A total of 12 strains of fluorescent Pseudomonas isolated from the cultivated mushrooms such as Agaricus bisporus and Pleurotus ostreatus were collected. They consisted of pathogenic Pseudomonas spp. and epiphytic Pseudomonas spp. of the cultivated mushroom. To analyze the phylogenetic relationship of these strains, ITS I region, the 16S-23S intergenic spacer region in the ribosomal RNA (rRNA) operon, was cloned and sequenced. The spacer regions of these strains were 495∼527 nucleotides in length and contained the genes encoding isoleucine-tRNA (tRNAIle) and alanine-tRNA (tRNAAla). The reciprocal homologies of each ITS I sequence among these strains were in the range of 84.2%∼98.8%. According to the analysis of ITS I sequences, the fluorescent Pseudomonas spp. were phylogenetically classified into three clusters. Cluster I consisted of Pseudomonas fluorescens, P. tolaasii, P. gingeri’, and P.‘reactans’(WLRO). Cluster II comprised Pseudomonas fluorescens biovar C and F. Cluster III composed P. agarici. Cluster I and II could be classified into P. fluorescens complex. P. agarici formed an independent taxon clearly separable from P. florescens complex.
HU, HONG-BO;XU, YU-QUAN;FENG CHEN;XUE HONG ZHANG;HUR, BYUNG-KI
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권1호
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pp.86-90
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2005
Strain M-18 was isolated from the rhizosphere soil of sweet melon, using 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) as a sole nitrogen source. Its phenotypic characteristics, metabolic tests, and 16S rDNA sequence were analyzed. The antibiotics secreted by strain M-18 were determined to be phenazine 1-carboxylic acid and pyoluteorin. These data showed that strain M-18 was a new fluorescent Pseudomonas strain that produced both phenazine 1-carboxylic acid and pyoluteorin, some features being similar to Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas fluorescens. Therefore, the strain M-18 appears to be the first pseudomonad described to date that is capable of producing both phenazine 1-carboxylic acid and pyoluteorin.
본 시험은 재배이역(栽培履歷)이 서로 상이한 시설재배지에서의 염류집원적지(鹽類集源積地)와 건전지(健全地)의 미생물상(微生物相)의 생태(生態)를 비교해석(比較解析)하고, 미생물(微生物)적 진단(診斷)에 의한 근권환경(根圈環境)의 동태(動態)와 개량기술(改良技術)을 위한 기초자료를 얻고자 수행하였다. 주요 미생물(微生物)의 분포(分布)는 건전지(健全地)에서 형광성(螢光性) Pseudomonas 속 세균(細菌)의 밀도가 높은반면 염류장해지(鹽類障害地)에서는 병원성(病原性) Fuasarium 속의 밀도가 높고 형광성(螢光性) Pseudomonas 속 세균(細菌)이 낮은 분포밀도(分布密度)를 보였다. 토양중 유기물 함량이 증가할수록 Bacillus 속(屬), 형광성(螢光性) Pseudomonas 속(屬), Enterobacteriaceae 등 세균류(細菌類)의 밀도와 Microbial biomass C함량이 크게 증가하였으며, 토양의 전기전도도(電氣傳導度)(EC)가 $5.1dS\;m^{-1}$ 이상으로 높아지면 미생물(微生物)간의 비율중 세균(細菌)/사상균(絲狀菌)(B/F), 방선균(放線菌)/사상균(絲狀菌)(A/F)의 비율이 현저히 낮아지고 형광성(螢光性) Pseudomonas 속(屬) 세균(細菌)이 급격히 감소하였다. 토양 pH와 세균(細菌)과의 관계는 고도의 정(正)의 상관관계(相關關係)를, 사상균(絲狀菌)과는 부(負)의 상관관계(相關關係)를 보였으며, 토양유기물과 방선균(放線菌), Bacillus 속(屬), Enterobacteriaceae와는 각각 $r=0.226^*$, $r=0.334^{**}$, $r=0.276^{**}$, 치환성 Ca및 치환성 Mg함량과 방선균수(放線菌數)와는 각각 $r=0.334^{**}$, $r=0.352^{**}$, 유기물함량과 Microbial biomass C 함량과는 $R=0.439^{**}$의 유의성(有意性) 있는 상관을 보였다.
This study presents a fluorescent mechanism for two-step amplification by combining two widely used techniques, exponential amplification reaction (EXPAR) and catalytic hairpin assembly (CHA). Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) engaged in competition with the complementary DNA in order to attach to the aptamer that had been fixed on the magnetic beads. The unbound complementary strand in the liquid above was utilized as a trigger sequence to initiate the protective-EXPAR (p-EXPAR) process, resulting in the generation of a substantial quantity of short single-stranded DNA (ssDNA). The amplified ssDNA can initiate the second CHA amplification process, resulting in the generation of many double-stranded DNA (dsDNA) products. The CHA reaction was initiated by the target/trigger DNA, resulting in the release of G-quadruplex sequences. These sequences have the ability to bond with the fluorescent amyloid dye thioflavin T (ThT), generating fluorescence signals. The method employed in this study demonstrated a detection limit of 16 CFU/ml and exhibited a strong linear correlation within the concentration range of 50 CFU/ml to 105 CFU/ml. This method of signal amplification has been effectively utilized to create a fluorescent sensing platform without the need for labels, enabling the detection of P. aeruginosa with high sensitivity.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제35권2호
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pp.63-70
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2017
Native fluorescent pseudomonas bacteria were isolated from rhizosphere soil of mulberry and were evaluated against powdery mildew. In vitro conidial germination study showed significant (P<0.05) variation in conidial germination by bacterial strains Pf1 and Pf3. Mildew incidence was significantly varied due to treatment with various pseudomonas strains in vivo. Significantly (P<0.05) less mildew incidence was in plants treated with the bacterial strain Pf1 (9.11%) followed by Pf3 (13.48%) controlling 69.40% and 54.75% respectively compared with untreated control. Similarly, mildew severity was least (8.51%) in plants treated with strain Pf1 followed by Pf5 (9.23%) and Pf3 (9.72%) controlling the severity by 84.51%, 77.01% and 71.96% respectively compared with control. The bacterial strains significantly influenced biochemical constituents such as chlorophyll, protein and soluble sugar content of the mulberry leaf. Similarly, bacterial strains significantly increased the activity of the peroxidase (PO) and Polyphenol oxydase (PPO) activity from $7^{th}$ day up to the $28^{th}$ day after treatment. The strain Pf1, Pf3 and Pf5 exhibited a marked enhancement in the peroxidase at different periods of infection. Significant (P<0.01) negative correlation was found between powdery mildew severity with phenol content ($R^2=0.67$) as well as peroxidase ($R^2=0.92$) and polyphenol oxidase ($R^2=0.72$) activity thus confirms induction of systemic resistance in mulberry by pseudomonas bacteria. The study shows scope for exploration of rhizosphere fluorescent pseudomonas bacteria for induction of systemic resistance in mulberry to contain powdery mildew disease effectively.
Around and in the area of Wolgot-Muon, Gimpo-Gun, Kyunggi province, I examined total bacteria, general Pseudomonas spp., fluorescent Pseudomonas spp., in soil layers and also in different kinds of soil of respective diseased, uncultivated, and healthy areas, and found the followings. 1. In the diseased and uncultivated areas, the content of moisture and silt was greater than in the healthy area. 2. Contrary to the above, the healthy area contained a greater amount of inorganic elements such as $P_2O_5$, K, Ca and of soil particle such as Cs and Fs. The degree of pH and content of Mg were even in three types of soils. 3. Total bacteria were found in abundance in the healthy soil. It was observed that in all types of areas, bacteria reside in abundance in the rhizosphere, i.e., 10-15 cm layers and that the closer the surface, the greater the numbers of the bacteria. 4. General Pseudomonas spp. were also found to the greater in number on the surface of the soil, especially so in the rhizosphere, with the numbers decreasing as the soil layers increase. Numbers of this bacteria in all types of area were nearly uniform. 5. A great number of fluorescent Pseudomonas spp. were found in the diseased area, especially so in the rhizosphere.
토양의 특성과 재배 환경이 상이한 13개 토양을 대상으로 미생물의 다양성을 분석하여 토양 환경별 미생물상 지표의 기준을 설정하기 위해서 실험한 결과는 다음과 같다. 희석 평판법에 의한 토양별 미생물의 군집은 호기성 세균은 $2{\sim}27{\times}10^6$, 형광성 Pseudomonas는 $1{\sim}1364{\times}10^5$, 그람 음성 세균은 $1{\sim}126{\times}10^4$, 중온성 Bacillus는 $1{\sim}110{\times}10^5$ 범위로 토양간에 현저한 차이를 보였다. 특히 그람 음성 세균은 충북 음성 고추 재배지 (4번 토양)과 충북 괴산 고추 재배지 (6번) 토양이 현저히 많았고, 형광성 Pseudomonas는 경남 진주의 시설재배지 (7번 토양)에서 현저히 높은 군락을 형성하였고, 이 들 토양은 작물의 생육이 양호한 토양이었다. 따라서 시설재배인 토양에서는 그람 음성 형광성 Pseudomonas 및 mesophillic bacillus의 군집이 토양 환경 및 작물 생육과 미생물의 지표로서 가능성을 제시하였다. 13개 토양에서 분리한 579 균주 중 호기성 세균은 Agrobacterium 102 isolates, Bacillus 112 isolates, Pseudomonas 32 isolates, Kocuria 44 isolates, Paenibacillus 34 isolates 등의 다양한 군집을 이루고 있었고, 또한 624균주의 그람 음성 세균은 Pseudomonas 속이 51%로 제일 많은 군집을 이루고 있었는데 이 들 속내에는 Pseudomonas putica, Pseudomonas fluorescens 등이 많았고 그 다음으로는 Senotrophomonas maltophilia, Bukhodenis cepacia 순으로 다양한 군집을 이루고 있었다. RAPD 분석에 의한 Pseudomonas의 종 다양성은 토양에 따라서 4-31개의 균주 types을 보였으며 특히 4, 6번 토양에서 균주의 다양성이 높게 나타났다. 특히 형광성 Pseudomonas의 군집을 많이 이루었던 7번 토양에서는 26균주에서 5개 균주 types을 보여 종 다양성이 단수하였다. 토양 환경별 미생물 군집은 논 토양에서 신규 세균으로 추정되는 다수의 새로운 분리균이 출현되어 새로운 지표 미생물의 가능성을 제시 하였으며, 또한 MIDI 분석에서 no match 되는 분리균에 대한 미생물 자원의 이용성이 높이 평가되었다.
우사주변 경작지 토양으로부터 세포내 파이테이즈 (phytase) 생산능력이 우수한 Fluorescent Pseudomonas sp. BUN1 세균성 균주를 분리, 동정하였다. 그 균주로부터 유래한 BUN1 파이테이즈 (phytase) 효소를 각각 양이온, 음이온 크로마토그래피 기법을 이용하여 부분정제하여 효소적 특성을 규명한 결과, 각각 $40^{\circ}C$와 pH 5.5에서 최적의 효소활성을 나타내었다. BUN1 파이테이즈 (phytase)는 효소의 기질특이성 측면에서 다른 유기인산화합물에 비해 특히 피틴태인 (phytate)의 분해이용성이 매우 우수한 반면, 구리 ($Cu^{2+}$), 카드뮴 ($Cd^{2+}$), 아연 ($Zn^{2+}$)과 같은 금속 2 가이온에 대하여 그 효소활성이 강하게 억제되었다. 또한 BUN1 균주의 효소생산 배지 (PSM) [0.5% sodium phytate, 0.5% $(NH_4)_2SO_4$, 0.5% KCl, 0.01% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.01% $CaCl_2{\cdot}2H_2O$, 0.01% NaCl, 0.001% $FeSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.001% $MnSO_4{\cdot}4H_2O$; pH 6.5]에 탄소원으로서 옥수수전분 (corn starch)의 첨가는 조사된 다른 탄소 배지원에 비하여 현저하게 파이테이즈 (phytase) 생산을 촉진시켰다.
A plasmid vector containing two reporter genes, mer-lux and lac-GFP, was transformed to both Escherichia coli and Pseudomonas putida. Their cellular activities and biofilm characteristics were investigated in flow-cell units by measuring bioluminescent lights and fluorescent levels of GFP. Bioluminescence was effective to monitor temporal cell activities, whereas fluorescent level of GFP was useful to indicate the overall cell activities during biofilm development. The light production rates of E. coli and P. putida cultures were dependent upon concentrations of HgCl2. Mercury molecules entrapped in P. putida biofilms were hardly washed out in comparison with those in E. coli biofilms, indicating that P. putida biofilms may have higher affinity to mercury molecules than E. coli biofilms. It was observed that P. putida expressed GFP cDNA in biofilms but not in liquid cultures. This may indicate that the genetic mechanisms of P. putida were favorably altered in biofilm conditions to make a foreign gene expression possible.
Polychlorinated biphenyl are toxic pollutants and their degradation is quite slow in the environment. Recently, interest if bioremediation using PCB-degrading bacteria has increaset,. In a previous report, plant terpenes (p-cymene, (S)-(-)-limonene, ${\alpha}-pynene$, and ${\alpha}-terpinene$) have been found to be utilized by a PCB degrader and to induce the biphenyl dioxygenase gene in pure culture. In this study, Pseudomonas pseudoalcaligenes KF707, a PCB-degrading Gram-negative soil bacterium, was used to determine whether the terpene stimulation of PCB degrader occurred in the natural environment. First, P. pseudoalcaligenes KF707 was genetically tagged using a transposon with gfp (green fluorescent protein) as a reporter gone. The population dynamics of P. pseudoalcaligenes KF707 harboring gfp gene in a PCB-contaminated environment was examined with or without terpenoids added to the microcosm. About 10-100-fold increase was found in the population of PCB degraders when terpene was added, compared with control (non-terpenes samples and biphenyl added samples). It was proposed that the gfp-monitoring system is very useful and terpenes enhance the survivability of PCB degraders in PCB-contaminated environments.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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