• 한국식품영양과학회지
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• 제41권2호
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• pp.168-173
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• 2012

항혈전 효능을 탐색하기 위하여 한약재의 호장근 추출물로 혈전 용해능 활성과 혈액 응고시간 지연효과 즉 PT(prothrombin time), APTT(activated partial thromboplastin time)와 혈소판 응집억제 활성 등에 대해 항혈전 효능을 평가하였다. 혈전용해도를 측정하는 fibrin plate가 용해되어 형성된 투명환의 넓이를 측정하는 실험을 진행한 결과 혈전 용해도가 농도의존적으로 탁월한 효능을 나타내었다. 혈액응고 cascade에 미치는 영향을 알아보기 위해 혈액 응고시간 지연 및 단축 효과를 확인하고자 APTT와 PT에 미치는 영향을 조사한 결과 PT의 경우 대조군보다 단축됨을 보였다. APTT의 경우 농도의존적으로 우수한 지연효과를 보였다. 혈소판의 응집에 따라 형성되는 두 전극 사이에 형성된 전기적 저항의 변화로 나타나는 실험을 시행한 결과 호장근의 ADP로 유도한 결과에서 뛰어난 응집억제 활성을 보였다. 따라서 호장근을 향후에 혈전 질환의 치료제 개발에 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국지역사회생활과학회:학술대회논문집
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• 한국지역사회생활과학회 2009년도 추계학술대회
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• pp.83-83
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• 2009

암을 제외한 대부분의 성인병은 혈액순환과 관련된 혈관계 질환들로 이들에 의한 사망 비율의 합은 암의 비율과 비슷하게 나타나 혈관계 질환의 심각성을 나타내고 있다. 혈전에 의한 혈관계 질환은 혈전용해제와 트롬빈저해제를 이용하여 치료하고 예방할 수 있으며, a-glucosidase 저해제는 당뇨병 예방과 치료에 이용할 수 있다. 예로부터 민간요법에서 다양하게 이용되어 왔던 반하를 성인병 치료와 예방에 관련된 기능성식품의 자료로 사용하기 위해 반하 열수추출물을 유기 용매로 분획화하고 분획물의 혈전용해활성, 트롬빈저해활성, 혈당강하효과를 측정하였다. 혈전을 직접 용해하는 활성을 측정하기위해 100 mg/ml의 농도로 준비한 시료액을 fibrin plate 방법을 이용하여 혈전용해활성을 측정 결과 hexane 층, chloroform 층, ethyl acetate 층, butanol 층에서는 활성을 나타내지 않았지만 물 층에서 만 0.8 plasmin unit의 높은 혈전용해활성을 나타냈다. 혈전의 형성을 억제하기위해 혈전형성의 필수 효소인 트롬빈의 활성을 저해하는 트롬빈저해활성을 측정하기위해 10 배 희석한 (10 mg/ml) 시료 용액을 이용하여 트롬빈저해활성을 측정결과 hexane 층에서 75.3%의 높은 트롬빈저해활성을 나타냈으며, ethyl acetate 층과 chloroform에서도 각각 43.3%와 39.7%의 활성을 나타냈다. 또한 탄수화물의 소화를 지연시킴으로서 소장에서 포도당의 흡수를 억제하여 혈관내 당의 농도를 조절하는 혈당강하제의 개발을 위해 준비된 조효소액(10 mg/ml)을 이용하여 a-glucosidase 저해활성을 측정한 결과 ethyl acetate 층과 hexane 층에서 각각 24.9%와 23.4%의 저해활성을 확인하였다. 따라서 반하의 hexane 층과 ethyl acetate 층과 물층은 혈전관련 혈관계 질환과 당뇨병 관련 기능성 식품의 개발 소재로 이용할 수 있을 것으로 기대된다. 특히 최근 질병 치료에 효과는 크지만 부작용이 동반되는 화학약품들 대신 활성은 조금 뒤지지만 부작용이 없는 생약을 이용하려는 경향이 커지고 있다. 따라서 오랫동안 민간용법에서 사용되고 있는 반하는 안정성이 확인된 장점을 갖고 있어, 식품재료나 기능성 음료에 이용할 경우 장기간 섭취가 가능해 혈관계 질환의 치료와 예방에 큰 효과를 가져 올 수 있을 것으로 기대된다.

• 대한의생명과학회지
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• 제6권4호
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• pp.261-268
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• 2000

할미송이버섯으로부터 혈전용해효소 (FE-2)를 DEAE-cellulose, Mono-S column으로 분리 정제하였다. 이 효소는 분자량이 18.2 kDa 이었으며, ICP-MS (inductively coupled plasma mass spectrometer) 분석 결과 $Zn^{2+}$을 포함하고 있었다. 15번째까지의 N-terminal amino acid 서열은 A-L-Y-V-G-X-S-P-X-Q-Q-S-L-L-V이고, pH 7.5에서 활성이 가장 큰 염기성 단백질 분해효소로, EDTA와 1,10-phenanthroline에 의해 활성이 감소되는 metalloprotease였다. $Mg^{2+}$, $Zn^{2+}$, Fe$^{2+}$, Co$^{2+}$의 첨가 시 활성이 증가하였으나 Hg$^{2+}$의 경우 활성이 완전히 소멸되었다. 이 효소 (FE-2)는 단백질 분해효소 저해제인 E-64 (trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)-butane), PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride), pepstatin 과 2-mercaptoethanol의 영향을 받지 않으며, 섬유소원 (fibrinogen)과 반응 시 $A\alpha$ chain과 B$\beta$ chain은 분해시키지만 $\gamma$ chain과는 반응하지 않았다.

• 한국균학회지
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• 제28권1호
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• pp.60-65
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• 2000

할미송이버섯으로부터 3단계를 거처 분자량이 각각 18 kDa(FE-1)과 18.2 kDa(FE-2)인 두 개의 혈전용해효소를 분리 정제하였다. 이 효소들은 지금까지 알려진 혈전용해 효소의 질량에 비해 비교적 작았고 두 효소(FE-1과 FE-2)의 15번째까지의 N-terminal amino acid서열은 A-L-Y-V-G-X-S-P-X-Q-Q-S-L-L-V로 같았다. FE-1은 ICP-MS의 결과 $Zn^{2+}$을 mole당 0.98 mole 포함하고 있는 metalloprotease로 pH 7.5와 $55^{\circ}C$에서 가장 큰 활성을 나타내고, 1,10-phenanthroline의 첨가 시 저하된 활성은 $Zn^{2+}$나 $Co^{2+}$의 첨가에 의해 재생되었다.

• 한국균학회지
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• 제40권4호
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• pp.296-298
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• 2012

본 연구는 야생버섯으로부터 혈관계질환 관련 생리활성을 확인하여 혈관계질환을 위한 기능성식품 개발에 재료로 사용하기 위해 야생버섯 33종의 야생버섯 메탄올 추출물을 제조하여 심혈관계 질환 생리활성을 확인하였다. 긴대밤그물버섯(Boletellus elatus)과 벽돌빛뿌리버섯(Heterobasidion insulasis)이 높은 혈전용해 활성과 트롬빈저해효과, 항산화활성을 나타내 혈관계질환 치료나 예방을 위한 기능성식품 개발에 이용 가능할 것으로 기대된다.

• 한국균학회지
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• 제35권2호
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• pp.128-132
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• 2007

오대산에 자생하는 야생버섯 60종의 메탄올추출물을 이용하여 혈관계 질환과 당뇨병의 치료에 효과 있는 버섯을 확인하기위해, 혈전용해 활성과 ${\alpha}-glucosidase$ 저해 활성을 확인한 결과 11종의 버섯이 혈전용해 활성을 나타냈고, 6종의 버섯이 50% 이상의 ${\alpha}-glucosidase$ 저해 활성을 나타냈다. 뽕나무버섯류가 4.2 plasmin units의 가장 큰 혈전용해 활성을 나타냈으며, 독우산광대버섯, 미치광이 버섯류, 민자주방망이버섯이 2.3 plasmin units, 애괄대버섯은 2.1 plasmin units, 흰보라끈적버섯은 2.0 plasmin units 의 높은 혈전용해 활성을 나타냈다. ${\alpha}-Glucosidase$ 저해 활성 측정결과 노란다발버섯이 98.5%의 가장 큰 저해 활성을 나타냈고 비단그물버섯과 점마개버섯도 60% 이상의 높은 저해 활성을 나타냈다. 본 연구는 뽕나무벗섯류와 노란다발버섯은 혈관계질환 치료용 의약이나 기능성 식품으로 개발될 수 있음을 보여준다.

• 한국균학회지
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• 제39권3호
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• pp.189-193
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• 2011

아위버섯으로부터 성인병 치료와 예방 관련된 생리활성물질을 확인하고 이 물질의 추출을 위한 최적 조건을 확립하기위해 아위버섯 열수추출물과 유기용매 분획물을 사용하여 성인병 관련 생리활성을 측정하였다. 아위버섯 열수추출액에서는 작은 항산화효과. 트롬빈저해효과, 혈당강하효과가 확인되었지만 혈전용해효과는 나타나지 않았다. 그러나 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물에서 86.79%와 87.82%의 높은 항산화효과가 확인 되었으며, 에틸아세테이트 분획물에서 0.08 plasmin unit의 작은 혈전용해활성을 확인할 수 있었다. 클로로포름 분획물과 에틸아세테이트 분획물에서 74.90%와 71.88%의 높은 트롬빈저해효과와 함께 부탄올 분획물에서 49.67%의 혈당강하효과를 확인하였다. 따라서 아위버섯의 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물은 혈관계 질환을 위한 기능성 식품의 개발에 이용할 수 있을 것으로 판단된다.

• 대한의용생체공학회:학술대회논문집
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• 대한의용생체공학회 1996년도 춘계학술대회
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• pp.91-96
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• 1996

광반응을 이용하여 fibrinolytic 활성을 보이는 LK (lumbrokinase)를 생체재료인 PU (polyurethane) 표면에 고정화하는 방법에 관하여 연구하였다. 먼저 PU표면에 amino 작용기를 도입하기 위하여 side chain 작용기로 phenylazide 와 amino작용기를 갖는 AzPhPAL을 이용하였으며 광반응은 266nm 이상의 UV light을 약 1분간 조사시키는 방법을 이용하였다. LK를 amino작용기가 유도된 PU 표면에 공유결합시키기 위하여 amide결합 형성시 사용되는 수용성 carbodiimide인 EDC를 이용하였다. ESCA측정시, AzPhPAL으로 공유결합시킨 경우 반응하지 않은 PU표면에 비하여 N/C가 0.1717로, LK 고정시 S/C가 0.0043로 증가된것을 알 수 있었다. 이것으로부터 AzPhPAL과 LK가 PU표면에 공유결합된 것을 확인할 수 있었으며 static contact angle 측정으로 표면개질된 PU표면이 소수성에서 친수성으로 변화된 것을 확인 할 수 있었다. 또한 공유결합된 LK의 활성을 확인하기 위하여 fibrin plate test를 실시하였는데 그 결과 고정화된 후에도 LK의 활성이 존재함을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제31권2호
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• pp.327-337
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• 2021

Fibrinolytic enzymes with a direct mechanism of action and safer properties are currently requested for thrombolytic therapy. This paper reports on a new enzyme capable of degrading blood clots directly without impairing blood coagulation. This enzyme is also non-cytotoxic and constitutes an alternative to other thrombolytic enzymes known to cause undesired side effects. Twenty-four Bacillus isolates were screened for production of fibrinolytic enzymes using a fibrin agar plate. Based on produced activity, isolate S127e was selected and identified as B. subtilis using the 16S rDNA gene sequence. This strain is of biotechnological interest for producing high fibrinolytic yield and consequently has potential in the industrial field. The purified fibrinolytic enzyme has a molecular mass of 27.3 kDa, a predicted pI of 6.6, and a maximal affinity for Ala-Ala-Pro-Phe. This enzyme was almost completely inhibited by chymostatin with optimal activity at 48℃ and pH 7. Specific subtilisin features were found in the gene sequence, indicating that this enzyme belongs to the BPN group of the S8 subtilisin family and was assigned as AprE127. This subtilisin increased thromboplastin time by 3.7% (37.6 to 39 s) and prothrombin time by 3.2% (12.6 to 13 s), both within normal ranges. In a whole blood euglobulin assay, this enzyme did not impair coagulation but reduced lysis time significantly. Moreover, in an in vitro assay, AprE127 completely dissolved a thrombus of about 1 cc within 50 min and, in vivo, reduced a thrombus prompted in a rat tail by 11.4% in 24 h compared to non-treated animals.

• 한국식품영양과학회지
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• 제39권12호
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• pp.1832-1838
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• 2010

증강된 혈전용해활성을 갖는 starter를 이용한 발효조건의 최적화를 통하여 풍미가 향상된 청국장을 제조하기 위한 목적으로 전국 지역에서 유통되고 있는 청국장과 된장으로 부터 25개 균주를 분리한 후 단백분해 및 점질물 형성 효과를 갖는 7개의 Bacillus 균주를 선정하였다. 다음으로 청국장의 기능성을 증진시키기 위해 우수한 혈전용해활성을 갖는 균주를 starter로 이용하기 위해 fibrin plate법으로 활성을 검토한 결과, CJJN-4와 5가 tripticase soy broth에서 가장 높은 활성을 나타냄을 확인할 수 있었다. 한편, 혈전용해 능이 우수한 CJJN-4와 CJJN-5를 이용하여 $40^{\circ}C$와 $45^{\circ}C$에서 청국장을 발효한 후 활성을 측정한 결과에서도 2개의 균주 모두 우수한 활성을 확인할 수 있었다. 또한, 발효시간과 관계없이 $40^{\circ}C$에서 $45^{\circ}C$보다 활성이 높았으며, 특히 $40^{\circ}C$에서는 72시간까지 우수한 활성이 유지되었고 CJJN-4의 균주를 48시간 발효시킨 청국장에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 발효균주 및 온도에 따른 발효 시의 pH 변화에서는 $40^{\circ}C$의 경우에는 균주 간에 유의적인 차이를 보이지 않았으나, $45^{\circ}C$에서는 CJJN-4로 발효된 청국장에서 60시간까지 $40^{\circ}C$에서 발효된 청국장 또는 CJJN-5로 조제한 청국장보다 낮은 pH를 보여주었다. 발효조건에 따른 풍미변화에서는 먼저, 청국장의 구수한 맛을 주는 아미노태 질소 함량의 경우에는 $40^{\circ}C$에서 72시간 발효시킨 결과, 1,139.6 mg%(CJJN-4)와 1027.6 mg%(CJJN-5)의 높은 함량을 보여주었으며 아미노태 질소의 생성속도에서도 $40^{\circ}C$가 $45^{\circ}C$보다 빠른 결과를 나타내었다. 그러나 청국장의 불쾌취를 유발하는 암모니아태 질소 함량의 경우에는 $40^{\circ}C$에서 CJJN-4와 5로 조제된 청국장이 $45^{\circ}C$에서 CJJN-5의 청국장보다 낮은 함량을 보여 주었다. 이러한 결과로부터 CJJN-4의 starter를 이용하여 $40^{\circ}C$에서 발효된 청국장은 아미노태 및 암모니아태 질소 함량의 변화에 따른 개선된 풍미와 함께 우수한 혈전용해활성을 가지고 있음을 알 수 있었다.