Rehmannia glutinosa is one of the most important medicinal crops in Korea. However, various plant pathogens, including Fusatium spp., cause great damage on R. glutinosa and result in enormous economic losses. This study was conducted to breed Fusarium-resistant plants by using Agrobacterium tumefaciences and AFP (anti-fungal protein) gene. The plant material used was a native accession of R. glutinosa. The PCR analysis was conducted to verify transgenicity. Based on the PCR analysis, nptII band was observed in transgenic plant genome. Southern blot and AFP protein analyses also showed the expression of this gene in transgenic plants. Expression of AFP in transgenic plants offers the possibility of developing resistance to fungal infection.
Five nematophagous fungi were evaluated for their nematicidal effect in vitro on Rhabditis sp. and Meloidogyne hapla in soil. Inocula of Arthrobotrys arthrobotryoides, A. conoides, A. oligospora, Dactylella lobata, and Fusarium oxyaporum were grown in moistened corn-sandy soil and chopped potato-sandy soil media, and incubated at 26$^{\circ}C$ for one week. The prepared inocula were incorporated in autoclaved sandy soil, mixing thoroughly at rates equ-invalent to 1:50, 1:100, 1:200, and 1:400, repectively, before 80g of the mixture carrying 100 Rhabditis sp. was put into petri plates. Nematophagous fungi effectively teduced the popuation of Rhabditis sp. in soil in a week or two following treatment of the incula at concentration of 1:50 and 1:100. The optimum was at $25^{\circ}C$ for nematicidial effect as high as 80-100%. The at the rate of 1:100 prepared incula were incorporated in auto-claved soil, where 100 Juveniles M. hapla were introduced per 80% soil. All fungi infected the M. hapla effectively in soil, caysing more than 90% mortality within one week. This result indicated the potential value of these fungi as promising biocontrol agents.
Lee, Sung Woo;Lee, Seung Ho;Seo, Moon Won;Park, Kyung Hoon;Jang, In Bok
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.26
no.5
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pp.345-353
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2018
Background: Some phenolics detected in the soil may inhibit the seed germination and seedling growth of ginseng (Panax ginseng). This study investigated the effect of irrigation and ginseng root residue addition on the soil microbial community and root rot disease in 2-year-old ginseng. Methods and Results: Each $20{\ell}$ pot was filled with soil infected with ginseng root rot pathogens, and irrigated daily with $2{\ell}$ of water for one month. After the irrigation treatment, ginseng fine root powder was mixed with the irrigated soil at a rate of 20 g per pot. In descending order, ${NO_3}^-$, electric conductivity (EC), exchangeable Na (Ex. Na) and K (Ex. K) decreased due to irrigation. In descending order, ${NO_3}^-$, EC, Ex. K, and available $P_2O_5$ increased with the additon of ginseng powder to the soil. The abundance of Trichoderma crassum decreased with irrigation, but increased again with the incorporation of ginseng powder. The abundance of Haematonectria haematococca increased with irrigation, but decreased with the incorporation of ginseng powder. The abundance of Cylindrocarpon spp. and Fusarium spp., which cause ginseng root rot, increased with the incorporation of ginseng powder. The abundance of Arthrobacter oryzae and Streptomyces lavendulae increased with irrigation. The abundance of Streptomyces lavendulae decreased, and that of Arthrobacter spp. increased, with the incorporation of ginseng powder. Aerial growth of ginseng was promoted by irrigation, and ginseng root rot increased with the incorporation of ginseng powder. Conclusions: Ginseng root residues in the soil affected soil nutrients and microorganisms, and promoted ginseng root rot, but did not affect the aerial growth of ginseng.
Members of the genus Bacillus are known to play an important role in promoting plant growth and protecting plants against phytopathogenic microorganisms. In this study, 21 isolates of Bacillus spp. were obtained from the root micro-ecosystem of Suaeda glauca. Analysis of the 16S rRNA genes indicated that the isolates belong to the species Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus velezensis, Bacillus subtilis, Bacillus pumilus, Bacillus aryabhattai and Brevibacterium frigoritolerans. One of the interesting findings of this study is that the four strains B1, B5, B16 and B21 are dominant in rhizosphere soil. Based on gyrA, gyrB, and rpoB gene analyses, B1, B5, and B21 were identified as B. amyloliquefaciens and B16 was identified as B. velezensis. Estimation of antifungal activity showed that the isolate B1 had a significant inhibitory effect on Fusarium verticillioides, B5 and B16 on Colletotrichum capsici (syd.) Butl, and B21 on Rhizoctonia cerealis van der Hoeven. The four strains grew well in medium with 1-10% NaCl, a pH value of 5-8, and promoted the growth of Arabidopsis thaliana. Our results indicate that these strains may be promising agents for the biocontrol and promotion of plant growth and further study of the relevant bacteria will provide a useful reference for the development of microbial resources.
For the control of pathogenic microorganisms, Bacillus spp. were isolated from diseased pepper fruits in Korea. Among them, Bacillus sp. IUB158-03 showed high inhibitory effect on mycelial growth and spore germination of C. gloeosporioides and Botrytis cinerea. The strain was identified as B. amyloliquefaciens IUB158-03 based on its physiological, biochemical characteristics and Microlog analysis. The highest level of antifungal substances by B. amyloliquefaciens IUB158-03 were obtained when the bacterium was cultured in medium containing 2% soluble starch, 3% yeast extract, 0.5% tryptone, 0.5% $NH_4H_2PO_4$, and 1% NaCl (pH 6.0) at $25^{\circ}C$ for 72 hrs. The antifungal substances were purified by butanol extraction, silica gel column chromatography, preparative thin layer chromatography, and high performance liquid chromatography. The purified antifungal substance was confirmed $R_f$ 0.27 by TLC. This substance exhibited antifungal activity against Fusarium solani, Rhizoctonia solani, Botrytis cineria, Alternata alternaria of plant pathogenic fungi and Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton floccosum, Cryptococcus neoformans of human pathogenic fungi.
For simple and rapid detection of Pseudomonas tolaasii (PT), a bacterial brown blotch pathogen of oyster mushroom, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) were developed. To produce specific antibody, PT ($5{\times}10^7$ cfu) and Freund's adjuvant were subcutaneously immunized into rabbits several times. By using the antiserum showing the highest titer, we established noncompetitive and competitive ELISA's. Standard curves of the ELISA's showed that the detection limits were $2{\times}10^2$cfu/ml and $3{\times}10^2$cfu/ml, respectively When investigated by noncompetitive ELISA, cross reactivities of the anti-PT antibodies against P. agarici, P. reactans, and other fluorescent Pseudomonas spp. were very low (<1/10$^3$), but those against P. solanacearum, Erwinia chrysanthemi, Streptococcus mutans, Xanthomonas citri, and a fungus Fusarium oxysporum were almost none. However, when investigated by competitive ELISA, the reactivities against any other strains except PT were almost none. When the ELISA's were applied to 18 strains derived from mushrooms in order to identify PT, only 11 strains showing both pathogenicity and white line reactivity were obviously positive. These results showed that the ELISA's could be convenient tools to detect PT in accordance with existing methods.
Hussein, Khalid Abdallah;Lee, Young-Don;Joo, Jin Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.30
no.7
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pp.1018-1026
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2020
Rosemary essential oil was evaluated for antifungal potentiality against six major ginseng pathogens: Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia nivalis, Cylindrocarpon destructans, Alternaria panax, Botrytis cinerea, and Fusarium oxysporum. The in vitro fungicidal effects of two commonly used fungicides, namely mancozeb and fenhexamid, and the volatile organic compounds (VOCs) of Trichoderma koningiopsis T-403 on the mycelial growth were investigated. The results showed that rosemary essential oil is active against all of the pathogenic strains of ginseng root rot, whereas rosemary oil displayed high ability to inhibit the Sclerotinia spp. growth. The highest sensitivity was S. nivalis, with complete inhibition of growth at 0.1% v/v of rosemary oil, followed by Alternaria panax, which exhibited 100% inhibition at 0.3% v/v of the oil. Minimum inhibitory concentrations (MICs) of rosemary oil ranged from 0.1 % to 0.5 % (v/v). Chemical analysis using GC-MS showed the presence of thirty-two constituents within rosemary oil from R. officinals L. Camphore type is the most frequent sesquiterpene in rosemary oil composition. Mancozeb and fenhexamid showed their highest inhibition effect (45% and 30%, respectively) against A. panax. T. koningiopsis T-403 showed its highest inhibition effect (84%) against C. destructans isolate. This study may expedite the application of antifungal natural substances from rosemary and Trichoderma in the prevention and control of phytopathogenic strains in ginseng root infections.
Kim, Young-Sook;Lee, Myeong-Seok;Yeom, Ji-Hee;Song, Ja-Gyeong;Lee, In-Kyoung;Yun, Bong-Sik
The Korean Journal of Mycology
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v.39
no.2
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pp.126-130
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2011
In the course of search for multifunctional microbial inoculants, three Bacillus strains (BS11-1,BS11-2,BS11-3) with biological control and biofertilizing effects were selected. In this study, their ability for solubilization of insoluble phosphate, production of indole-3-acetic acid (IAA), siderophore, and hydrolytic enzymes, and antagonism against phytopathogenic fungi were estimated. All strains produced IAA and siderophore depending on culture time and produced a visible clear zone on agar plate containing 0.5% carboxylmethyl cellulose as a carbon source. Also, these strains exhibited antifungal activities against phytopathogenic fungi, Botrytis cinerea, Cylindrocarpon destructans, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani, and Phytophthora capsici.
Bacteria were isolated from roots of sugarcane varieties grown in the fields of Punjab. They were identified by using API20E/NE bacterial identification kits and from sequences of 16S rRNA and amplicons of the cpn60 gene. The majority of bacteria were found to belong to the genera of Enterobacter, Pseudomonas, and Klebsiella, but members of genera Azospirillum, Rhizobium, Rahnella, Delftia, Caulobacter, Pannonibacter, Xanthomonas, and Stenotrophomonas were also found. The community, however, was dominated by members of the Pseudomonadaceae and Enterobacteriaceae, as representatives of these genera were found in samples from every variety and location examined. All isolates were tested for the presence of five enzymes and seven factors known to be associated with plant growth promotion. Ten isolates showed lipase activity and eight were positive for protease activity. Cellulase, chitinase, and pectinase were not detected in any strain. Nine strains showed nitrogen fixing ability (acetylene reduction assay) and 26 were capable of solubilizing phosphate. In the presence of 100 mg/l tryptophan, all strains except one produced indole acetic acid in the growth medium. All isolates were positive for ACC deaminase activity. Six strains produced homoserine lactones and three produced HCN and hexamate type siderophores. One isolate was capable of inhibiting the growth of 24 pathogenic fungal strains of Colletotrichum, Fusarium, Pythium, and Rhizoctonia spp. In tests of their abilities to grow under a range of temperature, pH, and NaCl concentrations, all isolates grew well on plates with 3% NaCl and most of them grew well at 4 to $41^{\circ}C$ and at pH 11.
Lewis-Lujan, Lidianys Maria;Rosas-Burgos, Ema Carina;Ezquerra-Brauer, Josafat Marina;Burboa-Zazueta, Maria Guadalupe;Assanga, Simon Bernard Iloki;del Castillo-Castro, Teresa;Penton, Giselle;Plascencia-Jatomea, Maribel
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.32
no.8
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pp.989-1002
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2022
Cephalopods, in particular octopus (Octopus vulgaris), have the ability to alter their appearance or body pattern by showing a wide range of camouflage by virtue of their chromatophores, which contain nanostructured granules of ommochrome pigments. Recently, the antioxidant and antimicrobial activities of ommochromes have become of great interest; therefore, in this study, the pH-dependent redox effect of the extraction solvent on the antioxidant potential and the structural characterization of the pigments were evaluated. Cell viability was determined by the microdilution method in broth by turbidity, MTT, resazurin, as well as fluorescence microscopy kit assays. A Live/Dead Double Staining Kit and an ROS Kit were used to elucidate the possible inhibitory mechanisms of ommochromes against bacterial and fungal strains. The results obtained revealed that the redox state alters the color changes of the ommochromes and is dependent on the pH in the extraction solvent. Natural phenoxazinone (ommochromes) is moderately toxic to the pathogens Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Salmonella Typhimurium and Candida albicans, while the species Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas fluorescens, and the filamentous fungi Aspergillus parasiticus, Alternaria spp. and Fusarium verticillioides, were tolerant to these pigments. UV/visible spectral scanning and Fourier- transform infrared spectroscopy (FTIR) suggest the presence of reduced ommatin in methanol/ HCl extract with high intrinsic fluorescence.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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