This study aims to prepare the fabric with detoxification properties against chemical warfare agent by the simple treatment. For this purpose, polypropylene non-woven fabric(PP) was treated with polyethyleneimine(PEI) and guanidinylated PEI and detoxification properties of the guanidinylated PEI treated PP were evaluated using diisopropylfluorophosphate(DFP), as a chemical warfare agent simulant, and compared with the untreated and PEI treated PP. The half-lives of DFP on guanidinylated PEI treated PP and untreated PP were 334 min and 714 min, respectively. The half-life of DFP with guanidinylated PEI treated PP was 53.22% shorter than with untreated PP. This result shows that guanidine group in guanidinylated PEI treated PP was acted as a base catalyst for hydrolysis of DFP and decreased half-life of DFP. Therefore, it is expected that guanidinylated PEI treatment can be an simple pathway to prepare the detoxification fabric material for protective clothing against chemical warfare agents.
The anti platelet effects of a novel guanidine derivative, KR-32570 ([5-(2-methoxy-5-chlorophenyl) furan-2-ylcarbonyl]guanidine), were investigated with an emphasis on the mechanisms underlying its inhibition of collagen-induced platelet aggregation. KR-32570 significantly inhibited the aggregation of washed rabbit platelets induced by collagen $(10{\mu}g/mL)$, thrombin (0.05 U/mL), arachidonic acid $(100{\mu}M)$, a thromboxane (TX) $A_2$ mimetic agent U46619 (9,11-dideoxy-9,11-methanoepoxy-prostaglandin $F_2,\;1{\mu}M$) and a $Ca^{2+}$ ATPase inhibitor thapsigargin $(0.5{\mu}M)$ ($IC_{50}$ values: $13.8{\pm}1.8,\;26.3{\pm}1.2,\;8.5{\pm}0.9,\;4.3{\pm}1.7\;and\;49.8{\pm}1.4{\mu}M$, respectively). KR-32570 inhibited the collagen-induced liberation of $[^3H]$arachidonic acid from the platelets in a concentration dependent manner with complete inhibition being observed at $50{\mu}M$. The $TXA_2$ synthase assay showed that KR-32570 also inhibited the conversion of the substrate $PGH_2$ to $TXB_2$ at all concentrations. Furthermore, KR-32570 significantly inhibited the $[Ca^{2+}]_i$ mobilization induced by collagen at $50{\mu}M$, which is the concentration that completely inhibits platelet aggregation. KR-32570 also decreased the level of collagen $(10{\mu}g/mL)$induced secretion of serotonin from the dense-granule contents of platelets, and inhibited the NHE-1-mediated rabbit platelet swelling induced by intracellular acidification. These results suggest that the antiplatelet activity of KR-32570 against collagen-induced platelet aggregation is mediated mainly by inhibiting the release of arachidonic acid, $TXA_2$ synthase, the mobilization of cytosolic $Ca^{2+}$ and NHE-1.
4-Arylazo-1H-pyrazol-3, 5-idimines 1a-c reacted with bromomalononitrile (2) to yield the corresponding imidazo[1, 2-b]pyrazoles 3a-c. The latter reacted with some active methylene compounds and with .alpha.-cinnamonitriles to afford the corresponding pyrazoloimidazopyridines 6, 8, 9 and 15, respectively. Compounds 3 reacted with each of formic acid, formamide, trichlo-roacetonitrile and with guanidine to yield the corresponding pyrazoloimidazopyrimidines 16-19 respectively.
hGH 와 GST 절편으로 구성된 융합 단백질의 고정화 UK 칼럼에 의한 절단 반응 후 용출액의 pH를 3.5 로 낮춤으로써 이물질들을 침전시키고 이를 expanded bed chromatography 칼럼에 통과시킨 결과, 이물질들의 제거와 hGH 단량체의 흡착분리가 동시에 이루어겼다 . 흡착된 단량체는 NaCl 에 의해 용출되었으며 이 단계의 수율은 거의 100% 이었다 , 따라서 칼럼에 의한 절단 반응과 산 침전에 의한 이물질 침잔 반응 EBA 에 의한 이물질 제거 및 단량체 회수 반응을 연속적으로 진행할 수 있는 기초를 제시하였다 . 또한 고정화된 UK 는 guanidine HCl(6M)을 이용하여 unfolding 시키고 이를 세척하여 refolding 시킨 결과 20 회의 반복적인 처리 후에도 초기 활성의 약 80% 수준을 유지하였다. 이는 UK 가 공유결합된 상태에서 solid-phase refolding 이 가능하다는 증거이며, 고정화 효소 칼럼의 수영을 크게 향상시켜 경제성을 확보하는 방안으로 이용될 것으로 기대된다.
Sepharose CL-6B 의 기능기를 aldehyderl로 활성화시킨 후 urokinase와 공유결합 시켜 고정화하는 방법을 6mL 규모에서 250 mL 규모로 스케일업한 결과 고정화 수율 및 고정화 된 UK에 의한 절단반응 수율 등에서 스케일업 전후의 결과에 차이가 없었다. 따라서 위의 고정화 방법의 scale-up 효능은 매우 우수한 것으로 나타났다. hGH와 GST 절편으로 구성된 융합 단백질의 고정화 UK 컬럼에 의한 절단 반응 후 용출액의 pH를 3.5로 낮춤으로써 이물질들을 침전시키고 이를 expanded bed chromatography zf칼럼에 통과시킨 결과, 이 물질들의 제거와 hGH 단량체의 흡착분리가 동시에 이루어졌다. 흡착된 단량체는 NaCL에의해 용출되었으며 이 단계의 수율은 거의 100%이었다. 따라서 칼럼에 의한 절단 반응과 t산 침전에 의한 이물질 침전 바능, EBA에 의한 이물질 제거 및 단량체 회수 반응을 연속적으로 진행할 수 있는 기초를 제시하였다. 또한 고정화된 UK는 guanidine HCl(6 M)을 이용하여 unfolding 시키고 이를 세적하여 refolding 시킨 결과 20회의 반복적인 처리 후에도 초기 활성의 약 80% 수준을 유지하였다. 이는 UK 가 공유결합된 상태에서 solid-phase refolding이 가능하다는 증거이며, 고정화 효소 칼럼의 수명을 크게 향상시켜 경제성을 확보하는 방안으로 이용될 것으로 기대된다.
우유에 포함된 Salmonella enteritidis를 효과적으로 분리하는 방법을 찾고 이를 이용하여 우유속의 S. enteritidis의 량을 추정하는 방법을 개발하였다. 일정량의 S. enteritidis를 접종한 우유로부터 guanidine thiocyanate/phenol/chloroform을 이용하여 DNA를 추출한 후 중합효소반응으로 S. enteritidis 섬모항원 유전자를 선택적으로 검출함으로써 우유 1ml당 200 colony forming unit까지 검출이 가능하였고 전체 과정의 수행에 단지 5시간 정도 걸렸다. S. enteritidis 섬모항원 유전자를 cloning한 pGem-4-Sef B(-) DNA와 인위적으로 접종된 우유로부터 추출한 Salmonella DNA를 함께 중합효소반응으로 증폭한 후 제한효소로 잘라 전기영동을 행하여 band의 강도를 비교함으로써 Salmonella DNA copy수를 추정하는 것이 가능하였다.
돼지고기에 오염된 살모넬라의 수를 직접 측정하는 방법으로 경쟁적 PCR(competitive PCR)을 사용하였다. 세가지 DNA추출방법을 비교한 후 guanidine thiocyanate-phenol-chloroform 방법을 일부 수정하여 인위적으로 살모넬라를 오염시킨 돼지고기로부터 DNA를 직접 추출하는 방법으로 선택하였다. Rahn 등(Mol. Cell. Probes 1992년)이 이미 보고한 284-bp iuvA gene의 특이성을 평가하기 위해 살모넬라 57균주와 살모넬라가 아닌 균주 24개를 사용하였다. 시험해 본 모든 살모넬라 균주는 invA 양성으로 살모넬라가 아닌 모든 균주는 invA 음성으로 판명되었으며 살모넬라가 아닌 균주 중 양성으로 잘 못 판명된 경우는 없었다. 돼지고기 0.1 g을 사용할 경우 검출한계는 1,460 cfu였다. 경쟁적 PCR을 위해 invA gene중 82-bp를 결실시킨 DNA조각을 pGEM-4Z백터에 클로닝을 하였다. 인위적으로 오염된 돼지고기로부터 추출한 살모넬라 염색체 DNA와 이와 같은 primer결합자리를 가진 경쟁 DNA를 동시에 경쟁적 PCR로 증폭하였다. 경쟁적 PCR을 사용하여 결정한 균수와 MPN방법으로 결정한 균수는 거의 유사하였으며 전체 과정을 수행하는 데 약 5시간이 소요되었다.
폴리우레탄 전선도료 제조시의 TDI와 MDI의 blocking 반응에 미치는 촉매와 blocking reagents(BR)의 영향에 대하여 조사하였다. 1,4-diazabicyclo[2.2.2]octane(DABCO)와 tetramethyl guanidine(TMG)와 같은 촉매들은 NCO의 blocking 반응을 완결시키는데 필요한 것으로 나타났다. TMG는 DABCO에 비해 매우 빠른 반응속도를 보였다. TMG의 농도는 1%까지 반응도에 대하여 정량적으로 비례하였다. DABCO의 경우는 0.25%의 농도에서 가장 높은 반응도를 나타내었다. BR의 입체영향을 알아보기 위해 phenol, p-cresol, m-cresol, o-cresol, 2,4-xylenol과 같은 BR 등을 사용하였다. 예측한대로 입체장애가 적은 BR이 높은 반응도를 보였다. 또한 이 반응 시스템에서는 온도와 BR의 농도가 증가할수록 반응도가 증가하였다.
Dicyma sp. YCH-37이 생산하는 효모세포벽 용해효소의 성질을 검토한 결과, 각종 환원제와 금속이온에 대체로 안정하였고, guanidine-HCl을 제외한 여러 화학수식제에 대해서도 안정하였다. 배양시간, 전처리 및 배양조건에 따른 영향을 검토한 결과, 정지기 및 사멸기에 있는 효모보다는 대수증식기의 효모, 그리고 생효모에 비해 열처리된 효모가 더 잘 용균되었다. Butanol, acetone 등의 유기용매로 처리된 효모가 그렇지 않은 효모보다 용균도가 좋았으며, 0.5 M ammonium sulfate가 함유된 Yeast extract-Malt extract 배지에서 생육한 효모, 그리고 진탕배양한 효모보다 정치배양한 효모가 용균효소에 의해 더 잘 용균되었다. SDS, Triton X-100, ${\beta}-mercaptoethanol$, potassium chloride, sodium sulfite 등의 화학수식제를 효소반응액에 첨가하였을 때 기질 효모는 더 잘 용균되었다.
본 연구는 옛부터 식용 및 약용으로 이용되고 있는 노루궁뎅이 버섯의 항돌연변이 및 암 예방 효과를 검색하기 위하여, 노루궁뎅이 버섯의 항돌연변이원성 및 quinone reductase (QR) 유도활성 효과를 살펴보았다. 노루궁뎅이 버섯의 돌연 변이 억제 효과를 Ames test로 검색한 결과, 노루궁뎅이 버섯의 메탄을 추출물과 분획물 그 자체의 돌연변이 원성은 없었으며, 노루궁뎅이 버섯의 메탄을 추출물은 직접변이원인 N- methyl- N'-nitro-guanidine(MNNG)와 간접변 이원인 B(a)P의 돌연변이 유발성을 크게 저해하였다. 또한 메탄올 추출물에서 분리한 분획물들도 유의성 있는 돌연변이 억제효과를 나타내었으며 특히 헥산, 클로르포름 및 에틸아세테이트 분획물의 경우는 부탄올과 물 분획 물보다 MNNG 와 13(a)P에 대해서 더 큰 항돌연변이 효과를 나타내었다. 그리고 노루궁뎅이 버섯에서 암 예방 효소계인 QR의 유도활성을 hepalclc7 세포주를 사용하여 검토한 결과에서는 노루 궁뎅이 버섯의 메탄을 추출묵과 헥산, 클로르포름 그리고 에틸아세테이트 분획물이 QR 효소활성을 유의적으로 증가시키는 것으로 나타났으며 나머시 분획물은 거의 효소활성에 영향을 미치지 않았다. 이상의 실험 결과로 노루궁뎅이 버섯은 발암물질로부터 생계를 보호하는 불질을 함유하고 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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