Fibrionolytic activity(FA) of kimchi in rat and FAs of water and methanol extracts of kimchi ingredient were determined using fibrin plate method to see where the active principles for FA are present in kimchi. Nine Sprague-Dawley per each group were fed diet containing 3, 5 or 10% of freeze dried kimchi for 6 weeks. The FA of plasma obtained from 10% kimchi group showed stronger FA than that of control. FAs of 3 and 5% kimchi group were not noticeable. FA from methanol extract of kimchi was approximately 6 times higher than that from water extract assuming that the active material may be present in a fat soluble fraction. From water extract of kimchi ingredients, dropwort, green onion, radish and baechu showed FA in descending order. And from methanol extracts, red pepper powder, radish, green onion and baechu showed FA in decending order. The Fa of methanol extract of red pepper powder was the most noticeable among samples.
Physiological activities of hot water extract and solvent fractions isolated from Astragalus membranaceus were examined and the antioxidative, fibrinolytic, thrombin inhibitory and a-glucosidase inhibitory activity were measured. The hot water extract of Astragalus membranaceus was fractionated into hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and water fractions, and each of these fractions was individually assayed. The antioxidative activities of ethyl acetate and chloroform fractions were 89.96% and 87.36%, respectively. Using the fibrin plate method, only the hot water extract showed a plasmin activity of 0.41 units/ml. The thrombin inhibitory activity of the ethyl acetate fraction was the highest with a value of 82.73%. The hot water extract displayed a-glucosidase inhibitory activity of 64.91%. In conclusion, the hot water extract and the ethyl acetate fraction can be used as materials for the development of biofunctional foods to prevent cardiovascular diseases.
An anticoagulant protein was purified from the edible portion of a blood ark shell, Scapharca broughtonii, by ammonium sulfate precipitation and column chromatography on DEAE-Sephadex A-50, Sephadex G-75, DEAE-Sephacel, and Biogel P-l00. In vitro assays with human plasma, the anticoagulant from 'S. broughtonii, prolonged the activated partial thromboplastin time (APTT) and inhibited the factor LX in the intrinsic pathway of the blood coagulation cascade. But, the fibrin plate assay did not show that the anticoagulant is a fibrinolytic protease. The molecular mass of the purified S. broughtonii anticoagulant was measured to be about 26.0kDa by gel filtration on a Sephadex G-75 column and SDS-PAGE under denaturing conditions. The optimum activity in the APTT assay was exhibited at pH 7.0-7.5 and $40-45^{\circ}C$ in the presence of $Ca^{2+}$.
Choi, Hong Min;Moon, Hyo Jung;Kim, Se Gun;Jang, Hye Ri;Woo, Soon Ok;Bang, Kyeong Won;Han, Sang Mi
한국양봉학회지
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제33권4호
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pp.303-306
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2018
Drones of honeybee (Apis mellifera) have been regarded as a useful value only when mating with queen bee. However, the drone pupae have been reported to be nutritionally valuable, and a potential beekeeping product. In this study, drone pupae extracted with 5% acetic acid were used to measure anti-thrombosis related fibrinolytic activity using Strup and Mullertz fibrin plate method. As a result, the drone pupae extract showed higher effect of fibrinolytic activity(clear zone diameter 20.83mm) compared to the human plasmin (clear zone diameter 12.93mm) used as a positive control. It was suggested that the extract of drone pupae can be developed as a functional material helping prevention or treatment of various vascular diseases.
Fibrinolytic activity of fermented kimchi and ingredients used for the preparation were assayed by measuring the lysis area on plasminogen-rich fibrin plate. Fermented kimchi and picked fish sauces from changlan, prwan, and anchovy showed the activity, and the activity of pickled fish sauces were high in the order of pickled changlan, picked anchovy(pickled mulchi), and pickled prawn. However, the activity of kimchi may not be attributed to pickled fish sauce because kimchi containing fish sauce did not possess activities were determined from the samples heated for 30min at 100$\circ$C. There was no changes in activities before and after heat treatment indicating the agents may be components other than protein. Since major changes occur during kimchi fermentation were increased sour taste due to production of organic acids such as lactic, citric, oxalic, and succinic acids, the authentic organic acids present were examined for fibrinolytic activities. The results indicates that the major component posses the activity is lactic acid.
흑두청국으로부터 분리된 혈전용해력이 우수한 Bacillus subtilis BB-1(KFCC 11344P)으로부터 혈전용해효소 유전자를 PCR법에 의해 크로닝하였고 이를 BCF-1으로 명명하였다. BCF-1의 DNA 염기서열결정 결과 1,145 bp 크기의 혈전용해 효소로, 일본의 natto로부터 분리된 nattokinase 유전자와 99%의 상동성을 보임을 확인하였다. 혈전용해효소 유전자의 발현을 위하여 Bacillus 발현계인 Bacillus-E. coli의 shuttle vector인 pEB vector에 크로닝 하고 host로서 B. subtilis 168에 형질전환시켜 대량 발현시켰다. 생산된 혈전용해효소의 최 적활성 pH와 온도는 7.0과 $35^{\circ}C$로 확인되었다, 기질에 대한 분해양상을 조사한 결과 fibrin에서만 특이적으로 강한 분해가 일어났으며, skim milk에서 아주 약한 분해능을 보였으나 blood agar, gelatin, casein에서는 전혀 분해능을 보이지 않았다. 특히 blood agar plate에서 분해능이 없는 것으로 보아 혈액 내에서의 적혈구 파괴현상과 같은 부작용에 대한 위험을 배제할 수 있을 것으로 사료된다. BCF-1에 의해 생산된 혈전용해효소는 fibrin 특이적으로 활성을 나타냄을 확인할 수 있으며, 이는 임상적이나 산업적으로 적용하였을 때 부작용에 대한 위험적인 문제는 배제될 수 있으리라 생각된다.
송이(Tricholoma matsutake Sing.)는 맛과 향기가 뛰어난 고급 기호식품으로서 연간 5,000만 불 이상 수출되어온 고부가가치 작물 중의 하나이다. 본 연구는 냉동송이의 해동시에 유출되는 송이즙의 생리활성을 탐색하고자 항산화 활성, 혈전용해 활성, 항고혈압 활성 등을 측정하였다. 그 결과로 송이즙의 DPPH 라디칼 소거능은 1.0 mg/mL의 농도에서 $48.3{\pm}2.2%$였으며 농도의존적으로 그 활성이 증가하는 경향을 보였다. Fibrin-plate법을 사용하여 알아본 송이즙의 혈전용해 활성은 양성대조구인 plasmin(1 unit/mL)에 비해 약 2배가량 높은 활성을 보였다. 송이즙의 $IC_{50}$은 $1.03^{\circ}$Brix로 나타났으며 양성대조구로 사용된 captopril의 경우에는 약 45.7 nM이었다. 이러한 결과를 종합해 볼 때, 송이즙은 우수한 생리활성을 보임으로써 좋은 가공원료로 이용할 가치가 있음을 확인하였다.
GABA 함량이 높은 청국장을 발효하는 Bacillus subtilis MC 31의 청국장 품질특성을 조사하였다. B. subtilis MC 31에 의해 발효된 청국장으로부터 24개의 아미노산이 검출되었고 그 중에서도 leucine이 가장 높은 함량을 나타냈다. B. subtilis MC31에 의해 발효가 된 청국장의 미생물의 생육 변화를 조사한 결과 총 균수가 정지기에 들어서면서 log $9.52{\pm}0.5$~log $9.049{\pm}0.5$ CFU/g까지 증가하였다. 청국장의 일반성분은 수분 $61.7{\pm}0.01%$, 회분 $1.52{\pm}0.01%$, 조단백 $17.66{\pm}0.04%$, 조지방 $8.96{\pm}0.03%$, 조섬유가 2.61%를 함유하였다. 암모니아태, 아미노태, 환원당은 모두 삶은 콩보다 청국장의 함량이 높게 조사되었지만 산도와 총 당은 청국장이 삶은 콩보다 함량이 낮았다. 청국장의 pH는 시간이 지날수록 알칼리화되고 점질물은 $4.7{\pm}0.05%$, protease activity는 $0.519{\pm}7.36$ g/l로 나타났으며 Fibrin plate와 Robbin실험을 통하여 fibrinolytic activity도 높음을 확인하였다. 이상의 결과로 미루어 보아 B. subtilis MC 31은 우수한 청국장 품질을 띄어 제조용 균주로 사용이 가능한 것으로 사료된다.
혈전용해효소를 생산하는 균주 분리를 위해서 우선 한국, 일본 등지에서 모은 21개의 청국장 시료를 준비하였고 총 268개의 균주를 분리하였다. 이 중에서 1% skim milk가 포함된 nutrient agar 배지에서 protease를 생산하는 bacteria를 분리하였고, 이 결과로 22개의 균주가 분리되었다. 균주들은 apiweb을 통해 생화학적 특성에 근거하여 동정하였다. 또한 세균동정을 위해 16S rRNA 염기서열 분석을 수행하였다. 분리된 대부분의 균주는 Bacillus subtilis와 Bacillus amyloliquefaciens였다. 혈전용해효소의 활성은 fibrin plate 방법에 의해 측정되었고 A2-14, A2-20, C1-05, C1-09, F2-01로 명명된 다섯 균주가 선택되었다. 이중에서 A2-20 균주는 강한 혈전용해 활성을 보였고 동정결과 Bacillus amyloliquefaciens에 가까웠다. A2-20 균주에 의해 생산되는 혈전용해효소는 균 상등액을 이용한 gel filtration과 ion exchange chromatography를 거쳐 부분정제 되었다. 부분 정제된 효소의 최적 pH는 7.0이었고, 최적 온도는 $35^{\circ}C$였다. 정제된 단백질의 분석은 SDS-PAGE와 zymography로 이루어졌다. 이와 더불어 혈전용해효소의 유전자적 분석도 수행되었으며 A2-20 균주가 생산하는 혈전용해효소의 부분적인 염기서열과 유전적 상동성을 보이는 서열을 규명하였다.
In this study, the biological activities of Glycyrrhiza uralensis were investigated, including antioxidative, fibrinolytic, thrombin inhibitory, and a-glucosidase inhibitory activity. The hot water extract of Glycyrrhiza uralensis was fractionated into hexane, $CHCl_3$, ethyl acetate, butanol, and water fractions, and each of these fractions were assayed individually. The water fraction showed the highest extraction yield of 19.45% (w/w). Using the DPPH method, the free radical scavenging activity was to be the strongest in the $CHCl_3$ fraction at 89.3%. Using the fibrin plate method, only the butanol fraction showed a substantial plasmin activity of 0.62 units/ml. In thrombin inhibitory activity tests, a 100-fold dilution of the ethyl acetate fraction showed the strongest activity of 46.9%. In the a-glucosidase inhibitory activity assay, a 100-fold dilution of the $CHCl_3$ fraction showed the strongest activity of 80.6%. In conclusion, the combined results of this study demonstrate that the extracts of Glycyrrhiza uralensis can be used as a material for the development of biofunctional foods for diabetics.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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