국내(國內) 주요(主要) 사과산지(産地) 4개처(個處)에서 저장중(貯藏中) 부패과(腐敗果) 및 수확전(收穫前) 과수원(果樹園) 이병과(罹病果)에서 Alternaria mali를 분리(分離)하여 각종(各種) 살균제(殺菌劑)를 가용(加用)한 PSA배지상(培地上)에 배양(培養)하여 균(菌)의 내성(耐性)을 조사(調査)한 결과(結果)는 다음과 같다. 지역별(地域別) 및 계절별(季節別) 균주간(菌株間)에는 약제내성(藥劑耐性) 차이(差異)가 적었으며, 살균제(殺菌劑)의 종류(種類) 및 농도(濃度)에 따른 차이(差異)는 컸다. Chlorothalonil 및 captafol의 균생육(菌生育)에 대(對)한 MIC 는 각각(各各) 100,238 및 $81,000{\mu}g/ml$ 이상(以上)으로서 효과(效果)가 가장 낮았으며 균(菌)의 내성(耐性)이 가장 높았다. lprodione 및 folpet의 MIC는 각각(各各) 3,825 및 $3,000{\mu}g/ml$ 이상(以上)으로 중도(中度)의 효과(效果)를 보였으며 균(菌)의 내성(耐性)도 중도(中度)였다. polyoxin의 MIC는 $900{\mu}g/ml$로서 효과(效果)가 높았으나 이는 권장농도(勸奬濃度)의 9배(倍)로서 균(菌)의 내성(耐性)이 약간(若干) 발생(發生)한 경향(傾向)을 보였다. polydong 및 oxidong 의 MIC 는 각각(各各) 500 및 $1,000{\mu}g/ml$ 이하(以下)로서 효과(效果)가 가장 높았으며 권장농도(勸奬濃度) 이하(以下)에서 균생육(菌生育)을 억제(抑制)하였으므로 현재(現在)로서는 농가(農家) 과수원(果樹園)에서 균(菌)의 내성(耐性)이 가장 낮았다. 공시(供試) 살균제(殺菌劑) 7종(種)에 대(對)한 사과 반점(斑點) 낙엽병균(落葉病菌)의 균사생장(菌絲生長), 포자형성(胞子形成) 및 포자발아(胞子發芽)는 같은 경향(傾向)의 반응(反應)을 보였다.
Attempts were made to see the antitumor effects of Sigbunhwan widely used in Oh-jug(五積) employing tumor cells Lines such as K562 derived from erythroleukemia, Raji from lympoma and MO-4 from blastogenic tumor. Different concentrations of Sigbunhwan and combined therapy of Sigbunhwan and Bigihwan were treated to those tumor cells lines and then live cells were counted by Trypan blue assay and $^{3}H-Thymidine$ uptake assay. The results obtained were as follows. 1. $^{3}H-Thymidine$ uptake of various tumor cells lines when treated with high concentrations of Sigbunhwan for 48hours showed that the rate of DNA synthesis decreased 76% to 90% by the treatment of 1% Sigbunhwan but this inhibition was rather decreased when Sigbunhwan concentration was increased to 10, 15 and 20%.(Fig 3) 2. When Sigbunhwan was combined with Bigihwan which was also an antitumor drug, the effectiveness of tumor cells dealth was somewhat inceased showing a generally similar pattern to that of Bigihwan alone used.(Fig 4) This combination therapy also showed that higher concentrations of antitumor agent were no more·effective or rather harmful according to the tumor cells lines having different growth rate.(Fig 5,6) 3. The antitumor effects of combined Sigbunhwan and Bigihwan was decreased if the concentrations of this combination therapy was increased to 10 times showing relatively sluggish decrease in K562 and MO-4 but a sharp inhibitory effect in Raji which grows slowly.(Fig 7). 4. When Sigbunhwan was treated at low concentrations, K562 was more inhibited by 0.75% to 1.0% of Sigbunhwan while Raji was more inhibited by 0.25% to 0.5% of that.(Fig 8) 5. When Sigbunhwan was treated together with Bigihwan at low concentrations, the tumor cells death rate was 75% to 89% in Baji, 31% to 95% in MO-4 and 41 to 89% in K562, showing this combination therapy was more effect to Raji derived from lymphoma.(Fig 9) 6. The number of live tumor cells was correlated with optical density of MTT assay when measured with 2% Sigbunhwan treatment to tumor cells lines for 24 hours.(Fig 10) 7. 7 days treatment of 0.25% Sigbunhwan was compared with one day treatment of 1% suggesting long term treatment more effective.(Fig 11)
This study was performed to investigate the induction of experimental atherosclerosis in rats and inhibitory effects of aloe vera on progression of atherosclerosis in rats. Adose range finding study of cholesterol and vitamin D2 for the induction of atherosclerosis and studies on the subchronic effect of aloe vera and on the chronic effect of aloe vera were carried out. A total of 3-week old 125 male rats of Sprague-Dawley were divided into 25 groups and fed with the diet containing cholesterol (0.1, 0.2, 0.3, 0.5, 1.0 and 2.0%) and vitamin D2 (500, 5000, 50000 and 500, 000 IU/100 g) for 4 weeks. 35 male rats were divided into 7 groups and fed with the diet containing aloe vera with 1.0% of cholesterol and 50, 000 IU/100 g of vitamin D2 for 4 weeks. 200 male rats were divided into 5 groups and fed with cholesterol and vitamin D2 for 6 and 12 months. Growth, clinical and pathological changes of rats in the three experiments were observed. The results were as follows: 1. In the dose-range finding study, feed intake, feed efficiency ratio and weight to body weight were increased in all of the feed groups containing 500, 000 IU/100 g of vitamin D2. Serum biochemical values of total cholesterol, high-density lipiprotein cholesterol (HDL-cholesterol), triglyceride, calcium, inorganic phosphorous and chloride of male rats in treated groups. The aorta and coronary artery of rats in all of the diet group containing 500, 000 IU/100 g of vitamin D2 showed typical atherosclerotic lesions. 2. Male rats fed with the diet containing aloe vera with 1.0% cholesterol and 50, 000 IU/100 g of vitamin D2 for 6 and 12 months did not show significant difference of diet intake and weight gain, and relative organ weight. The level of serum HDL-cholesterol and triglyceride recovered to the normal range by the aloe vera ingestation. 3. The aorta showed irregular appearence in the tunica intima with swelling, necrosis and calcification. The aorta of rat fed aloe vera diet showed no pathological lesions such as atherosclerosis of aorta. Aloe vera could have a helpful effect of vitamin D2 and cholesterol induced atherosclerosis in rats. Long-term supplementation of aloe vera may slow down the process of experimental atherosclerosis in rats have effects on the development of atherosclerosis.
Background: Melatonin, which is mainly produced by the pineal gland, has a good inhibitory effect on cell growth of multiple cancer types. However, the underlying molecular mechanisms of anti-tumor activity for colon cancer have not been fully elucidated. In this study, we investigated the effects of melatonin on migration in human colon cancer RKO cells and the potential molecular mechanisms. Materials and Methods: The viability of RKO cells was investigated by MTT assay after treatment with melatonin, SB203580 (p38 inhibitor) and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA, MAPK activator) alone or in combination for 48h. The effects of melatonin, and ML-7, a selective inhibitor of myosin light chain kinase (MLCK), and SB203580, and PMA on the migration of RKO cells were analyzed by in vitro scratch-wound assay. The relative mRNA levels of MLCK was assessed by real-time quantitative RT-PCR. Western blotting analysis was performed to examine the expression of MLCK, phosphorylation of myosin light chain (pMLC) and p38 (pp38). Results: The proliferation and migration of human colon cancer RKO cells were inhibited significantly after treatment with melatonin. The expression levels of MLCK and phosphorylation of MLC of RKO cells were reduced, and real-time quantitative RT-PCR showed that melatonin had significant effects on suppressing the expression of MLCK. Furthermore, the phosphorylation level of p38, which showed the same trend, was also reduced when cells were treated by melatonin. In addition, ML-7 (25umol/l) could down-regulate the phosphorylation of p38. Conclusions: Melatonin could inhibit the proliferation and migration of RKO cells, and further experiments confirmed that p38 MAPK plays an important role in regulating melatonin-induced migration inhibition through down-regulating the expression and activity of MLCK.
With an approach to study the anti-tumor effects and mechanism of selenium compound, we investigated the anti-tumor activity and mechanism of $Na_5SeV_5O_{18}{\cdot}3H_2O$ (NaSeVO) in K562 cells. The results showed that $0.625{\sim}20\;mg/L$ NaSeVO could significantly inhibit the proliferation of K562 cells in vitro in a time- and concentration-dependent manner as determined by microculture tetrazolium (MTT) assay, the IC50 values were 14.41 (4.45-46.60) and 3.45 (2.29-5.22) mg/L after 48 hand 72 h treatment with NaSeVO respectively. In vivo experiments demonstrated that i.p. administration of 5, 10 mg/kg NaSeVO exhibited an significant inhibitory effect on the growth of transplantation tumor sarcoma 180 (S180) and hepatoma 22 (H22) in mice, with inhibition rate 26.8% and 58.4% on S180 and 31.3% and 47.4% on H22, respectively. Cell cycle studies indicated that the proportion of G0/G1 phase was increased at 2.5 mg/L while decreased at 10 mg/L after treatment for 24, 48 h. Whereas S phase was decreased at 2.5-5 mg/L and markedly increased at 10 mg/L after treatment for 48 h. After treatment for 24 h, 10 mg/L NaSeVO also markedly increased S and G2/M phases. Take together, the result clearly showed that NaSeVO markedly increased S and G2/M phases at 10 mg/L. The study of immunocytochemistry showed that the expression bcl-2 is significantly inhibited by 10 mg/L NaSeVO, and bax increased. Morphology observation also revealed typical apoptotic features. NaSeVO also significantly caused the accumulation of $Ca^{2+}$ and $Mg^{2+}$, reactive oxygen species (ROS) and the reduction of pH value and mitochondrial membrane potential in K562 cells as compared with control by confocal laser scanning microscope. These results suggest that NaSeVO has anti-tumor effects and its mechanism is attributed partially to apoptosis induced by the elevation of intracellular $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$ and ROS concentration, and a reduction of pH value and mitochondria membrane potential (MMP).
재배버섯에 갈색의 침몰성 반점들로 나타나는 갈반병(brown blotch disease)은 Pseudomonas tolaasii의 펩티드성 독소인 tolaasin에 의해서 유발된다. Tolaasin은 18개의 아미노산으로 구성된 분자량 1,985 Da의 lipodepsipeptide이며, 생체막에 pore를 형성하여 버섯세포 뿐만 아녀라 세균, 곰팡이, 식물 및 동물세포를 파괴한다. Tolaasin의 활성은 용혈성 독소의 활성측정에 널리 쓰이는 적혈구를 이용하여 독소의 용혈활성을 측정함으로써 이루어졌다. Tolaasin의 용혈활성은 적혈구의 파괴시 방출되는 헤모글로빈 양을 420 nm에서의 흡광도 증가로 측정하거나, 잔존하는 적혈구에 의한 600 nm에서의 흡광도로 측정하였다. P. Tolaasii 배양액의 용혈활성은 배양중 정체기 초기에 증가하기 시작하여 정체기 후기에서 최대로 나타났다. Tolaasin의 용혈활성은 개와 쥐의 적혈구에서 높게 나타났으며, 상대적으로 토끼와 닭의 적혈구에서는 낮았다. Tolaasin의 용혈활성에 미치는 양이온들의 효과에서 $ZN^{2+}$ 뿐만 아니라, $Cd^{2+}$과 $L^{3+}$이 tolaasin의 용혈활성을 저해하였으며, 음이온의 경우 $CO_3^2$가 용혈활성을 지연시켰고, 반면 $PO_4^{2-}$의 경우 용혈활성을 증가시켰다.
Objectives: This study was designed to investigate the anti-tumor metastasis by anti-inflammatory and innate immunomodulating effects of extracts of Jipae-san on cancer cells. Methods: Antimetastatic experiments were conducted in vivo mouse model by using 4T1 mouse mammary carcinoma cells. Cell viability of Jipae-san was tested with 4T1 mouse mammary carcinoma cells, colon 26-M3.1 carcinoma cells and macrophage. In addition expression of $TNF-{\alpha}$ and NO induced by LPS was measured after treating with Jipae-san. To observe innate immunomodulating effects of Jipae-san on macrophage, we measured $TNF-{\alpha}$, IL-12, IL-6 and MCP-1, respectively. Cell cytotoxicity was tested with the macrophage stimulated with Jipae-san and we evaluated the activation of $TNF-{\alpha}$ and NO. And the effect of Jipae-san on metastasis was measured without NK-cell using GM1 serum. Results: Intravenous inoculation of Jipae-san significantly inhibited metastasis of 4T1 mouse mammary carcinoma cells. In an in vitro cytotoxicity analysis, cell growth are closer to 100% less than $1,000{\mu}g/ml$ concentration. The expression of $TNF-{\alpha}$ and NO induced by LPS after treating Jipae-san was down regulated in dose-dependent manner. Level of cytokines such as $TNF-{\alpha}$, IL-12, IL-6 and MCP-1 of Jipae-san group were up regulated in compared to the control group. The macrophage stimulated with Jipae-san significantly inhibits the cancer cell at ratio of 10:1, 20:1. The activation of NO was significantly up regualted in a group of 5:1, 10:1, 20:1. The depletion of NK-cells by anti-asialo GM1 serum partly abolished the inhibitory effect of Jipae-san on tumor metastasis. Conclusions: Jipae-san appears to have considerable activity on the anti-metastasis by inflammation control and activation of innate immune system.
E coli O157:H7은 식품과 물에 의해서 전염되는 식중독균으로서 이들의 생성하는 vero toxin 이 장관의 상피세포내로 침입되어 질병을 유발시키게 된다. 또한 E coli O157:H7 이 체내에 감염되기 위해서는 유산균과 마찬가지로 장상피세포에 정착하여야 한다. 따라서 본 연구에서는 비피더스균이 E. coli O157:H7의 생육 및 정착에 대해서 억제효과가 있는지를 파악하기 위해서 비피더스균과 E. coli O157:H7을 혼합 배양했을 때의 억제 효과 비피더스균의 Caco-2 세포 정착에 따른 억제 효과 등을 조사하였다. B infantis K9 균주와 E. coli O157:H7을 단독 또는 혼합배양하면서 배양시간에따른 pH 균수 암모니아 함량을 측정하였다. 그결과 배양시간이 결과되어 B infantis K9 균주에 의해서 산성물질이 생성되면서 E. coli O157:H7의 균수는 급격히 감소되는것으로 나타났다. 한편 암모니아 함량은 E. coli O157:H7 단독배양 시료에 비해서 혼합배양 시료에서 8시간 이후부터 감소되는 것으로 볼때 비피더스 균 E. coli O157:H7이 생성하는 암모니아를 이용하는것으로 확인되었다.B infantis K9 균주와 E. coli O.157:H7 P4 균주를 정착시기를 달리하여 Caco-2 세포에 혼합 정착시켰을 때 B. onfantis K9 균준느 정착시기에 상관없이 유사한 정착율을 나타냈다. 반면에 B infantis K9 균주가 2시간 전에 미리 정착되어 있을 때에는 E. coli O157: HP P4 균주의 정착율이 2.6%에서 1.86%로 감소되는 경향을 보였다. 결론적으로 비피더스균의 E coli O157:H7에 대한 생육 및 정착 억제를 검토한 결과 생육억제효과는 비피더스균에 의해서 생성된 산성물질 에 의해서 pH4.40 이하 일때 저해 효과를 보였으며 비피더스균과 E. coli O157:H7 이 정착 부위를 동일하게 이용하지만 비피더스균이 우선적으로 정착이 되었을 때 E. coli O157:H7의 정착율이 저하되는 결과를 나타냈다.
목향은 국화과에 속한 다년생 식물인 Saussurea lappa의 뿌리로서 한의학에서는 구토, 설사 및 염증치료 등에 사용되고 있다. 목향 추출물 및 그 성분들은 항균 작용, 항염증 작용, 혈관생성 억제 효능 등을 지니고 있으며 위암과 대장암의 세포증식을 억제하는 것으로 알려져 있다. 그러나 현재까지 전립선암에 대한 목향의 효과는 연구된 바 없다. 본 연구에서는 목향이 전립선 암세포에 미치는 영향을 조사하기 위해 인간의 전립선에서 유래한 암세포인 LNCaP 세포의 증식과 apoptosis에 미치는 영향을 조사하였다. 목향 헥산추출물을 LNCaP 세포 배양액에 여러 농도($0{\sim}4$ mg/L)로 첨가하여 세포의 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 목향 헥산추출물의 농도가 증가할수록 LNCaP 세포의 증식은 현저하게 감소하였고 apoptosis는 증가함을 관찰하였다. 목향 헥산추출물이 LNCaP 세포의 apoptosis 일으키는 기전을 연구하기 위하여 목향 헥산추출물을 첨가하고 세포를 48시간 배양한 후 cell lysate를 얻어 Western blot을 실시하였다. Apoptosis 과정에 작용하는 중요한 단백질 중 하나인 Bcl-2 family 단백질 중 pro-apoptotic Bcl-2 단백질인 Bak와 BH3 only Bcl-2 단백질인 truncated-Bid의 단백질 수준은 목향 헥산 추출물에 의해 유의적으로 증가한 반면 anti-apoptotic Bcl-2 단백질인 Bcl-2, Bcl-xL 및 Mcl-1 단백질 수준은 변하지 않았다. 또한 apoptosis를 집행하는 caspase의 활성 형태인 cleaved caspase-8, -9, -7, -3의 단백질 수준이 목향 헥산추출물의 처리에 의해 증가하였고 caspase-3의 표적 단백질 중 하나인 PARP의 불활성 형태인 cleaved PARP의 단백질 수준도 현저하게 증가하였다. 이 결과들은 목향 헥산 추출물이 LNCaP 세포의 apoptosis를 유도함으로써 전립선 암세포의 증식을 억제함을 보여주는 것이며 목향 헥산추출물에 의한 apoptosis 유도는 caspase 활성 증가와 Bak 및 t-Bid 단백질의 증가에 의한 것임을 제시한다. 따라서 앞으로 항암효과를 나타내는 성분의 동정 및 동물실험을 통하여 좀 더 면밀한 기전 연구가 수행된다면 목향 헥산추출물은 화학적 암예방 물질이나 치료제로 개발될 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 Alcaligenes sp.와 Pseudomonas sp. 균주를 2종 혼합 배양 시, 혼합균주의 생장 및 인 제거에 5종의 중금속(Cd, Cu, Zn, Pb, Ni)이 미치는 저해효과를 정량적으로 평가하고자 수행되었다. 단일 중금속 처리 시 중금속별 Alcaligenes sp.와 Pseudomonas sp. 균주의 IC50는 Cd 0.75 mg/L, Cu 10.93 mg/L, Zn 7.08 mg/L, Pb 13.3 mg/L, Ni 15.78 mg/L 인 것으로 나타났다. 중금속 2종 처리 시 IC50는 Cd + Cu 처리구에서 가장 낮은 농도를 보였고, Ni + Pb 처리구에서 가장 높은 농도를 보였다. 단일 중금속 처리 시 중금속별 EC50 값은 Cd 0.54 mg/L, Cu 11.08 mg/L, Zn 6.14 mg/L, Pb 9.33 mg/L 및 Ni 13.81 mg/L이었다. 2종의 중금속 혼합 처리구별 EC50은 Cd + Zn 처리구에서 가장 낮은 농도, Zn + Ni 처리구에서 가장 높은 농도를 보였다. 2종 혼합 균주에 대한 2종 중금속 처리 결과 도출된 IC50 및 EC50 값을 기반 중금속 별 상호작용 평가 결과, 대부분 길항작용을 보이는 것으로 나타났으나, Cu + Ni 처리구에서는 상승작용을 보이는 것이 확인되었다. 따라서 본 연구 결과는 미생물을 이용한 오폐수 정화 처리 시 미생물의 성장 및 인 제거에 미치는 중금속의 독성으로 인한 저해효과에 대한 기초 자료를 제공할 수 있을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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