Various fermented foods were screened in search of food-grade bacteria that produce bacteriocins active against Gram-negative pathogens. An isolate from a mold-ripened cheese presented antibacterial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. The most active isolate was identified as Lactobacillus casei by a biochemical method, ribotyping, and membrane lipid analysis, and was designated as OSY-LB6A. The cell extracts of the isolate showed inhibition against Escherichia coli p220, E. coli O157, Salmonella enerica serovar Enteritidis, Salmonella Typhimurium, and Listeria monocytogenes. The antibacterial nature of the cell extract from the isolate was confirmed by eliminating the inhibitory effects of acid, hydrogen peroxide, and lytic bacteriophages. The culture supernatant and cell extract retained antibacterial activity after heating at $60{\sim}100^{\circ}C$ for $10{\sim}20$ min. The activity of the cell extract from Lb. casei was eliminated by pronase and lipase. Finally, the cell extract showed a bactericidal mode of action against E. coli in phosphate buffer solution, but it was bacteriostatic in broth medium and food extracts.
The development of rapid, infallible, and sensitive methods of detecting foodborne pathogens has received much impetus in recent years owing to an increased public awareness of the health hazards. For the rapid and simultaneous detection of these foodborne pathogens, a multiplex PCR method was developed. Yersinia enterocolitica, Staphylococcus aureus, and Shigella spp. are bacteria of concern because of their specific growing condition that enables them to live at low temperatures. In order to detect each pathogenic bacterium, specific primers from Y. enterocolitica, St. aureus, and Sh. flexneri were selected and validated successfully. To apply this method to food stored at low temperature, Y. enterocolitica, St. aureus, and Sh. flexneri were artificially inoculated in lettuce and incubated for enrichment. The multiplex PCR assays were able to simultaneously detect three pathogens, and the presence of three bands was observed at initial inoculation levels of approximately 1$\times$10$^1$ CFU/g in lettuce. Therefore, this method could be used for simultaneous detection of Y. enterocolitica, St. aureus, and Shigella spp. contaminated in lettuce during cultivation, transportation, preservation, and storage.
Antibiotic resistance of foodborne pathogens adapted to garlic (Allium sativum Linn.) was determined in order to understand the relationship between antibiotic resistance and garlic. The Gram (-) strains of Escherichia coli and Salmonella typhimurium and the Gram (+) strains of Bacillus cereus and Staphylococcus aureus were subcultured consecutively in a garlic broth, and the surviving colonies on the agar were selected as the adapted strains. Minimal inhibitory concentrations (MIC) for 15 antibiotics on the adapted strains were determined on Muller-Hinton Infusion agar. Adaptation to 1.3%(v/v) garlic juice increased MIC for vancomycin, aminoglycoside, and erythromycin on B. cereus, and for ampicillin and erythromycin on E. coli O157:H7. MIC of aminoglycosides, chloramphenicol, and vancomycin on the adapted S. aureus increased. The adapted S. typhimurium was more resistant to penicillin and vancomycin than the non-treated strain. The adapted S. typhimurium and S. aureus lost their antibiotic resistance in non-garlic stress conditions. However, the adapted B. cereus was still resistant to erythromycin and vancomycin, and the adapted E. coli was also resistant to erythromycin. Antibacterial garlic might increase the antibiotic resistance of E. coli, B. cereus, S. aureus, and S. typhimurium and this resistance can continue even without the stress of garlic. Therefore, garlic as a food seasoning could influence the resistance of such pathogens to these antibiotics temporarily or permanently.
Contamination by foodborne pathogens and mycotoxins was examined in 475 eggs and 20 feed samples collected from three egg layer farms, three egg-processing units, and five retail markets in Korea. Microbial contamination with Salmonella species, Escherichia coli, and Arcobacter species was examined by bacterial culture and multiplex polymerase chain reaction (PCR). The contamination levels of aflatoxins, ochratoxins, and zearalenone in eggs and chicken feeds were simultaneously analyzed with high-performance liquid chromatography coupled with fluorescence detection after the post-derivatization. While E. coli was isolated from 9.1% of eggs, Salmonella species were not isolated. Arcobacter species were detected in 0.8% of eggs collected from egg layers by PCR only. While aflatoxins, ochratoxins, and zearalenone were found in 100%, 100%, and 85% of chicken feeds, their contamination levels were below the maximum acceptable levels (1.86, 2.24, and 147.53 μg/kg, respectively). However, no eggs were contaminated with aflatoxins, ochratoxins, or zearalenone. Therefore, the risk of contamination by mycotoxins and microbes in eggs and chicken feeds is considered negligible and unlikely to pose a threat to human health.
The purpose of this study was to evaluate inhibitory activity of a bacteriocin mixture from lactic acid bacteria(LAB) against foodborne pathogens. Each bacteriocin solutions were prepared by growing nine strains of bacteriocin producers in MRS broth for 18~24 h followed by centrifugation(8000$\times$g, 20 min, 4$^{\circ}C$). Bacteriocins were purified from ammonium sulfate precipitation and were resuspended in 50 mM phosphate buffer(pH 7.0). Nine bacteriocins were mixed together and then allowed to freeze at -2$0^{\circ}C$. The mixture of nine bacteriocins showed enhanced inhibitory activity compared to each of bacteriocins and inhibited the Gram negative pathogens including Escherichia coli 0157:H7, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas chlororaphis and Shigella sonnei. The mixture of bacteriocin solutions was significantly lower than controls when a freeze-dried bacteriocin mixture was added to frank sausage, Mozzarella cheese and pork loin. With addition of bacteriocin mixture, total mesophilic bacteria in pork loin were constant over storage period, whereas total mesophilic bacteria in Mozzarella cheese and frank sausang slightly increased. Total viable cells of control group increased during storage without bacteriocin treatment. Volatile base nitrogen content of pork loin during storage also increased significantly without bacteriocin treatment. The bacteriocin mixture was capable of inhibiting pathogenic and spoilage microorganisms and extending the shelf-life of cheese and meat products during storage.
In recent years, consumers have become more interested in convenient lifestyles, leading to increased use of salted cabbages for preparation of kimchi. This study aimed to investigate the safety of heavy metals, pesticide residues, and foodborne pathogens in commercial salted cabbages in Seoul from August to November, 2014. The survey, which was conducted to determine whether or not salted cabbages were prepared under the highest sanitary conditions, showed that Seoulites are interested in purchasing hygienic and safe salted cabbages. The average amounts (range) of Pb and Cd found in 30 salted cabbage samples were 0.007 (0.000~0.063) mg/kg and 0.004 (0.000~0.012) mg/kg, respectively. The cabbages were analyzed for residues from 285 types of pesticides using the multiresidue method. Residues for pesticides were not detected. Major foodborne pathogens, specifically Escherichia coli, Salmonella spp., Listeria monocytogenes, Campylobacter jejuni, Staphylococcus aureus, Vibrio parahaemolyticus, Enterohemorrhagic Escherichia coli, Bacillus cereus, Clostridium perfringens and Norovirus, were also not detected.
Dong-Geun Park;Eun-Su Ha;Byungcheol Kang;Iseul Choi;Jeong-Eun Kwak;Jinho Choi;Jeongwoong Park;Woojung Lee;Seung Hwan Kim;Soon Han Kim;Ju-Hoon Lee
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.33
no.1
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pp.83-95
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2023
These days, bacterial detection methods have some limitations in sensitivity, specificity, and multiple detection. To overcome these, novel detection and identification method is necessary to be developed. Recently, NGS panel method has been suggested to screen, detect, and even identify specific foodborne pathogens in one reaction. In this study, new NGS panel primer sets were developed to target 13 specific virulence factor genes from five types of pathogenic Escherichia coli, Listeria monocytogenes, and Salmonella enterica serovar Typhimurium, respectively. Evaluation of the primer sets using singleplex PCR, crosscheck PCR and multiplex PCR revealed high specificity and selectivity without interference of primers or genomic DNAs. Subsequent NGS panel analysis with six artificially contaminated food samples using those primer sets showed that all target genes were multi-detected in one reaction at 108-105 CFU of target strains. However, a few false-positive results were shown at 106-105 CFU. To validate this NGS panel analysis, three sets of qPCR analyses were independently performed with the same contaminated food samples, showing the similar specificity and selectivity for detection and identification. While this NGS panel still has some issues for detection and identification of specific foodborne pathogens, it has much more advantages, especially multiple detection and identification in one reaction, and it could be improved by further optimized NGS panel primer sets and even by application of a new real-time NGS sequencing technology. Therefore, this study suggests the efficiency and usability of NGS panel for rapid determination of origin strain in various foodborne outbreaks in one reaction.
Kim, Tae-Yoon;Lee, Jin-Jae;Kim, Bong-Soo;Choi, Sang Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.27
no.10
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pp.1753-1762
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2017
Sea cucumber (Apostichopus japonicus) is a popular seafood source in Asia, including South Korea, and its consumption has recently increased with recognition of its medicinal properties. However, because raw sea cucumber contains various microbes, its ingestion can cause foodborne illness. Therefore, analysis of the microbiota in the whole body of sea cucumber can extend our understanding of foodborne illness caused by microorganisms and help to better manage products. We collected 40 sea cucumbers from four different sites in August and November, which are known as the maximum production areas in Korea. The microbiota was analyzed by an Illumina MiSeq system, and bacterial amounts were quantified by real-time PCR. The diversity and bacterial amounts in sea cucumber were higher in August than in November. Alpha-, Beta-, and Gammaproteobacteria were common dominant classes in all samples. However, the microbiota composition differed according to sampling time and site. Staphylococcus warneri and Propionibacterium acnes were commonly detected potential pathogens in August and November samples, respectively. The effect of experimental Vibrio parahaemolyticus infection on the indigenous microbiota of sea cucumber was analyzed at different temperatures, revealing clear alterations of Psychrobacter and Moraxella; thus, these shifts can be used as indicators for monitoring infection of sea cucumber. Although further studies are needed to clarify and understand the virulence and mechanisms of the identified pathogens of sea cucumber, our study provides a valuable reference for determining the potential of foodborne illness caused by sea cucumber ingestion and to develop monitoring strategies of products using microbiota information.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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