한국의 인삼(Panax ginseng)은 다양한 생리학적, 약리학적 활성을 지닌 것으로 입증되어 왔다. 인삼 잘록병은 Rhizoctonia solani와 Pythium sp.과 같은 식물 병원균에 의해 발생하며 인삼 종자에 치명적이다. 잘록병은 일반적으로 화학농약을 이용하여 방제하고 있다. 또한 생물학적 방제는 인삼 잘록병을 방제하는데 효과적이며 환경친화적인 방법으로 알려져 있다. 본 연구진은 인삼 잘록병 방제를 위한 생물 방제제로서 잠재성을 지닌 토양 세균을 탐색하였으며, 그 결과 항균물질 guanidylfungin과 methylguanidylfungin을 생산하는 방선균 A3265 균주를 선발하였다. 본 연구는 방선균 A3265 균주의 인삼 잘록병 방제 활성을 포장에서 조사한 것이다. 그 결과 인삼종자를 방선균 A3265 균주의 배양액에 침지한 후 파종하였을 때 잘록병의 발병률이 유의적으로 감소함을 확인하였다. 이는 방선균 A3265 균주가 잘록병 방제에 효과적으로 활용될 수 있음을 나타낸다.
Ginseng damping-off, caused by the fungal pathogens Rhizoctonia solani and Pythium sp., is a critical disease in ginseng seedling. In a continuing effort to find microorganisms with the potential of acting as a biocontrol agent against Rhizoctonia damping-off, we found that a Streptomyces sp. A501 showed significant antifungal activity against Rhizoctonia solani. In field experiment to test the efficacy of Streptomyces sp. A501 in controlling ginseng damping-off, the incidence of damping-off disease was meaningfully reduced when ginseng seeds were soaked in the culture broth of Streptomyces sp. A501 before sowing. To perform characterization of the antifungal compound, we isolated it from the culture broth of strain A501 through Diaion HP-20 and silica gel column chromatographies and preparative high-performance liquid chromatography. The structure of the antifungal compound was assigned as fungichromin by spectroscopic methods, mainly nuclear magnetic resonance and electrospray ionization-mass analysis.
In vitro and in vivo effectiveness of fungicides were evaluated for the control of damping off caused by Rhizoctonia solani on Panax ginseng. Fludioxonil(67 mg a. i./L), flutolanil(75 mg a. i./L), thifluzamide(35 mg a. i./L), and mepronil (750 mg a. i./L) were selected from 9 fungicides, which were based on inhibition of mycelial growth of R. solani (isolate Rh 9801) and duration of fungicidal effectiveness against the pathogen in vitro. Field trials were made twice in the year of 2003 and 2004. Experimental plots $(54m{\times}0.9m)$ of 4-year-old ginseng fields were artificially infested with 5kg and 14 kg in fresh weight of inoculum in 2003 and 2004, respectively. The fungicides were drenched at a volume of 8l in $3.6m{\times}0.9m$ with 3 replications. Fludioxonil, flutolanil, thifluzamide and mepronil reduced the incidence of damping off by $73\%,\;69\%,\;69\%\;and\;43\%$, respectively. In the 2004 trial, fludioxonil, flutolanil, and thifluzamide showed similar result as reducing the incidence by $85\%,\;84\%,\;and\;82\%$, respectively, in the plot where the inoculum was applied 2.8 times more than the 2003. The disease incidences in untreated control were $12\%$ in 2003 and $47\%$ in 2004.
가. 인삼의 모잘록병을 방제하기 위하여 10종의 약제를 공시하여 실내 및 포장시험을 실시하였다. 나. 공시약제의 효과를 조사하기 위하여 실내에서 토양관법으로 그리고 포장에서는 모잘록병균을 인위적으로 접종한 균포와 자연발병상태의 균포에서 종자소독, 토양소독, 토양관주법으로 처리하였던 바, 다. 모잘록병 방제를 위해 기대되는 약제로는 Homai, Captan, Validamycin, Tachigaren등이 있다.
Incidence of damping-off callsed by Rhizoctonia solani was 0.6-10.9% at "Yangjik" seedbed in Pocheon, Korea. The seedbeds where the lengths of etiolated stems (underground portion) of ginseng seedlings were 0.78-1.25 cm showed 0.8-3.2% of the disease, while 6.9-10.9% disease incidence was observed at the seedbeds with the longer etiolated stem (1.89-2.26 cm). The pathogen produced a typical girdle symptom on the etiolated portion of ginseng stems close to the soil surface. The deeper the seeds were sown, the more the disease occurred in pot soil inoculated with the pathogen, AG 2-1, showing 18.4, 27.4 and 32.9% of damping-off at the seeding depth of 1, 2 and 4 cm, respectively. Cuticle layers of colored stems (over ground portion) were well - developed to be 42.8, 58.0, and 55.0 um in thickness compared to the etiolated stems with 8.5, 15.0 and 8.0um for seedling, 2 year-old, and 3 year-old ginsengs, respectively, when the disease occurred. In the seedling and 2 year-old ginseng, the colored stems were more rigid than the etiolated. There was however, no difference in rigidness of the stem of the 3 year-old ginseng where the disease is not severe as in seedlings and 2 year-old ginseng plants.ng plants.
본 연구팀에서 개발한 키틴분해미생물 대량배양 bioformulated product는 다양한 작물의 병과 선충의 생물적 방제에 성공적으로 이용되어 왔다. 이 연구에서는 개발된 키틴분해미생물 대량배양 기술을 활용하여 인삼 모잘록병의 생물적 방제법을 확립하고자 수행하였다. 인삼 잘록병 오염 토양을 이용한 포트에서 키틴최소배지에서 배양한 키틴분해미생물 Chrobacterium sp.와 L. enzymogenes 혼합배양액 처리구에는 인삼의 출아율과 인삼 잘록병율이 통계적으로 유의하게 감소하였다. 개발된 키틴분해미생물 배양액의 생물적 방제 능력은 희석여부와 처리시기에 따라 차이를 보였다. 인삼 포장에서 혼합배양액을 파종 전 종자침지하고 출아기에는 토양관주하였을 때, 본포의 2년생 인삼에서 배양원액은 2회 토양관주, 10배 희석액은 3회 토양관주에서 높은 방제효과를 나타냈다. 토직 본포의 경우 배양 원액의 종자 침지에 의한 방제효과는 낮았지만, 종자침지 후 1회 또는 2회 토양관주는 살균제인 톨클로로포스메틸수화제의 종자분의소독과 비슷한 수준의 방제효과를 보였다. 이러한 결과는 Chromobacterium sp. C-61와 L. enzymogenes C-3의 혼합배양액을 이용하여 인삼 잘록병 방제에 화학적 살균제를 대신할 수 있을 효과적인 대안이 될 수 있을 것이다.
Tolclofos-methyl applied as seed dipping at 1,000 ppm for 3 hrs before sowing and soil drenching at the rate of 300 g ai./10 a in the middle of April protected emerging seedlings of Panax ginseng from damping-off caused by Rhiiutonia solani(AG2-1) in Yangjik Soil artificially infested with the pathogen. Germination rates with tolclofos-methyl, pencycuron, and control were 53.7%, 45.8%, and 7.5%, respectively, while the rate of the seeds at non-infested soil was 62.6%. The effectiveness of Tolclofos-methyl against the pathogen in the soil lasted upto 32 days in vitro. However, the transpiratio of ginseng seedlings increased greatly with chemical treatment, showing 0.02, 0.12, and 0.24 m1/cm2 leaf area/day at 0, 1,2, and 4 ppm a.i. of the fungicide, respectively.
In replicated field trials, the efficacy of pentachloronitrobenzene (PCNB; quintozene) for control of damping-off of ginseng seedlings was found to be affected by timing of application and formulation. Application at the time of seeding and prior to placement of straw mulch was found to provide the moat consistent level of disease control. However, decline in plant stand during the four-year production cycle resulted in most treatments providing similar levels of plant populations at harvest. Soil residues of pentachloronitrobenzene were generally highest (1 $\mu\textrm{g}$ PCNB/g soil) in those treatments that exhibited the highest levels of disease control in the seedling year. Straw contained high levels of quintozene after application. Beet seed assays with artificially-infested soils indicated that current use rates provide an amount of product suitable for high levels of disease control.
Rhizoctonia solani에 의해 발생하는 잘록병은 인삼 묘포에서 가장 중요한 병이다. 이 병을 방제하기 위해 사용된 folclofos-methyl은 약 20년간 사용되어 왔다. 이 약제는 6년생 수삼에서도 잔류가 되어 안전하고 병원균 방제에 효과적인 약제를 선발하기 위해 4종 (fludioxonil, flutolanil, pencycuron, thifluzamide)의 살균제의 약효를 검정하였다. 실내에서 시기별로 80% 이상의 생육억제 효과를 조사한 결과, fludioxonil 25일, thifluzamide, flutolanil 10일, pencycuron 1일로 조사되었으며, 포장시험에서 방제효과는 fludioxonil, thifluzamide, flutolanil, Pencycuron에 대해 각각 71%, 57%, 54%, 29%의 효과를 보였다. 가장 높은 효과를 보인 Fludioxonil의 경우 국내 및 해외에 등록되어 있으며, 잔류성 조사 결과 묘삼에서 0.44 mg/kg으로 조사되어 이후 5년간 재배 시 영향이 없을 것으로 조사되었다. 따라서 Fludioxonil은 Tolclofos-methyl을 대체하여 사용할 수 있을 것으로 판단된다.
Bacillusvelezensis CC112 균주는 인삼 잘록병을 일으키는 Rhizoctonia solani를 비롯한 여러 식물병원균의 균사 생장을 억제하였다. 인삼 잘록병균 R. solani에 대하여 B. velezensis CC112 균주를 Luria-Bertani (LB)와 Bacillus-soytone medium 배지에 배양한 10배 희석액의 종자침지처리와 LB 배지에 배양한 10배 희석액을 토양관주처리하여 65.8%, 67.1%와 64.2% 방제효과를 나타냈다. B.velezensis CC112 균주의 시제품을 100배로 희석하여 토양관주처리하여 R. solani에 77.3%, Pythium sp.에 65.7% 방제효과를 각각 나타내었다. 이들 결과에서 B. velezensis CC112 균주는 인삼 잘록병의 방제에 유망한 미생물살균제가 될 수 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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