The tadpole larva of the ascidian Halocynthia roretzi has two sensory pigment cells in its brain vesicle. To elucidate the temporal requirement for FGF signaling in formation of the pigment cells, embryos were treated with an FGF receptor 1 inhibitor, SU5402, or an MEK inhibitor, U0126 during various embryonic stages. In the present study, it is shown that the embryos treated with SU5402 from the 16-cell stage to the early gastrula stage do not form pigment cells, whereas those treated after the early gastrula stage form pigment cells. In pigment cell formation, embryos suddenly exhibited the sensitivity to SU5402 only for 1 h at the neural plate stage(-4 h after the beginning of gastrulation). When U0126 treatment was carried out at various stages between the 8-cell and late neurula stages, the embryos scarcely formed pigment cells. Pigment cell formation occurred when the embryos were placed in U0126 at early tail bud stage. These results indicate that FGF signaling is involved in pigment cell formation at two separate processes during ascidian embryogenesis, whereas more prolonged period is required for MEK signaling.
We have launched an investigation for Embryonic Development, Larvae and Juvenile Morphology, of Buenos aires tetra in order to build basic data of Characidae and fish seeding production. We brought 50 couples of Characidae from Bizidduck aquarium in Yeosu-si, Jeollanamdo, from Korea on March of 2015. We put them in the tetragonal glass aquarium ($50{\times}50{\times}30cm$). Breeding water temperature was $27.5{\sim}28.5^{\circ}C$ (mean $28.0{\pm}0.05^{\circ}C$) and being maintained. The shape of fertilized egg was round shape, and it was adhesive demersal egg. The egg size was 0.63~0.91 mm (mean $0.74{\pm}0.07mm$, n=20). After getting fertilized egg, the developmental stage was gastrula stage, and embryo covered almost two-thirds of Yolk. Incubation was happened after 16 hours 13 minutes from gastrula stage, and the tail of juvenile came out first with tearing egg capsule. Immediately after the incubation, prelarvae had 3.78~3.88 mm length (mean $3.84{\pm}0.04mm$, n=5), and it had no mouth and anus yet. 34 days after hatching from the incubation, juvenile had 8.63~13.1 mm (mean $10.9{\pm}1.66mm$), and it had similar silver-colored body shape with its mother.
Effect of cadmium on the early amphibian development was analyzed through FETAX (Frog Embryo Teratogenesis Assay: Xenopus). Embryos manifested concentration-dependent mortality and realformations; shortage of anterior-posterior axis gut realformation, ocular anomalies, bent notochord, misshapen dorsal fin, and derreal blisters. The treatment with 1.5ppm cadmium solution caused 100% mortality and concentration of lppm did not kill the embryos that caused 100% anomaly. The teratogenic index (TI = LC50 /EC50) was 2.8 indicating that $CdCl_2$ is teratogenic for Xenopus laevis. Embryos that were pulsetreated with at early to late blastula stage (St. 3-9) and mid to late blastula stage (St. 6-10) showed relatively strong resistance to cadmium, but the embryos treated at gastrula stage (St. 10-13) showed high mortality. And the embryos treated at tailbud stage (after St. 25) showed highest mortality of any other early stages. Effects of temperature were studied through pulse- treatment during gastrula stage at $20^{\circ}C$ and $30^{\circ}C$. The embryos treated with 7.5ppm at $30^{\circ}C$ and 15ppm at $20^{\circ}C$ caused 100% mortality respectively, indicating that higher temperature had more severe toxic effect. One of the most peculiar effect of cadmium at gastrulation was distortion of the tail. The probable cause of toxic effect of Cd was discussed.
To investigate the usability of frozen canine embryos for embryo transfer in the dog, 19 donors, 3 recipients, and 6 male dogs were used for the experiment. Natural mating or artificial insemination was performed for breeding the bitches in natural estrus. Vaginal smear test along with progesterone titre test were performed to detect the appropriate mating time and the bitches were bred twice during 3-6days following LH surge. Embryo collection was done on 8, 9-11, 12-13 days after the second mating to collect morula and blastocyst. Embryos were frozen using a programmable freezer and preseued in LNE tank. Embryos were thawed in 37$^{\circ}C$ water for 15 seconds and transferred into each uterine horn within 30 minutes. Embryos were collected from 13 bitches of 19 donors(68.4%) and the collected embryos were from between 9 and 13 days after 2nd mating. Embryos were produced both by natural mating(60.0%, 9115) and AI with frozen semen(100.0%, 4/4). Embryos were collected from the donors weighed between 2.5 and 30 kg and their age was from 1.5 to 3 years. 52 embryos were collected from 13 donors and the mean number of embryos was four. The stage of embryos was from 2-cell to gastrula and morulae were colledted mostly from 10 to 11 days after 2nd mating. Embryos were collected evenly from each uterine horn and the rate of embryo collection for the number of corpus luteum was 83.9%. Embryos were transferred to 3 recipients(morula 8, blastocyst 1, gastrula 8), however, no offspring was produced.
멍게 유생의 뇌포에는 2개의 감각색소세포인 평형기와 안점 이외에 또 다른 감각세포로 추정되는 수압수용체세포가 존재한다. 수압수용체세포 형성에 관해서는 현재까지 거의 알려진 것이 없다. 본 연구에서는 수압수용체세포 형성에서 FGF 신호전달 과정의 관련성을 조사했다. 수정란에 Hr-FGF9/16/20 antisense MO를 미세주입했을 때, 발생한 유생에서 수압수용체세포 특이적 Hpr-1 항원의 발현이 검출되지 않았다. 32세포기부터 FGF 수용체 억제제 SU5402 및 MEK 억제제 U0126을 처리한 배아도 수압수용체세포를 갖지 못한 유생으로 발생했다. 다음으로 수압수용체세포 형성에 FGF 신호전달 과정이 관련되는 시기를 자세히 조사했다. 수압수용체세포 형성에는 FGF 수용체 활성이 16세포기부터 64세포기까지 필요하다는 것이 시사되었다. U0126은 8세포기부터 후기 낭배기까지 Hpr-1 항원 발현을 억제했다. Hpr-1 항원 발현은 신경판기 직전부터 U0126의 영향을 받지 않았다. 따라서, 멍게에서 수압수용체세포 형성은 1차 신경유도기부터 후기 낭배기까지 FGF 신호전달 과정을 필요로 한다는 것이 밝혀졌다.
수정 직후 일어나는 배, 복측 결정의 기작을 알아 보기 위하여 자외선의 조사와 난의 회전방법을 한국산 무미양서류에 적용하였다. 제 1 분열전의 수정난을 일정기간 $90^\\cdot$회전시키면 자외선에 의한 전형적인 발생결함을 억제시킬수 있었다. 한편, 제 1 분열 전 단기간 회전시킨 난으로부터 발생한 embryo의 원구배순부의 위치도 회전시 중력의 반대 방향에 위치하였던 새로운 장소에 형성되었다. 위의 결과는 다른 무미, 유미양서류를 통하여 얻은 지식과 비교 검토하여 초기발생 기작을 이해하는데 접근하고자 하였다.
We investigated the development of allotriploid embryos derived from a cross between female starry flounder Platichthys stellatus and male stone flounder Kareius bicoloratus. The second cleavage, mid-blastula, gastrula, and Kupffer's vesicle appearance stages, and hatching of embryos began 3.7, 25.6, 45.7, 87.7, and 213.2 h after cold shock at $6^{\circ}C$, respectively. The hatching and development time of triploid interspecific hybrid eggs was approximately the same as those of diploid starry flounder eggs at the same incubation temperature.
Estrogen과 estrogenic endocrine disrupting chemicals(EDCs)는 주로 스테로이드 수용체와 작용하여 다양한 표적 단백질 유전자의 전사를 조절한다. 구조적으로 estrogen 수용체와 유사한 estrogen 수용체형 수용체(estrogen receptorrelated receptor, ERR)는 포유동물에서 배발생 후기에 외배엽 형성과 관련되어 있다고 알려진 고아핵수용체(orphan nuclear receptor)이다. 본 연구에서는 해양무척추동물인 둥근성게(Strongylocentrotus nudus)의 발생배를 재료로 estradiol-$17{\beta}(E_2)$과 EDCs의 일종인 nonylphenol(NP)이 발생과정의 형태학적 변화와 $ERR{\beta}$ like 1의 mRNA발현에 미치는 영향을 조사하였다. $E_2$와 NP가 처리된 발생배는 발생속도가 지연되었으며, 초기 유생기에 가까운 후기배의 비정상적인 발달형태가 관찰되었다. 수정란부터 초기 유생기까지 측정한 결과, 이들 화학물질에 의해 $ERR{\beta}$ like 1 mRNA는 포배기에 급격히 감소하는 패턴을 보였다. 이상의 결과는 둥근성게의 초기 배가 $E_2$와 NP에 의해 비정상적으로 발생되며, $ERR{\beta}$ like 1의 감소가 이 비정상적 배발생과 관련되어 있음을 시사한다.
성게의 일종인 Hemicentrotus pulcherrimus에서 수정전에 이미 축적되었던 mRNA의 활성화 변화를 알아보기 위하여 초기 발생동안의 RNA와 단백질 합성에 관하여 연구하였다. 미수정란에서는 RNA와 단백질의 합성들이 대단히 낮았다. 그러나 수정과 함께 RNA합성은 크게 변하지 않은 반면, 단백질합성은 크게 활성화되었다. RNA와 단백질 합성율이 병행적으로 변하지는 않지만, 포배와 낭배에서 크게 증가함을 볼 수 있었다. 단백질합성은 양적으로 뿐만 아니라 질적으로도 발생단계에 따라 변하는 사실을 이차원 전기영동에 의한 연구를 통하여 확인할 수 있었다.
We investigated the characteristics and rate of development of allotriploid embryos derived from a cross between female olive flounder Paralichthys olivaceus and male starry flounder Platichthys stellatus. The allotriploidy was induced by cold shocking fertilized eggs three minutes post-fertilization at 3°C for 45 minutes. The average cellular DNA content of the allotriploid embryos was 2.06±0.03 pg/cell, which is equal to the sum of the cellular DNA content of a diploid olive flounder (1.42 pg/cell) and a haploid starry flounder (0.66 pg/haploid cell). The first cleavage, midblastula, gastrula and Kupffer's vesicle appearance stages of the allotriploid eggs began at 1.5, 8, 13 and 26 hours after cold shocking at 18°C, respectively. The developmental rate of allotriploid eggs was equivalent to that of diploid and triploid olive flounder eggs at 10, 14 and 18°C. However, the hatching times of allotriploid eggs, 7 h at 10°C, 5 h at 14°C and 4 h at 18°C, were earlier than those of diploid and triploid olive flounder.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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