본 연구에서는 한방에서 약용으로 사용하고 있는 미나리 재비과에 속하는 다년생 초본으로 백작약의 열수 추출물을 이용하여 LPS로 유발된 급성 간독성에서의 간 보호효과를 나타내는지 살펴보고자 하였다. 간독성이 유발된 쥐의 혈청에서의 GOT, GPT 그리고 LDH의 감소는 백작약 추출물이 간독성으로부터 간을 보호하였음을 보여주며, 간조직에서의 MDA 감소 및 SOD, CAT, GPx의 활성도 증가 역시 백작약 추출물이 간독성으로부터 간의 기능이 회복됨을 볼 수 있었다. 이러한 결과는 백작약 추출물이 LPS로 유발된 급성 간손상에 대한 보호물질로서의 가능성을 확인할 수 있었다.
가시오갈피 및 두충과 같은 천연 생리활성 사료 첨가제를 사료와 함께 급여하여 지방, 근육, 항산화 효소 등과 관련된 유전자의 발현을 분석하여 생리활성 물질에 의한 육계의 영향을 분자생물학적 측면에서 접근해 보고자 본 연구를 실시하게 되었다. 본 연구는 육계 Ross종 수컷을 5처리 8반복, 반복당 4수씩을 4일령에 완전 임의 배치하였으며, 시험 사료에 가시오갈피와 두충을 0%(대조구), 0.5%, 1% 수준으로 각각 첨가하여 35일령까지 자유 급여를 실시하고 시험 종료일에 근육과 간의 조직을 취하여 RNA를 분리한 후 분석에 이용하였다. 천연물 첨가에 따른 증체, 사료 섭취량 및 사료 요구율의 사양 성적 결과, 사료 요구율을 제외한 사양 성적에 큰 영향을 미치지 않았다. 근육 및 지방 합성 관련 유전자의 발현을 분석한 결과, 지방 합성 관련 유전자 FAS는 처리간에 차이가 없었으나, 전사인자인 $PPAR{\gamma}$의 유전자 발현은 두충 처리구에서 높은 발현을 보였으나, 대조구와 가시오갈피와는 차이가 없었다. 근육 관련 유전자 MyoD와 Myogenin의 발현을 분석한 결과, Myogenin은 모든 처리구에서 대조구에 비해 높은 발현율을 보였으며, MyoD 또한 대조구에 비해 높은 발현율을 보였으나 가시오갈피에 비하여 두충이 이 유전자의 발현을 더 유도하는 것으로 나타났다. 항산화 효소 유전자(GST, CAT, SOD, GPX)의 발현을 측정한 결과, 대체적으로 대조구와 큰 차이가 없었으나 두충의 1% 사료내 첨가는 항산화 효소 중 SOD와 GPX의 활성을 증진시켰다. 이상의 결과로부터 육계에 가시오갈피와 두충의 급여는 생산 능력에 큰 영향을 미치지 않으면서 근육 성장에 긍정적으로 작용하여 산화적 스트레스도 감소(SOD, GPX)시키는 효과가 있는 것으로 사료된다.
당뇨쥐에서 운동부하가 골격근과 간의 항산화효소 활성도에 미치는 영향과 산소유리기에 의한 조직손상 여부블 관찰한 연구 결과를 요약하면 다음과 같다. Strcptozotocin으로 유도한 당뇨군의 혈당농도(mg/dL)는 $344{\pm}14.8$로서 대조군의 $117{\pm}2.7$보다 높았으며(p<0.001) 운동부하에 의해서 유의하게 감소하였다(p<0.01). 혈장 인슐린 농도(${\mu}U/mL$)는 당뇨군에서 $8.5{\pm}0.5$로서 대조군의 $20.6{\pm}1.4$보다 유의하게 낮았으며(p<0.001) 운동부하후에는 운동부하전과 비교하여 차이가 없었다. 당뇨군에서 실제 운동부하의 정도를 평가하기 위해서 측정한 운동부하후 골격 끈파 간의 당원농도(mg/100 g wet wt.)는 각각 $1.0{\pm}0.1$과 $7.7{\pm}0.8$로서 운동부하전과 비교시 모두 유의하게 감소하였다(p<0.001, p<0.01). 당뇨군의 골격근과 간의 항산화효소 즉 superoxide dismutase(SOD), glutathionc pcroxidase(GPX) 및 catalase(CAT)의 활성도는 운동부하에 의해서 각기 다른 반응을 보였다. 골격근의 SOD 활성도(unit/mg protein)는 대조군에서 $6.3{\pm}0.2$였으며 당뇨군에서는 $5.8{\pm}0.2$로서 대조군과의 사이에 유의한 차이를 발견할 수 없었으나 운동부하후에는 $5.0{\pm}0.1$로서 대조군과 운동부하전 당뇨군보다 유의하게 감소하였다(p<0.001, p<0.01). GPX 활성도(nmol/min/mg protein)는 당뇨군에서 운동부하전후에 각각 $2.3{\pm}0.2$와 $1.8{\pm}0.1$로서 대조군의 $1.6{\pm}0.0$보다 다같이 높았으나(p<0.05, p<0.05) 운동부하에 의해서 영향을 받지 않았다. CAT 활성도(pmol/min/mg protein)는 당뇨군에서 $7.6{\pm}0.7$로서 대조군의 $6.3{\pm}0.7$과 비교하여 차이가 없었으나 훈동부하후에는 $4.6{\pm}0.3$으로서 대조군보다 감소하였으며(p<0.05) 당뇨군의 운동부하전보다도 감소하였다(p<0.01). 당뇨군의 MDA 농도는 대조군과 비교하여 차이가 없었으며 당뇨군에서 운동부하에 의한 영향도 받지 않았다. 간의 SOD 활성도는 대조군에서 $11.3{\pm}0.2$였으며 운동부하전 당뇨군에서는 $9.6{\pm}0.3$으로서 유의하게 감소하였다(p<0.01). 당뇨군에서 운동부하전후 측정한 SOD 활성모는 대조군과 비교하여 다같이 감소하였으나(p<0.01, p<0.001), 운동부하에 의한 영향은 없었다. 당뇨군외 GPX와 CAT의 활성도는 대조군과 비교하여 유의한 차이가 없었으며 당뇨군에서 운동 부하에 의한 변화도 없었다. 운동부하전 당뇨군의 MDA 농도(nmol/g wet wt.)는 $38.5{\pm}1.3$으로서 대조군의 $24.8{\pm}0.9$에 비해서 유의하게 증가하였으며(p<0.001) 운동부하에 의해서는 대조군보다는 높았으나(p<0.001) 운동부하전과 비교하여서는 차이가 없었다. 이상의 결과를 종합하면 당뇨쥐에서 골격근은 운동부하로 인한 산화 스트레스에 대한 적응과정을 통해서 손상이 없었으나, 간 조직은 당뇨병 자체로 인한 산소유리기의 발생으로 손상의 위험이 있었으나 운동부하에 의한 더 이상의 손상은 없었다.
High PUFA식이와 vitamin E 함량이 흰쥐 간장내의 지질과산화에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 45Kcal% 고불포화 옥수수유의 정상적 vitamin E함량을 가한 식이군(PF군)과 45Kcal% 고불포화 옥수수유의 가한 PF군에 vitamin E를 5배 첨가한 식이군(PFE군), 45Kcal% 고불포화 옥수수유 식이에 vitamin E를 가하지 않은 식이군 (PFO군)을 실험군으로 하여 3주, 6주 및 9주간 사육한 후 간장에서의 vitamin E 함량과 과산화지질량 및 SOD와 GPX활성을 조사하였다. High PUFA식이에 vitamin E를 정상적으로 가한 PF군은 대조군과 차이가 나타나지 않았으나, vitamin E를 충분히 첨가한 식이 PFE군은 식이내 vitamin E 공급이 부족한 PFO군보다 vitamin E 함량과 GPX활성이 증가하였고, SOD활성과 과산화지질향은 현저하게 감소하였다. 식이 투여기간별로 PF군과 PFE군에 비해 PFO군이 실험기간이 경과할수록 vitamin E 함량과 GPX활성이 감소하였으나, SOD활성과 과산화지질향은 현저히 증가하였다.
The objectives of present study were to investigate the effects of benzo[a]pyrene(BaP) on cytotoxicity, lipid peroxidation and antioxidant enzymes in rat hepatocyte primary culture. Primary cultures of rat hepatocytes were incubated for 24 hr, 48 hr or 72 hr in the presence of various concentrations (0, 10, 20, 30, 50 or 100 $\mu.$ M) of BaP. Cytotoxicity and cell viability were determined by measuring glutamic oxaloacetic transaminase(GOT) activity, lactate dehydrogenase(LDH) activity and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide(MIT) value. Lipid peroxidation was evaluated using thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) assay. Effects on antioxidant system were determined by measuring glutathione peroxidase(GPx) activity, glutathione reductase(GR) activity and glutathione concentration. Activities of GOT and LDH, MTT value as well as TBARS concentration were not affected by up to 100 $\muM$ of BaP for 24 hr incubation. However, BaP at the concentration of 50 $\muM$ for 48 hr incubation or at the concentration of 30 $\muM$ for 72 hr incubation began to increase LDH activity and TBARS concentration but decrease MTT value, representing that BaP caused cytotoxicity and decreased cell viability in dose- and time-dependent manners. GPx activity began to be decreased by BaP at the concentration of 50 $\muM$ for 72 hr incubation. Whereas, GR activity began to be decreased by BaP at the concentration of 20 $\muM$ for 72 hr incubation. Glutathione concentration began to be decreased by BaP at the concentration of 20 $\muM$ for 72 hr incubation and was further reduced to 90% by 100 $\muM$ of BaP. These results demonstrate that BaP caused cytoctoxicity and decreased cell viability by increasing lipid peroxidation and decreasing glutathione concentration as well as activities of GPx and GR.
Farnesol in fruits, vegetables, herbs and leaves acts as bioactive component related with prevention of cancer and psychological malaise. We investigated the cytotoxic effects of farnesol on human leukemic cell, HL-60 cells, by MTT assay using 3- (4,5-Oirnethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazoliumbromide. Farnesol (0.1${\sim}$50 ${\mu}$g/ml) exhibited cytotoxicities against HL-60 cells in concentration and culture period dependent manner, In the cytotoxic condition induced by farnesol against HL-60 cells, the generation of reactive oxygen species such as O$_2$ and H$_2$O$_2$ were found to be considerably increased. The most prominent augmentations of O$_2$ and H$_2$O$_2$ were over five folds of controls. In an attempt to explore the response of HL-60 cells to the increased O$_2$ and H$_2$O$_2$, superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and catalase activities of HL-60 cells treated with farnesol were measured. SOD and GPx activities were found to be remarkably elevated by addition of farnesol showing the best results of 273% and 167% of controls, respectively: All data suggest that farnesol may have played as an apoptosis inducer in HL-60 cells via production of reactive oxygen species (ROS) and HL-60 cells may have failed to overcome the damage of ROS on account of still defcient ROS scavengers including SOD and GPx.
본 연구에서는 한국인을 대상으로 하여 혈중 셀레노단백질의 함량과 위암과의 상관관계를 연구하였다. 혈청 속에서의 셀레노단백질의 함량을 종별로 분석하여, 각 단백질의 함량과 위암과의 상관관계를 알아보고 셀레늄의 위암에 대한 생체지표로서의 가능성을 알아보고자 하였다. SPE를 사용하여 방해 이온들을 제거한 뒤 후컬럼 동위원소법으로 정량한 기존의 복잡한 방법과 달리 SPE를 사용하지 않고 m/z 78을 모니터링하고 검정곡선법으로 정량하였다. 표준인증물질인 CRM BCR-637을 사용하여 정확도를 검증한 결과 72.20±3.35 ng·g−1로서 기준값인 81±7 ng·g−1에 만족할 만한 결과를 얻었다. 먼저 통제군인 순환기 질환 환자 혈청 속의 셀레노단백질의 총농도를 조사해본 결과 105.70±21.20 ng·g−1으로서 정상인의 값과 차이가 없었다. 각 종별 농도를 보면 GPx와 SelP, 그리고 SeAlb이 각 각 26.12±7.84, 65.15±14.50, 14.43±6.99 ng·g−1이며 분포는 24.7%, 61.6%, 및 13.7% 이었다. 한국인의 위암 환자의 혈청을 분석한 결과, GPx와 SelP, 그리고 SeAlb의 농도는 각각 15.41±9.01, 50.83±17.9, 그리고 9.87±5.21 ng·g−1이며 총 농도는 76.11±28.12 ng·g−1으로 대조군에 비하여 총량과 각 종들도 모두 큰 감소를 보였다. 감소폭은 GPx는 41.0%, SelP 22.0%, SeAlb 31.6% 이었다. 하지만 종별 분포는 유의미한 차이를 보이지 않았고 따라서 위암 환자의 경우 셀레노단백의 총량을 분석하거나 또는 그 중 하나의 단백질을 사용하여도 암을 진단하는 보조적인 지표가 될 수 있을 것으로 생각되었다. 또한 나이별에 따른 분석을 보면 노년인 50대 부터 70대에서는 실험군과 대조군이 확실한 차이를 보이나 30대와 40대에서는 별 차이를 보이지 않고 있으므로 성별, 나이별에 따른 조사가 더 필요할 것으로 보인다.
본 연구는 곰취에서 분리한 3,5-dicaffeoylquinic acid(3,5-DCQA)의 간세포에 대한 보호기능을 평가하기 위해 HepG2 세포를 이용하여 hydrogen peroxide에 의해 유도된 산화적 스트레스에 대한 항산화 효소 유전자 발현량 및 간 기능 지표 효소(LDH, GGT, GOT) 활성에 미치는 영향을 분석하였다. 산화적 스트레스가 유도된 HepG2 세포에 3,5-DCQA를 10, 20 및 $30{\mu}g/mL$ 농도별로 처리한 후 real-time PCR을 이용하여 주요 항산화 효소들의 유전자 발현량을 측정한 결과, hydrogen peroxide 처리에 의해 감소한 SOD-1, SOD-2, CAT 및 GPx의 mRNA 발현량이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, HepG2 세포에서 hydrogen peroxide 처리에 의해 증가한 주요 간기능 지표 효소인 LDH, GGT 및 GOT 활성이 3,5-DCQA(10, 20, $30{\mu}g/mL$) 처리에 의해 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다. 이와 같은 실험 결과로부터 곰취에서 분리한 페놀화합물인 3,5-DCQA는 HepG2 세포에서 산화적 스트레스에 대한 우수한 항산화 효과 및 간세포 보호 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었으며, 향후 관련 기능성 식품개발에 필요한 기초적인 자료로 활용될 수 있을 것으로 기대된다. 또한, 동물실험을 통한 3,5-DCQA의 추가적인 기능성 검증이 필요하다고 판단된다.
대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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pp.93-95
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2003
Selenium is an ultra trace essential element for the normal functioning body because of forming the active center of redox enzymes such as four kinds of glutathione peroxidases (GPx), thioredoxin reductase (TR) and 5'-iodothyronine deiodinase. However, the adequate range between deficient and excessive levels is very narrow. (omitted)
Doxorubicin is a powerful anticancer antibiotic extensively used in the treatment of several types of cancers. Long-term administration of this drug results in cumulative dose related cardiotoxicity due to enhanced production of free radicals leading to oxidative stress. Our earlier investigations have demonstrated significant antioxidant, anti-inflammatory and antitumour properties of Ganoderma lucidum extracts. We extended our investigations to evaluate the protective effect of Ganoderma lucidum extract against doxorubicin-induced cardiotoxicity. Administration of 3 doses of doxorubicin, 6 mg/kg body weights, i.p. per each dose, alternative days, showed dear signs of cardiotoxicity in rats. The drug enhanced serum creatine kinase (CK) activity and lipid peroxidation in tissue drastically. The drug also induced significant decrease in GSH level and activities of CAT, SOD and GPx. Administration of methanolic extract of G.lucidum (500 and 1,000 mg/kg body weight) significantly increased the level of GSH and activities of CAT, SOD and GPx. Activity of CK was significantly lowered in a dose dependent manner. The treatment also caused significant decrease in lipid peroxidation (MDA). The results thus indicated that methanolic extract of G.lucidum prevented oxidative stress caused by doxorubicin administration and the increase in serum CK activity and lipid peroxidation in the tissue. The experimental findings suggest the therapeutic potential of G.lucidum as adjuvant in cancer chemotherapy.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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