLP+GLN vs. CLP: $9,437.65{\pm}2,521.07$ vs. $18,740.27{\pm}8,241.20$, p = 0.016) and reduced the concentration of nitric oxide in serum at 12 h (CLP+GLN vs. CLP: $0.86{\pm}0.48$ vs. $3.82{\pm}2.53{\mu}mol/L$, p = 0.016) and 24 h (CLP+GLN vs. CLP: $0.39{\pm}0.25$ vs. $1.85{\pm}1.70{\mu}mol/L$, p = 0.025). Conclusion: The overexpression of HSP70 induced by the administration of glutamine in sepsis attenuated the gene expression of iNOS and reduced the concentration of nitric oxide.
Variations in water temperature are known to affect almost every part of fish physiology. The rise in water temperature due to climate change can physically damage fish. This study was conducted to evaluate the health status of the Atlantic salmon (Salmo salar) at high water temperature (20℃) than the optimum water temperature (15℃). Liver tissue exerts important metabolic functions in thermal adaptation. Therefore, liver tissue was used in this study. The evaluation method is to develop the biomarker gene using NGS RNAseq analysis and to examine the expression pattern using RT-qPCR analysis. The NGS RNAseq analysis revealed 1,366 differentially expressed genes, among which 880 genes were increase expressed and 486 genes were decrease expressed. The biomarker genes are such as heat shock protein 90 alpha (Hsp90α), heat shock protein 90 beta (Hsp90β) and cytochrome P450 1A (CYP1A). The selected genes are sensitive to changes in water temperature through NGS RNAseq analysis. Expression patterns of these genes through RT-qPCR were similar to those of NGS RNAseq analysis. The results of this study can be applied to other fish species and it is considered to be useful industrially.
Choi, Hee Chan;Choi, Yoon Seok;Kang, Han Seung;Lee, Yoon
Journal of Marine Life Science
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v.3
no.2
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pp.59-66
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2018
The assessment of level of health of the tidal flats can be evaluate by health of organisms inhabit the tidal flats. It is possible to evaluate the precise health level of organisms inhabit the tidal flats using analysis of expression of biomarker genes. The purpose of this research is to evaluate the health of the tidal flats on the west coast using biomarker genes such as heat shock protein 70 (Hsp70), heat shock protein 90 (Hsp90), glutathione S-transferases (GST) and thioredoxin (TRX). These genes are stress, immune, and antioxidant related genes that can be used to look at the health of an organism through gene expression. In this study, we collected manila clam (Ruditapes philippinarum) in 8 analysis areas on the west coast. Expression of the genes was analyzed by RT-qPCR method. Results showed that, the expression of Hsp70, Hsp90, GST and TRX genes were differentially expressed in the 8 analysis areas. In particular, the expression of Hsp90 and GST or the expression of Hsp70 and TRX were similar. This means that there is a substance that reacts specifically to each gene. Therefore, I think suggest that the based on the results of physicochemical analysis, it can be selected genes suitable for analysis. These results suggest that Hsp70, Hsp90, GST and TRX were played roles in biomarker for assessment of the health of tidal flats.
A plasmid vector, pXGPRMATG-lac-Tgx, was developed for overproduction of $\beta$-galactosidase in Escherichia coli using the genetic components of groEx, a heat-shock gene cloned from symbiotic X-bacteria in Amoeba proteus. The vector is composed of intragenic promoters P3 and P4 of groEx, the structural gene of lac operon, transcription tenninator signals of lac and groEx, and ColEl and amp'of pBluescript SKII. The optimized host, E. coli DH5$\alpha$, transfonned with the vector constitutively produced 117,310-171,961 Miller units of $\beta$-galactosidase per mg protein in crude extract. The amount of enzyme in crude extract was 53% of total water-soluble proteins. About 43% of the enzyme could be purified to a specific activity of 322,249 Miller units/mg protein after two-fold purification, using two cycles of precipitation with ammonium sulfate and one step of gel filtration. Thus, the expression system developed in this study presents a low-cost and simple method for purifying overproduced $\beta$-galactosidase in E. coli.
After invasion of red blood cells, malaria matures within the cell by degrading hemoglobin avidly. For enormous protein breakdown in trophozoite stage, many efficient and ordered proteolysis networks have been postulated and exploited. In this study, a potential interaction of a 60-kDa Plasmodium falciparum (Pf)-heat shock protein (Hsp60) and Pf-calpain, a cysteine protease, was explored. Pf-infected RBC was isolated and the endogenous Pf-Hsp60 and Pf-calpain were determined by western blot analysis and similar antigenicity of GroEL and Pf-Hsp60 was determined with anti-Pf-Hsp60. Potential interaction of Pf-calpain and Pf-Hsp60 was determined by immunoprecipitation and immunofluorescence assay. Mizoribine, a well-known inhibitor of Hsp60, attenuated both Pf-calpain enzyme activity as well as P. falciparum growth. The presented data suggest that the Pf-Hsp60 may function on Pf-calpain in a part of networks during malaria growth.
Discovery of molecular chaperone has stimulate cell biologists and thus made it possible to re-examine the processes whereby proteins achieve and maintain their functional conformations within living cells. the term ‘Molecular chaperone’ was first coined to describe one particular protein involved in the assembly of nucleosomes, but the term has now been extended to describe the function of a wide variety of proteins that assist protein transport across membranes, folding of nascent polypeptide, the assembly and disassembly of oligomeric structures, and the recovery or removal of proteins damaged by various environmental stresses including heat shock. Progress of molecular chaperone research is still limited by the lack of 3-dimensional structural information and detailed interacts with taget proteins in the cell. However, several laboratories around the world are attempting to extend our knowledge on the functions of molecular chaperone, and such efforts seem justified to finally provide the answers to the most burning questions shortly.
Kim, Woo-Jin;Myong, Jeong-In;Lee, Jeong-Ho;Park, Jung-Youn;Park, Jung-Youn;Kim, Doo-Won;Kang, Kyung-KIl;Kim, Han-Do
Journal of Aquaculture
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v.13
no.2
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pp.181-186
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2000
Relationship between hsp 70 expression and development of thermotolerance in the olive flounder was investigated by exposing the fish to 23 or 26$^{\circ}C$ for 1 h. After selected intervals, they were re-exposed to 31$^{\circ}C$ for a duration of 15 min. Theremotolerance rapidly developed with increasing interval and peaked at 3 h interval. Subsequently, it gradually decayed and disappeared by 24 h interval. The flounder displayed remarkably high levels of hsp 70 mRNA and protein, as compared to control flounder. Hence, the olive flounder acquires thermotolerance, which is positively correlated with the synthesis of hsp 70.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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